安徽科技学院学报，２０１３，２７（５）：３８—４４ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 核酸适体及其在食品安全领域的应用 王（安徽科技学院丽，桑宏庆 凤阳２３３１００） 食品药品学院，安徽摘要：核酸适体作为一种具有替代抗体潜能的新型仿生生物识别元素，是近年来研究的热点。在食品安 全领域，抗生素、重金属、食源性致病菌、生物毒素等多种物质的核酸适体已被成功筛选和应用。本文介绍 了核酸适体的特点和优势、识别靶分子的机制、体外筛选的流程，综述了核酸适体在食品安全领域的应用 研究进展。 关键词：核酸适体；食品安全；分子识另·ｌ；指数富集的配体系统进化 中图分类号：ＴＳ２０７．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—８７７２（２０１３）０５—００３８—０７ Ａｐｔａｍｅｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ ＷＡＮＧ Ｌｉ，ＳＡＮＧ Ｈｏｎｇ—ｑｉｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ，Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ ２３３ １００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｐｔａｍｅｒｓ，ａｓ ｎｅｗ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｒｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏ—ｆ ＣＵＳ ｒｅｃｅｎｔｌｙ．Ａｐｔａｍｅｒｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｃｌａｓｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ ｉ— ｏｎｓ，ｆｏｏｄｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，ｂｉｏｔｏｘｉｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒｓ ｉｎ ｆｏｏｄ ｓａｆｅｔｙ，ａｎｄ ｖａｒｉｏｕｓ ａｐｔａｍｅｒ—ｂａｓｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅｍ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ，ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ，ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｏｆ ａｐｔａｍ— ｅｒｓ ｗｅｒｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ．Ｒｅｃｓｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｏｆ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｂｏｕｔ ａｐｔａｍｅｒｓ ｉｎ ｆｏｏｄ ｓａｆｅｔｙ ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｐｔａｍｅｒ；Ｆｏｏｄ ｓａｆｅｔｙ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ；Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈ— ｍｅｎｔ（ＳＥ ＬＥＸ） １９９０年，Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ等人 和Ｔｕｅｒｋ等人 分别在Ｎａｔｕｒｅ和Ｓｃｉｅｎｃｅ上发表了关于体外筛选６种有机小 分子染料和特异性结合噬菌体Ｔ４ ＤＮＡ聚合酶（ｕ）４３）的核酸分子的文章，并称这种核酸分子为“适体”。 适体（Ａｐｔａｍｅｒ）来源于拉丁语ａｐｔｕｓ（意为“匹配”）和希腊语词缀ｍｅｒｏｓ，亦称为“核酸适体”或“适配子”。 它是通过指数富集的配体系统进化（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ，ＳＥＬＥＸ）技 术，从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中，反复筛选得到的能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合 的某些寡核苷酸序列 “】，一般由几十个核苷酸（２０—６０ ｎｔ）组成，可以是ＲＮＡ或单链ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）。经 过２０多年的发展，核酸适体已成熟为新一代靶分子特异性识别结合体，在疾病诊断及治疗、分子识别及进 化机制、药物筛选及活性机理研究、分析检测等众多领域得到了广泛应用。 １ 核酸适体的特点和优势 核酸适体的出现使抗体技术受到了前所未有的挑战，与抗体等蛋白质类特异性识别结合体相比，适体 具有多方面的应用优势。 （１）识别的靶分子范围广：核酸适体识别的靶分子可以是生长因子、酶、抗体、毒素等蛋白质类生物大 分子 －８］，也可以是有机染料、多肽、核苷、氨基酸、糖类、小分子药物、金属离子等小分子物质 收稿日期：２０１３一Ｏ５一Ｏ７ ，甚至 基金项目：国家自然科学基金项目（３ｔ２ｏ￣３６９）。 作者简介：王丽（１９７７一），女，河南省荥阳县人，博士，副教授，主要从事食品安全与检测研究。 第２７卷第５期 王丽，等核酸适体及其在食品安全领域的应用 ３９ 可以是细胞、细菌及病毒等完整生命体ｎ ，理论上自然界存在的任何物质都可以通过ＳＥＬＥＸ技术筛选 到其相应的核酸适体。 （２）亲和力强：核酸适体对靶分子具有紧密的结合能力，经过多次筛选的适体，平衡解离常数（Ｋｄ）可 以达到１０一ｍｏｌ／Ｌ～１０ ｍｏｌ／Ｌ之间¨ ，这种能力通常高于抗体对抗原的识别及结合能力，有些甚至强于 其天然配体。 （３）特异性强：核酸适体与靶分子之间具有严格的识别能力，配体方面极其细微的变化即可被适体感 知，例如茶碱和咖啡因的结构非常相似（茶碱分子７一Ｎ上的Ｈ被甲基取代后即咖啡因），但能识别茶碱的 ＲＮＡ适体不能识别咖啡因分子 引。