HBV相关性肝癌组织
中microRNA表达谱研究
专业：外科学（专业学位）
班级：2011级研究生2班
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一． 研究背景
1．miRNA介绍
miRNA亦称微小RNA,是一种广泛存在于真核生物中、大小约20-22个核昔酸(nt)的内源性单链小分子RNA,在生物进化过程中高度保守,在细胞中具有时空特异性表达模式.miRNA不编码蛋白,而是通过与靶基因序列特异性相互作用,在转录或翻译水平调节相关基因表达,参与发育、增殖、分化、凋亡等多种生物学过程[1-2],自1993年第一个miRNA编码基因lin-4由Lee etal[3]在线虫体内发现以来,人们相继在烟草、果蝇、斑马鱼、哺乳动物与人体内[4]发现了大量miRNA编码基因.据生物信息学预测,人类基因组内存在着约1000个miRNA基因,基因组内l/3左右基因的表达[8].
2.miRNA与HBV的关系
病毒是一种极小的寄生生物,只能依赖宿主细胞进行复制、转录、翻泽以维持其生存,但其复制等过程中可能会造成宿主细胞基因表达水平的改变.考虑到miRNA在基因表达中所起到的重要作用,病毒这种只具有有限基因编码能力的生物同样可能利用miRNA调节宿主或自身某些基因的表达.2004年有报道在EB病毒[5]基因组中发现5个miRNA, 这是首次发现病毒编码miRNA.到目前为止,通过在病毒感染的细胞中利用cDNA克隆和生物信息学方法,在疤疹病毒、多瘤病毒、腺病毒以及逆转录病毒(retro-viruses)中发现上百个miRNA.其中,在HCV和HIV等慢性病毒感染中,miRNA的重要作用已得到证实[6-7].有学者利用生物信息学技术,从HBV基因组中仅找到了一个候选的病毒编码pre-miRNA,推断其成熟miRNA序列为:CAUGUCCUACUGUUCAAGC-CUC;但通过分析,在人类基因组中没有找到潜在靶基因,而在HBV病毒基因组中却找到了三个作用靶点.这提示我们HBV编码的miRNA可能通过调节自身mRNA的表达发挥病理生理作用,但尚未见相关实验结果证实及报道.在病毒感染性疾病中,宿主细胞中的miRNA可能在病毒生命活动周期中起着重要作用,而病毒自身为了在宿主细胞中成功存活,也必定会反过来调节宿主细胞miRNA的表达,从而参与炎症、肿瘤等疾病的发生发展.
二． 研究材料与方法
1. 研究材料：
25例配对的HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌组织，取自手术切除标本，所有患者的诊断均有病理证实，术前均未接受抗肿瘤治疗。组织切除后立即放液氮中，然后在-80℃保存。所有患者均签署知情同意书。
2. 试验流程：
总RNA的提取→microRNA芯片的杂交、扫描和分析→实时定
量荧光RT-PCR→分析HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌组织中microRNA表达水平的不同。
三． 预期结果
发现microRNA在25例HBV相关性肝癌与配对的非HBV相关性肝癌组织差异性表达。
四． 讨论
我国的肝癌多来自乙型肝炎病毒感染后肝硬化，与国外多来自酒精性肝硬化不同。因此，亟需分析我国HBV相关性肝癌组织中microRNA差异表达谱，以便了解microRNA在HBV相关性肝癌发生、发展中的作用。目前对肝细胞性肝癌的研究中已发现若干miRNA,如miRNA-122，-21,-195，-18等的异常表达与之有关.在病毒感染性疾病中，宿主细胞中的miRNA可能在病毒生命活动周期中起着重要作用[8],而病毒自身为了在宿主细胞中成功存活,也可能反过来调节宿主细胞miRNA的表达[9],从而参与炎症、肿瘤等疾病的发生发展[10-11].生物信息学提示[12],HBV可以编码miRNA,并且该miRNA能调节乙肝病毒自身的基因表达,但尚需实验证实.
总之，本研究利用microRNA芯片技术筛选出HBV相关性肝癌组织中microRNA的差异表达谱，为进一步研究microRNA在HBV相关性肝癌变中的作用，从而为microRNA在HBV相关性肝癌基因诊断和治疗靶点提供实验基础。针对我国乙肝患者多的国情,对该类人群开展miRNA相关表达谱研究,将为乙肝相关性肝癌的发生发展机制的研
究提供一个新的方向.
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