核酸适体甚至可以区分手性异构体、识别同一蛋白的不同构象和不 同功能状态。 （４）制备方便、易于合成：核酸适体无免疫原性，体外筛选不依赖动物或细胞。ＳＥＬＥＸ筛选周期一般 只需２～３个月，利用高效的筛选技术如自动筛选、毛细管电泳筛选只需要２—４ｄ。此外，筛选到的适体为 序列明确的寡核苷酸分子，相对分子质量小，通过化学合成很容易获得高纯度的适体。 （５）适体的分子修饰和标记比较容易：适体可以非常容易的进行磷酸化修饰、巯基化修饰、生物素标 记、荧光标记以及酶标记等，因此适体可与多种分析方法相结合。 （６）适体稳定性好，可长期保存：核酸适体稳定性好，在常温下可以运输，冻成干粉后可长期保存，适 当溶解后又可以恢复其功能构像。 ２核酸适体识别靶分子的机制 核酸适体的出现，冲破了传统意义上核酸只是遗传信息存储和转运载体的认识，但核酸适体本质上就 是一段寡核苷酸（ＤＮＡ或ＲＮＡ），那么为什么核酸适体与靶分子的可以特异性结合呢？采用核磁共振、ｘ 射线晶体衍射、原子力显微镜、单分子荧光成像、表面等离子共振等手段可以从结构上对核酸适体与靶分 子的作用机理进行较为深入的研究。高分辨的适体与靶分子复合物的三维结构研究发现，适体与各种配 体的结合是通过范德华力、“假碱基对”的堆积作用、氢键作用、静电作用和形状匹配等自身发生适应性折 叠，形成一些稳定的三维空间结构，如发卡（Ｈａｉｒｐｉｎ）、假结（Ｐｓｅｕｄｏ ｋｎｏｔ）、凸环（Ｓｔｅｍ ｌｏｏｐ）、Ｇ一四分体（Ｇ ｑｕａｒｔｅｔ）、鼓包（Ｂｕｌｇｅ）等 。 Ｎｇｕｙｅｎ等 叫利用核磁共振波谱法研究了孔雀石绿与其ＲＮＡ适体的相互作用，发现孔雀石绿在其核 酸适体的诱导下产生了电荷分布及构象的变化，从而认为核酸适体与孔雀石绿的识别是二者相互诱导形 成的。目前研究比较成熟的凝血酶适体是由２９个脱氧核糖核酸适体组成，形成两个Ｇ一四分体结构的三 维结构，凝血酶适体与凝血酶主要是通过Ｇ一四分体结构与凝血酶侧链上的Ａｒｇ１２６、Ｌｙｓ２３６、Ｌｙｓ２４０和 Ａｒ＠３这几个在生理条件下带正电荷的氨基酸之间的静电相互作用 。“假碱基对”的堆积作用是指配 体的芳香环部位与核酸适体分子的碱基平面平行，并有重叠，类似于核酸分子里的碱基堆积作用，如茶碱 的芳香环能与其核酸适体分子里的碱基重叠而发生相互作用¨引。氢键作用在核酸适体与靶分子识别中 也扮演着重要角色，例如适体对精氨酸的识别是因为精氨酸与核酸适体的碱基形成了较强的氢键 。 ３核酸适体的体外筛选流程 ＳＥＬＥＸ技术是体外筛选核酸适体的基本方法，ＳＥＬＥＸ技术摆脱了对生物系统的依赖性，是一种以组 合化学技术、ＰＣＲ技术以及基因克隆测序技术等为基础的分子进化工程技术。ＳＥＬＥＸ技术的总体思路是 利用组合化学的原理体外设计合成随机寡核苷酸文库，经过多轮的体外筛选和富集，最终获得与靶分子以 高亲和力、高特异性结合的目标寡核苷酸。ＳＥＬＥＸ技术的流程如图１所示，主要包括以下几个关键步骤。 （１）随机寡核苷酸库的合成：ＳＥＬＥＸ筛选首先要利用组合化学的原理设计随机寡核苷酸库（ｓｓＤＮＡ或 ＲＮＡ），随机寡核苷酸文库一般包括两端的引物结合区和中间随机区，引物结合区（一般ｌ５—２５个碱基） 用于筛选过程中ＰＣＲ的扩增，中间的随机区使文库具备了丰富的多样性。一般随机区序列长度是３０—４Ｏ 个碱基，即理论上至少有１０ ～１０ 个寡核苷酸序列，实际上能达到ｌ０Ｍ一１０ 个寡核苷酸序列即可满足首 轮筛选需要。此外，进行ＲＮＡ适体筛选的随机寡核苷酸库由模板ｅＤＮＡ随机寡核苷酸库经体外转录而 来，在合成ｅＤＮＡ随机寡核苷酸库时要预先将Ｔ７ＲＮＡ多聚酶启动子序列引入其５ 端固定序列中，以便体 安徽科技学院学报 ２０１３正 外转录。 （２）随机寡核苷酸库与靶标分子的结合：将随机的寡核苷酸库与靶分子在一定的缓冲体系中孵育一 段时间，随机寡核苷酸与靶分子相互作用、相互识别发生适应性折叠形成核苷酸一靶分子的复合物。根据 靶分子的特性一般选择室温或者３７℃进行孵育，此外缓冲体系的离子强度及ｐＨ值也要根据靶分子的特 性不同进行优化。靶标分子的浓度也可以随着筛选轮数的增加进行改变和调整，以调整筛选压力。 （３）未结合寡核苷酸的分离：利用一定的分离手段将未结合的寡核苷酸与核苷酸一靶分子的复合物 进行分离。目前比较常用的分离方法有纤维素膜分离、亲和层析、磁珠分离、凝胶分离等。 （４）寡核苷酸的洗脱及扩增：将筛选到的核苷酸一靶分子复合物中的核酸通过洗脱等手段进行分离 及扩增。如果筛选的是ＤＮＡ适体，进行ＰＣＲ扩增；如果筛选的是ＲＮＡ适体进行ＲＴ—ＰＣＲ扩增，５ 端的引 物需包含一段１＿７启动子序列，它可识别ＤＮＡ转录为ＲＮＡ时所必须的Ｔ７ＲＮＡ聚合酶。 （５）次级寡核苷酸库的生成：经过ＰＣＲ扩增获得的ｄｓＤＮＡ需要经过拆分得到目标的ｓｓＤＮＡ才能进入 下一轮的筛选。目前获得ｓｓＤＮＡ生成次级寡核苷酸库的方法主要有核酸外切酶法、变性高效液相色谱 法、不对称ＰＣＲ法、磁珠捕获法等。 （６）克隆测序：重复上述筛选、分离、扩增、ｓｓＤＮＡ的制备等步骤，随着筛选轮数的增加与靶分子特异 性结合的核苷酸呈指数增加、亲和力低的逐渐被淘汰。经过若干轮的筛选，对最后一轮筛选的产物进行克 隆测序。 （７）适体的鉴定：对筛选到的寡核苷酸序列进行一级结构序列比对和二级结构的预测，进行亲和力、 特异性的分析鉴定。 ｃＩ ｔＩ９一，——＼．．冀‘ －．．ｃＩ婀 ｏｆｔ．ＩＩ ｋｃ．Ｉｄ——＋厂ｉｎｄ ＾ｄ、．尊 ‘Ｉｎ∞ ｍ ：ｉｓ 砷憎咐ＰｏｏＩ ＼ ｜删／／．ｂｉ 幛 血Ｉ ＲＮ＾ ＤＮ＾ｐｏ｜删…一 ｎｕｍ￣ｉｆｉｃａｒｆｉｏｍ 图１ ＳＥＬＥＸ技术的流程 】 Ｆｉｇ．１ Ｆｌｏｗ ｇｒａｐｈ ｏｆ ＳＥＬＥＸ［ ］ ４核酸适体在食品安全领域的应用 目前，食品安全是人们关注的焦点问题。近年来随着适体技术的发展，越来越多的食品有害物质的核 酸适体被成功筛选。一些以核酸适体作为识别元件融合生物传感器技术、纳米技术的新型检测方法不断 涌现，在食品安全领域有着广阔的应用前景。 ４．１在抗生素分析中的应用 目前由于抗生素的滥用，抗生素残留超标引起的食品安全问题越来越受到人们的关注。以抗体为关 键识别元素的方法需要制备高质量的抗体，而抗生素大部分属于半抗原，作为免疫原获得各种抗生素的抗 第２７卷第５期 王丽，等核酸适体及其在食品安全领域的应用 ４１ 体比较困难，核酸适体技术的出现为抗生素残留的检测提供了新的思路。近年来已经有多种抗生素的核 酸适体被筛选获得并在检测中得以应用。目前人们已经筛选获得了卡那霉素Ａ 引、卡那霉素Ｂ 、土霉 素 ｌ４］、四环素 、新霉素 引、氯霉素 素Ａ＿３ 等的多种抗生素的核酸适体。 、莫诺霉素Ａ 引、蒽环类抗生素 、青霉素类抗生素 、环孢霉 ｄｅｌｏｓ—Ｓａｎｔｏｓ—ａｌｖａｒｅｚ等 发明了电化学适体传感器检测牛奶中的新霉素Ｂ，线性范围为２５— ２５００ｉｘｍｏｌ／，Ｌ。２００９年，ｄｅｌｏｓ—Ｓａｎｔｏｓ—ａｌｖａｒｅｚ等－３ 又利用表面等离子共振技术设计了用于新霉素Ｂ检测 的光学适体传感器，线性范围为１０ｎｍｏｌ／Ｌ～１００１ｘｍｏｌ／Ｌ。２００９年，Ｋｉｍ等 利用他们筛选的土霉素的 ＤＮＡ适体为分子识别元件，发明了电化学生物传感器用于土霉素的检测，线性范围为１一ｌＯＯｎｍｏｌ／Ｌ。 ２０１０年，Ｋｉｍ等［３５ 又以他们筛选获得的四环素ＤＮＡ适体为分子识别元件，构建了用于四环素检测的电化 学生物传感器，对四环素的最低检出限为１０ｎｍｏｌ／Ｌ，线性检测范围在０．０１～１０Ｉｘｍｏｌ／Ｌ。Ｓｏｎｇ等 刮将适 体与纳米金有机结合构建了卡那霉素的色度生物传感器，检出限达到２５ｎｍｏｌ／Ｌ。范婷等 构建了检测青 霉素类抗生素的电化学生物传感器，通过循环伏安扫描对青霉素类抗生素检测，检测限可达２．８１ｎｍｏｌ／Ｌ，线 性范围在２．８１～２８１ｎｍｏｌ／Ｌ。 ４．２在金属离子分析中的应用 目前，基于核酸适体的Ｈｇ“、Ｐｂ 、Ｋ 的检测已有报道。Ｈｇ２ 与核酸的稳定结合是依靠Ｔ—Ｈｇ¨～ Ｔ的碱基配对 引，虽然Ｈｇ 与Ｔ碱基之问有很强的选择性，但是单纯的含Ｔ碱基的核酸在检测时容易受 到Ｐｂ 的干扰。为了避免Ｐｂ 的干扰，ｘｕ等 则设计了６条长度２０个核苷酸富含Ｔ碱基的ＤＮＡ，利用 非修饰的纳米金建立了基于纳米金颜色变化的Ｈｇ¨检测方法，结果发现含有４个Ｔ—Ｔ碱基对的序列的 检测效果最好，检出限达到０．５ｔｘｍｏｌ／Ｌ，线性范围０—１０／ｘｍｏｌ／Ｌ。Ｊｉａｎｇ等 则利用修饰纳米金的富含Ｔ 碱基的ＤＮＡ序列，构建了基于纳米金色度变化的高选择性的Ｈｇｎ检测方法，检出限０．００００３４ ｎｇ／ｍＬ，线 性范围０．００００８～０．８８８ ｎｇ／ｍＬ。凌绍明等 制备了纳米金适体探针，将适体反应、纳米金聚集反应和金 纳米微粒的共振散射效应有机结合，发展了检测Ｐｂ 的核酸适体修饰纳米金共振散射光谱探针新技术， 检出限为０．０３ｎｍｏｌ／Ｌ。基于核酸适体的Ｋ 测定多借助凝血酶核酸适体来构建生物传感器，凝血酶适体 可以折叠形成Ｇ一四联体，Ｇ一四联体是一系列鸟嘌呤依靠氢键和离子之间的相互作用来稳定，因此核酸 适体折叠的程度与Ｋ 的浓度密切相关。Ｎａｇａｔｏｉｓｈｉ等 利用凝血酶的核酸适体根据荧光能量共振转移 的原理设计荧光核酸探针用于检测Ｋ ，在细胞外的检测范围达到２—１０ｍｍｏｌ／Ｌ，在细胞内的检测范围达 到１００～２００ｍｍｏｌ几。Ｓｈｉ等 ４３＿也利用凝血酶适体建立了基于分子信标检测Ｋ 的方法，检出限达到４× １０Ｉ４ｍｏｌ／Ｌ检测范围在６×１０～～２×１０Ｉ２ｍｏｌ／Ｌ。此外，科研工作者已经成功筛选了ｚｎ¨、Ｎｉ 的核酸 适体并初步用于检测体系¨ ４．３在生物毒素分析中的应用 。 目前，已经有几种生物毒素的核酸适体被成功筛选，并在食品安全检测中应用。唐吉军等 利用毛 细管电泳ＳＥＬＥＸ技术仅用４轮筛选从随机寡核苷酸文库中筛选获得特异识别蓖麻毒素靶分子的核酸适 体。Ｔａｎｇ等 ＿ 筛选了相思豆毒素的ＤＮＡ适体，并建立了化学发光分析方法检测相思豆毒素，检出限达到 １ｎｍｏ／／Ｌ，线性范围为ｌ～４００ｎｍｏ／／Ｌ。Ｃｒｕｚ—Ａｇｕａｄｏ和ＰｅｎｎｅｒＬ４ 筛选获得了赭曲霉毒素Ａ（ＯＴＡ）的核酸 适体并初步应用于ＯＴＡ的检测。Ｙａｎｇ等 副根据酸适体在盐溶液中使非修饰的纳米金聚集变色的原理构 建了检ｉ见４ ＯＴＡ的色度生物传感器，检出限达到２０ｎｍｏｌ／Ｌ，线性范围２０—６２５ｎｍｏｌ／Ｌ。段诺等 根据适体 与目标物质结合后，荧光标记适体的互补ＤＮＡ链解离导致荧光强度减小的原理。发展了一种新型ＯＴＡ荧 光检测方法，检出限为１×１０～ｇ／Ｌ，线性范围２×１０一～１．０×１０～ｇ／Ｌ，玉米粉样品中标准ＯＴＡ回收率为 ９１．０％～１００．６％。Ｂａｒｔｈｅｌｍｅｂｓ等 建立了酶联免疫适体检测（ＥＬＡＡｓ）方法对白酒中的ＯＴＡ进行检 测，检出限达到５ｎｇ／ｍＬ。Ｂｏｎｅｌ等 构建的电化学适体传感器对ＯＴＡ的检出限０．０７±０．０１ｎｇ／ｍＬ，线性 范围０．７８—８．４７ｎｇ／ｍＬ。 ４．４在食源性致病菌分析中的应用 自ＳＥＬＥＸ技术出现以来，已筛选出一些针对病毒、细菌等病原体活性蛋白的核酸适体。Ｌｅｅ等＿５ 利 ４２ 安徽科技学院学报 用核酸适体与ＲＴ—ＰＣＲ建立了检测大肠杆菌的方法，检测下限为１０Ｅ．ｃｏｌｉ／ｍＬ。Ｏｈｋ等 。 利用核酸适体 与抗体功能化的光导纤维生物传感器对人工污染的牛肉、鸡肉等食品中的李斯特菌进行了检测，检测下限 为１０３ＣＦＵ／ｍＬ。随着ＳＥＬＥＸ技术的发展，核酸适体在病原微生物的快速检测方面会有更大的潜力和发 展前景。 ４．５在工业染料分析中的应用 １９９０年ＳＥＬＥＸ技术提出时，Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ…就成功地筛选了有机染料的ＲＮＡ适体。１９９８年， Ｗｉｌｓｏｎ等 筛选了磺酰罗丹明Ｂ的核酸适体，利用ＤＮＡ适体检测磺酰罗丹明Ｂ，检出限为１９０ｎｍｏｌ／Ｌ。 ２００１年，Ｇｒａｔｅ等 筛选出了与孔雀石绿结合的核酸适体。２０１０年，Ｓａｒａ等［５副将固相微萃取和核酸适体 技术结合，对鱼肉组织内的孑Ｌ雀石绿及其隐孑Ｌ雀石绿进行了半定量分析，结果表明ＲＮＡ核酸适体可以用 来代替抗体应用于孔雀石绿的检测。２００４年，Ｂｒｏｃｈｓｔｅｄｔ等 ５’ 研究了４，４ 一亚甲基二苯胺的核酸适体检 测技术，检出限为０，１５—１５ｔｘｍｏｌ／Ｌ。 ４．６在转基因蛋白分析中的应用 随着核酸适体技术的发展，转基因蛋白的核酸适体已有报道。２０１０年，江树勋等 利用ＳＥＬＥＸ技 术，以转基因玉米ＥＰＳＰＳ蛋白为靶分子进行了１６轮筛选，获得与转基因玉米ＥＰＳＰＳ蛋白特异性结合的适 体，结果表明茎环状和口袋状等结构可能是适体与转基因玉米ＥＰＳＰＳ蛋白结合的结构基础。２０１１年，郎 春燕 对ＣＰ４一ＥＰＳＰＳ转基因蛋白的ＤＮＡ适体进行了筛选，并对其亲和性、特异性进行了系统研究。 ５ 结语 核酸适体作为新型的仿生分子识别元素，对其靶标分子具有严格的识别力和高度的结合力，同时核酸 适体具有分子小、易合成、易修饰、相对稳定等多方面优势，已经在疾病治疗、诊断和新药研发方面、分析检 测中得到了广泛的应用。随着核酸适体技术的发展，筛选针对食品危害因子的核酸适体并应用于其检测 体系中，将为食品安全检测提供新的思路和途径，其应用前景广阔，对保障食品安全具有十分重要的意义。 参考文献： ［１］Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ Ａ Ｄ，Ｓｚｓｅｔａｋ Ｊ Ｗ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆＲＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄ ｓｐｅｃｆｉｃｆ ｌｉｇａｎｄｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，３４６（６２８７）：８１８－８２２． ［２］Ｔｕｅｒｋ Ｃ，Ｇｏｌｄ Ｌ．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ：ＲＮＡ ｌｉｇａｎｄｓ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ Ｔ４ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４９（４９６８）：５０５—５１０． ［３］Ｇｏｐｉｎａｔｈ Ｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ＳＥＬＥＸ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏａｎａｌｔｙｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，３８７（１）：１７１—１８２． ［４］Ｓｔｏｌｔｅｎｂｕｒｇ Ｒ，Ｒｅｉｎｅｍａｎｎ Ｃ，Ｓｔｒｅｈｌｉｔｚ Ｂ．ＳＥＬＥＸ—Ａ（ｒ）ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｇｅｎｅｒａｔｅ ｈｉｇｈ—ａｆｉｎｉｔｙ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｇａｎｄｓ ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００７，２４（４）：３８１—４０３． ［５］Ｈａｓｅｇａｗａ Ｈ，Ｓｏｄｅ Ｋ，Ｉｋｅｂｕｋｕｒｏ Ｋ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ａｇａｉｎｓｔ ＶＥＧＦ１６５ ｕｓｉｎｇ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｔａｍｅｒ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００８，３０（５）：８２９—８３４． ［６］Ｓａｒｒａｆ—Ｙａｚｄｉ Ｓ，Ｍｉ Ｊ，Ｍｏｅｌｌｅｒ Ｂ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｔｕｍｏｒ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｖｉａ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎ Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ ２一Ｓｐｅｃｉｉｆｃ ＲＮＡ Ａｐｔａｍｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００８，１４６（１）：１６—２３． ［７］Ｔａｎｇ Ｊ，Ｙｕ Ｔ，Ｇｕｏ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒ ａｇａｉｎｓｔ ａｂｒｉｎ ｔｏｘｉｎ ａｎｄ ａｐｔａｍｅｒ—ｂａｓｅｄ ａｂｒｉｎ ｄｉｒｅｃｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｅｔｒｏｎｉｅｓ，２００７，２２（１１）：２４５６—２４６３． ［８］Ｔｓｕｋａｋｏｓｈｉ Ｋ，Ｈａｒａｄａ Ｒ，Ｓｏｄｅ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｗｈｉｃｈ ｂｉｎｄｓ ｔｏ 一ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２０１０，３２（５）：６４３—６４８． ［９］Ｇｅｉｇｅｒ Ａ，ＢｕｒｇｓｔａＵｅｒ Ｐ，ｙｏｎ ｄｅｒ Ｅｌｔｚ Ｈ，ｅｔ ａ１．ＲＮＡ Ａｐｔａｍｅｒｓ Ｔｈａｔ Ｂｉｎｄ １一Ａｒｇｉｎｉｎｅ ｗｉｔｈ Ｓｕｂ—Ｍｉｃｒｏｍｏｌａｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｃｏｎ— ｓｔａｎｔｓ ａｎｄ Ｈｉ．ｇｈ Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９６，２４（６）：１０２９—１０３６． ［１０］Ｋａｗａｋａｍｉ Ｊ，Ｉｍａｎａｋａ Ｈ，Ｙｏｋｏｔａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｈａｔ ａｃｔ ｗｉｔｈ Ｚｎ２ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｂｉｏ· ｃｈｅｍｉｓｔｙ，２０００，８２（１—４）：ｒ１９７—２０６． ［１ １］Ｋｉｍ Ｙ Ｓ，Ｈｙｕｎ Ｃ Ｊ，Ｋｉｍ ＩＡ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｉｒｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｆｏｒ ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ［Ｊ］．Ｂｉｃｒｏ－ ｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，１８（１０）：３４６７—３４７３． ［１２ ３ Ｍａｎｎｉｏｒｎｉ Ｃ，Ｄｉ Ｎａｒｄｏ Ａ，Ｆｒｕｓｃｏｌｏｎｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｏｐａｍｉｎｅ ＲＮＡ Ｌｉｇａｎｄｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７，３６ （３２）：９７２６—９７３４． 第２７卷第５期 王丽，等核酸适体及其在食品安全领域的应用 ４３ ［１３］Ｍｅｈｔａ Ｊ，Ｖａｎ Ｄｏｍｔ Ｂ，Ｒｏｕａｈ—Ｍａｒｔｉｎ Ｅ，ｅｔ １ａ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｉｒｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ｃｈｌｏｒａｍ－ ｐｈｅｎｉｅｏｌ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，２０１ｌ，１５５（４）：３６１—３６９． ［１４］Ｎｉａｚｉ Ｊ Ｈ，Ｌｅｅ Ｓ Ｊ，Ｋｉｍ Ｙ Ｓ，ｅｔ ａ１．ｓｓＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｈａｔ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｂｉｎｄ ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｅ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍ－ ｉｓｔｒｙ，２００８，１６（３）：１２５４—１２６１． ［１５］Ｔａｎｇ Ｚ，Ｓｈａｎｇｇｕａｎ Ｄ，Ｗａｎｇ Ｋ，ｅｔ １ａ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｐｔａｍｅｒｓ ｆｏｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，７９（１３）：４９００—４９０７． ［１６］Ｗａｎｇ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｍ，Ｙａｎｇ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｎｇｌｅ—ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｕｔ ｎｏｔ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｅｌｓ：ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００３，１０２（１）：１５—２２． ［１７］Ｃｌａｒｋ Ｓ Ｌ，Ｒｅｍｅｈｏ Ｖ Ｔ．Ａｐｔａｍｅｒｓ ａｓ ａｎａｌｔｙｉｃａｌ ｒｅａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２００２，２３（９）：１３３５—１３４０． ［１８］Ｊｅｎｉｓｏｎ Ｒ，Ｇｉｌ Ｓ，Ｐａｒｄｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｈｉ曲一ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ ＲＮＡ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６３（５１５２）：１４２５ １４２９． ［１９］Ｈｅｒｍａｎｎ Ｔ，Ｐａｔｅｌ Ｄ Ｊ．Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ａｐｔａｍｅｒｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，２８７（５４５４）：８２０—８２５． ［２０］Ｎｇｕｙｅｎ Ｄ Ｈ，ＤｅＦｉｎａ Ｓ Ｃ，Ｆｉｎｋ Ｗ Ｈ，ｅｔ １ａ．Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ａＪｌ ＲＮＡ Ａｐｔａｍｅｒ Ｃｈａｎｇｅｓ ｔｈｅ Ｃｈａｒｇｅ Ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆＭａｌａｃｈｉｔｅ Ｇｒｅｅｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００２，１２４（５０）：１５０８１—１５０８４． ［２１］谢海燕，陈薛钗，邓玉林．核酸适配体及其在化学领域的相关应用［Ｊ］．化学进展，２００７，１９（６）：１０２６—１０３３． ［２２］Ｆａｍｕｌｏｋ Ｍ．Ｍｏｌｅｃｌｕａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍＡｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ｂｙ ＲＮＡ—Ａｐｔａｍｅｒｓ：Ａｎ Ｌ—Ｃｉｔｎｄｌｌｎｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ ＲＮＡ Ｍｏｔｉｆ ｎａｄ Ｉｔｓ Ｅｖｏｌｕ— ｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ａｎ Ｌ—Ａｒｇｉｎｉｎｅ Ｂｉｎｄｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆｔｈｅ Ａｍｅｉｒｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９４，１１６（５）：１６９８—１７０６． ［２３］Ｌａｔｏ Ｓ Ｍ，Ｂｏｌｅｓ Ａ Ｒ，Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ Ａ Ｄ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＲＮＡ ｌｅｃｔｉｎｓ：ｕｓｉｎｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉｌａ ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ｔｏ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔ ｒｉｂｏｚｙｍｅ ｅ． ｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，２（５）：２９１—３０３． ［２４］Ｋｗｏｎ Ｍ，Ｃｈｕｎ Ｓ Ｍ，Ｊｅｏｎｇ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏ ＲＮＡ ａｇａｉｎｓｔ ｋａｎａｍｙｃｉｎ Ｂ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｃｅｌｌｓ，２００１，１１（３）： ３０３—１１． ［２５］Ｎｉａｚｉ Ｊ Ｈ，Ｌｅｅ Ｓ Ｊ，Ｇｕ Ｍ Ｂ．Ｓｉｎｇｌｅ—ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｆｏｒ ｎａｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｔｅｔｒａｃｙｅｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉ． ｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２００８，１６（１５）：７２４５—７２５３． ［２６］Ｗａｌｌｉｓ Ｍ Ｇ，ｖｏｎ Ａｈｓｅｎ Ｕ，Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ Ｒ，ｅｔ １ａ．Ａ ｎｏｖｅｌ ＲＮＡ ｍｏｔｉｆｆｏｒ ｎｅｏｍｙｃｉｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５， ２（８）：５４３—５５２． ［２７］Ｂｕｒｋｅ Ｄ Ｈ，Ｈｏｆｆｍａｎ Ｄ Ｃ，Ｂｒｏｗｎ Ａ，ｅｔ ａ１．ＲＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｏ ｔｈｅ ｐｅｐ￣ｄｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓ－ ｔｒｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９７，４（１１）：８３３—８４３． ［２８］Ｓｏｈｔｉｒｅｒ Ｈ，Ｓｔｅｍｂｅｒａ Ｋ，Ｋｎｏｌｌ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄ ｔｏ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｍｏｃｎｏｍｙｅｉｎ Ａ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２００１，９（１０）：２５５７—２５６３． ［２９］Ｗｏｃｈｎｅｒ Ａ，Ｍｅｎｇｅｒ Ｍ，Ｏｒｇｅｌ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｏｆｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ［Ｊ］． Ａｎａｌｔｙｉｃａｌ Ｂｉｃｏｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，３７３（１）：３４—４２． ［３０］秦川．ＳＥＬＥＸ技术筛选青霉素类抗生素适体及其运用方法的初步探索［Ｄ］．重庆：西南大学，２００８． ［３１］李卫滨．筛选环孢霉素Ａ适体的Ｂｉｏ Ｍａｇ—ＳＥＬＥＸ方法的建立［Ｄ］．福州：福建农林大学，２００６． ［３２］ｄｅ—ｌｏｓ—Ｓａｎｔｏｓ—Ａｌｖａｒｅｚ Ｎ，Ｌｏｂｏ—Ｃａｓｔａｉｆ６ｎ ＭＪ，Ｍｉｒｎａｄａ—Ｏｒｄｉｅｒｅｓ ＡＪ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｉｉｆｅｄ—ＲＮＡ Ａｐｔａｍｅｒ—Ｂａｓｅｄ Ｓｅｎｓｏｒ ｏｆｒ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ Ｉｍｐｅｄｉｍｅｔｉｒｃ Ａｓｓａｙ ｏｆ Ｎｅｏｍｙｃｉｎ Ｂ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃｎａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００７，１２９（１３）：３８０８— ３８０９． ［３３］ｄｅ—ｌ０ｓ—Ｓａｎｔｏｓ—Ａｌｖａｒｅｚ Ｎ，Ｌｏｂｅ—Ｃａｓｔａｆｉ６ｎ ＭＪ，Ｍｉｒａｎｄａ—Ｏｒｄｉｅｒｅｓ ＡＪ，ｅｔ １ａ．ＳＰＲ ｓｅｎｓｉｎｇ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ８ ｗｉｔｈ ｍｏｄｉ． ｌｆｅｄ ＲＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｏｍｙｃｉｎ Ｂ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｅｓ，２００９，２４（８）：２５４７—２５５３． ［３４］Ｋｉｍ ＹＳ，Ｎｉａｚｉ ＪＨ，Ｇｕ ＭＢ．Ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｕｓｉｎｇ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒ—ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｉｎｔｅｒｄｉｇｉｔａｔｅｄ ａｒｒａｙ ｅｌｅｃ． ｔｒｏｄｅ ｃｈｉｐ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｅａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００９，６３４（２）：２５０—２５４． ［３５］Ｋｉｍ Ｙ—Ｊ，Ｋｉｍ Ｙ，Ｎｉａｚｉ Ｊ，ｅｔ １ａ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｐｔａｓｅｎｓｏｒ ｆｏｒ ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｐｒｃｏｅｓｓ ａｎｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｅｎｇｉ． ｎｅｅｒｉｎｇ，２０１０ａ，３３（１）：３１—３７． ［３６］Ｓｏｎｇ Ｋ—Ｍ，Ｃｈｏ Ｍ，Ｊｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｇｏｌｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｅｌｅ—ｂａｓｅｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｋａｎａｍｙｃｉｎ ｕｓｉｎｇ ａ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒ［Ｊ］． Ａｎａｌｔｙｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙｒ，２０１１，４１５（２）：ｔ７５—１８１． ［３７］范婷，张娟琨，李敏．适配子生物传感器对青霉素的快速检测［Ｊ］．生物加工过程，２０１１，９（３）：４１—４６． ［３８］Ｍｉｙａｋｅ Ｙ，Ｔｏｇａｓｈｉ Ｈ，Ｔａｓｈｉｒｏ Ｍ，ｅｔ １ａ．ＭｅｒｃｕｒｙｌＩ—Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆＢａｓｅ Ｐａｉｒｓ ｉｎ ＤＮＡ Ｄｕｐｌｅｘｅｓ［Ｊ１．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６，１２８（７）：２１７２—２１７３． 安徽科技学院学报 ２０１３正 ［３９］Ｘｕ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｊｉａｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｒｃｕｒｙ ｉｏｎ（Ｈ ）ｂａｓｅｄ ｏｎ ＤＮＡ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｕｎｍｏｄｉｉｅｄ ｆｇｏｌｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｓｅｎｓｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ａ ｔｕｎａｂｌｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，２００９，２４（１０）：３ １５３— ３１５８． ［４０］Ｊｉａｎｇ Ｚ，Ｗｅｎ Ｇ，Ｆａｎ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｎａｎｏｇｏｌｄ—ａｐｔａｍｅｒ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｌａ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｒａｃｅ Ｈｇ２ ｕｓｉｎｇ ＨＡｕＣ１４一ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔａｌａｎｔａ，２０１０，８０（３）：１２８７—１２９１． ［４１］凌绍明，范燕燕，蒋治良，等．核酸适体修饰纳米金共振散射光谱探针快速检测痕量Ｐｂ ［Ｊ］．化学学报，２０１０，６８（４）： ３３９—３４４． ［４２］Ｎａｇａｔｏｉｓｈｉ Ｓ，Ｎｏｊｉｍａ Ｔ，Ｇａｌｅｚｏｗｓｋａ Ｅ，ｃｔ ａ１．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｂｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｇｕａｎｉｎｅ ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｒｆ ｔｈｅ ｌｆｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｅａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００７，５８１（１）：１２５—１３１． ［４３］ｓｈｉ ｃ，Ｇｕ Ｈ，Ｍａ Ｃ．Ａｎ ａｐｔａｍｅｒ—ｂａｓｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ｏｆｒ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａ ｐｙｒｅｎｅ—ｌａｂｅｌｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｅａｃｏｎ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ，２０１ｒ０，４０Ｏ（１）：９９—１０２． ［４４］Ｃｉｅｓｉｏｌｋａ Ｊ，Ｇｏｒｓｋｉ Ｊ，Ｙａｒｎｓ Ｍ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ＲＮＡ ｄｏｍａｉｎ ｔｈａｔ ｂｉｎｄｓ Ｚｎ ［Ｊ］．ＲＮＡ，１９９５，１（５）：５３８—５５０． ［４５］Ｈｏｆｍａｎｎ ＨＰ，Ｌｉｍｍｅｒ Ｓ，Ｈｏｒｎｕｎｇ Ｖ，ｅｔ ａｔ．Ｎｉ“一ｂｉｎｄｉｎｇ ＲＮＡ ｍｏｔｉｆｓ ｉｔｗｈ ａｎ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｐｕｆｉｎｅ—ｒｉｃｈ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｌｏｏｐ ａｎｄ ａ Ｇ—Ａ ｂａｓｅ ｐａｉｒ［Ｊ］．ＲＮＡ，１９９７，３（１１）：１２８９—１３００． ［４６３唐吉军，谢剑炜，邵宁生，等．采用毛细管电泳技术筛选特异识别蓖麻毒素适配子的研究［Ｊ］．高等学校化学学报， ２００６，２７（１０）：１８４０—１８４３． ［４７］Ｃｒｕｚ—Ａｇｕａｄｏ Ｊ Ａ，Ｐｅｎｎｅｒ Ｇ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ Ａ ｗｉｔｈ ａ ＤＮＡ Ａｐｔａｍｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，５６（２２）：１０４５６一ｌＯ４６１． ［４８］Ｙａｎｇ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｙ，Ｍａｒｔｙ Ｊ—Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａｐｔａｍｅｒ—ｂａｓｅｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｂｉｏｓｅｎｓｉｎｇ ｏｆ Ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ Ａ ｕｓｉｎｇ ｕｎｍｏｄｉｉｆｅｄ ｇｏｌｄ ｎａｎｏｐ－ ａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｃｅｔｒｏｎｉｃｓ，２０１ １，２６（５）：２７２４—２７２７． ［４９］段诺，吴世嘉，王周平．核酸适配体识别荧光法检测赭曲霉素Ａ［Ｊ］．分析化学，２０１１，３９（３）：３００—３０４． ［５０］Ｂａｒｔｈｅｌｍｅｂｓ Ｌ，Ｊｏｎｃａ Ｊ，Ｈａｙａｔ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｚｙｍｅ—Ｌｉｎｋｅｄ Ａｐｔａｍｅｒ Ａｓｓａｙｓ（ＥＬＡＡｓ），ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｆｏｒｍａｔ ｏｒｆ ａ ｒａｐｉｄ ｎｄ ｓａｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ Ａ ｉｎ ｗｉｎｅ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２０１１，２２（５）：７３７－７４３． ［５ １］Ｂｏｎｅｌ Ｌ，Ｖｉｄａｌ Ｊ Ｃ，Ｄｕａｔｏ Ｐ，ｃｔ ａ１．Ａｎ ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ｏｆｒ ｃｈｒｏａｔｏｘｉｎ Ａ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ＤＮＡ ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｃｄ ａｐｔａｍｅｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｏｎｉｒｃｓ，２０１１，２６（７）：３２５４—３２５９． ［５２］Ｌｅｅ Ｈ—Ｊ，Ｋｉｍ Ｂ Ｃ，Ｋｉｍ Ｋ—Ｗ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｅ ｓｅｐａｒ￣ｉｏｎ ａｎｄ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｔａｍｅｍ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，２００９，２４（１２）：３５５０—３５５５． ［５３］Ｏｈｋ Ｓ Ｈ，Ｋｏｏ Ｏ Ｋ，Ｓｅｎ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｂｏｄｙ—ａｐｔａｍｃｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｉｆｂｒｅ—ｏｐｔｉｃ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ｏｆｒ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ｆｏｏｄ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，１０９（３）：８０８—８１７． ［５４］Ｗｉｌｓｏｎ Ｃ，Ｓｚｏｓｔａｋ Ｊ Ｗ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｆｕｏｒｏｐｈｏｒｅ—ｓｐｅｃｉｉｆｃ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒ ｉｗｔｈ ｗｅａｋ ｒｅｄｏｘ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｙ＆Ｂｉｒｏｌｏｇｙ， １９９８，５（１１）：６０９—６１７． ［５５］Ｇｒａｔｅ Ｄ，Ｗｉｌｓｏｎ Ｃ．Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｓ．ｃｅｒｃｖｉｓｉａｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ａｎ ＲＮＡ ａｐｔａｍｅｒ—ｌｉｇａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘ［Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ａｍｐ；Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，９（１０）：２５６５—２５７０． ［５６］Ｓｔｅａｄ Ｓ Ｌ，Ａｓｈｗｉｎ Ｈ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｂ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ＲＮＡ—Ａｐｔａｍｅｒ—Ｂａｓｅｄ Ａｓｓａｙ ｏｆｒ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｍａｌａｃｈｉｔｅ Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｌｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅ Ｇｒｅｅｎ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｆｉｓｈ Ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ａｎａｌｔｙｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｙ，２０１ｒ０，８２（７）：２６５２—２６６０． ［５７］Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔ Ｕ，Ｕｚａｏｗｓｋａ ｒＡ，Ｍｏｎｔｐｃｔｉｔ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｆ ｏＲＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ ａｒｏｍａｔｉｃ ａｍｉｎｅｓ ［Ｊ］．Ｂｉｃｈｅｏｍｉｃａｌ ｎｄ Ｂｉａｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００４，３１３（４）：１００４—１００８． ［５８］江树勋，黄新，邵碧英，等．转基因玉米ＥＰＳＰＳ蛋白适体的筛选与结构分析［Ｊ］．热带作物学报，２０１０，３１（４）：６００— ６ｏ４． ［５９］郎春燕．ＣＰ４一ＥＰＳＰＳ转基因蛋白的适体筛选与亲和性分析［Ｄ］．福州：福建农林大学，２０１１． （责任编辑：李盂良）
