山东医药２０１３年第５３卷第４３期 ＴＮＦ．０Ｌ的分泌，在应用第７天创面ＩＬ－６含量已经降 ［４］宋金斌，王朝晖，任菊琴，等．疮灵液的研制和临床应用［Ｊ］．时 至初始创面含量水平，说明创面愈合完全进入增殖 珍国药研究，１９９６，７（５）：３１８－３２ｏ． 期，而对照组组织ＩＬ－６含量仍然是初始含量的４ ［５］张宇轩，姚昶，朱永康，等．疮灵液载人胶原对血管新生影响的 实验研究［Ｊ］．南京中医药大学学报，２ｏ１３，２９（３）：２５１－２５４． 倍。我们认为，创灵液胶原能够干预创面炎症反应 ［６］张旭辉，董建勋，李健，等．回阳生肌方药对慢性皮肤溃疡大鼠 而促进成其愈合。 创面愈合及炎症因子的影响［Ｊ］．北京中医药大学学报，２ｏ１３， 胶原作为生物体各种结缔组织的主要组成分， ３６（３）：１７ｏ－１７３． 可在体内降解且降解碎片具有组织相容性，已成为 ［７］刘洪爱，江新泉，陈强，等．糖尿病大鼠骨折愈合过程中炎症细 组织工程中应用最广的生物材料。中药载入可以进 胞因子的变化［Ｊ］．山东医药，２ｏ１３，５３（１）：３５－３６． 一步提高疗效 ’ｍ Ｊ，胶原经过修饰后可以提高组织 ［８］董瑶，董飞君，李幼华，等．脂肪干细胞调节仓０面炎症反应并促 进创面愈合［Ｊ］．医学研究杂志，２ｏ１２，４１（３）：ｌＯＯ—ｌＯ３． 相容性及促进血管生成作用，有利于组织修 ［９］郭檬檬，姚昶，陈德轩，等．不同浓度生肌玉红胶原对鸡胚尿囊 复＿】 挖］。本研究结果显示，疮灵液胶原可以发挥疮 膜血管新生的影响［Ｊ］．微循环学杂志，２ｏ１３，２３（１）：５－７． 灵液干预创面炎症反应及胶原促进创面血管新生的 ［１０］姚昶，陈德轩，卞卫和，等．生肌玉红胶原促进大鼠后肢缺血组 作用，进而促进创面愈合。 织血管新生的实验研究［Ｊ］．中国普外基础与临床杂志，２ｏ１３， ２Ｏ（４）：３８９－３９４． 参考文献： ［１１］魏庆，任伟业，张晶，等．胶原海绵在慢性下肢溃疡中应用临床 ［１］张爱华，陆茵，许慧琪，等．疮灵液的药理研究［Ｊ］．江苏药学与 疗效观察［Ｊ］．安徽医药，２ｏ１２，１６（７）：９４９－９５１． 临床研究，１９９７，１（４）：１４－１８． ［１２］缪雪华，周勇，任伟业，等．胶原海绵促进肉芽生长与创面愈合 ［２］王朝晖，任菊琴，宋金斌，等．疮灵液用于溃疡的临床及实验研 实验研究［Ｊ］．中国当代医药，２ｏ１２，１９（１Ｏ）：２６－３０． 究［Ｊ］．山西护理杂志，１９９７，１１（０５）：２００－２０３． （收稿日期：２ｏ１３－ｏ７－３１） ［３］杨能华．疮灵液治疗缺血性溃疡３８例［Ｊ］．南京中医药大学学 报。１９９７，１３（５）：３１ｏ－３１１． 高尿酸血症大鼠模型的建立 及其肾脏损伤观察 陈瞳，崔凌凌，王希波。李长贵 （青岛大学医学院附属医院，山东青岛２６６００３） 摘要：目的用不同剂量腺嘌呤建立高尿酸血症大鼠模型并观察其肾脏损伤情况。方法将实验用大鼠随机 分为持续高嘌呤组２０只、间隔高嘌呤组２０只、正常对照组１Ｏ只。持续高嘌呤组以质量分数为１０％的酵母粉饲料 饲养，给予腺嘌呤１００ ｍｇ／ｋｇ每天灌胃；间隔高嘌呤组同样以质量分数为１０％的酵母粉饲料饲养，给予腺嘌呤１００ ｍｇ／ｋｇ隔天灌胃；对照组普通饲料喂养，并以同体积蒸馏水灌胃。于实验第６周调整灌胃方法：持续高嘌呤组给予 腺嘌呤５０ ｍｇ／ｋｇ每天灌胃；间隔高嘌呤组给予腺嘌呤５０ ｍｇ／ｋｇ隔天灌胃；同时，持续高嘌呤组与间隔高嘌呤组给 予１００ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）氧嗪酸钾，分２次腹部皮下注射，并继续饲以质量分数为１０％的酵母粉饲料。检测大鼠血尿酸、 血肌酐、血尿素氮并观察其肾脏病理变化。结果间隔高嘌呤组喂养４周后血尿酸明显升高（Ｐ＜０．０１），与持续 高嘌呤组血尿酸水平相比，Ｐ＞０．０５。间隔高嘌呤组血肌酐、尿素氮水平较低，与持续高嘌呤组相比，Ｐ＜０．０５。持 续高嘌呤组肾脏损害严重。结论间隔给予大鼠腺嘌呤配伍氧嗪酸钾建立高尿酸血症模型可逐步升高大鼠血尿 酸水平，且大鼠肾组织损伤程度轻。 关键词：高尿酸血症；动物模型；腺嘌呤；氧嗪酸钾；肾功能 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１３．４３．０１０ 中图分类号：Ｒ３３２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１３）４３－００２９－０３ 高尿酸血症是以嘌呤代谢紊乱为主的机体代 谢性疾病，是导致痛风、痛风性肾病及尿酸结石的生 化基础，且与人体多种代谢性疾病密切相关 ，如 基金项目：山东省自然科学基金资助项目（ＺＲ２０１０ＨＺ００１）。 糖尿病、血脂异常、肥胖等。研究 表明，高尿酸 通信作者：李长贵 血症与某些肾脏、心血管疾病的发生发展亦存在联 ２９ 山东医药２０１３年第５３卷第４３期 系。随着我国社会生活水平的逐渐提高，加之部分 地区高嘌呤摄入的饮食习惯，致使高尿酸血症的发 病率正在逐年升高 胡ｊ。动物实验对于开展高尿酸 血症发病机制的研究、在高尿酸血症基础上引发痛 １．４大鼠模型建立方法大鼠普通饲料饲养１周， 适应环境后，随机分为持续高嘌呤组２Ｏ只、间隔高 嘌呤组２０只、正常对照组ｌ０只。按参考文献。 的 造模方法，持续高嘌呤组以质量分数为１０％的酵母 风及其他相关疾病的病理研究和治疗高尿酸血症新 药的研发具有重大意义。现今国内对于高尿酸血症 动物模型的建立仍存在争议：大鼠为动物实验中最 常见的动物，但大鼠体内存在尿酸酶，长期尿酸刺激 会激活尿酸酶活性 Ｊ，无法将尿酸维持在较高水 平。利用抑制尿酸排泄的药物或者尿酸酶抑制剂的 粉饲料饲养，给予腺嘌呤１００ ｍｇ／ｋｇ每天灌胃；间隔 高嘌呤组同样以质量分数为１０％的酵母粉饲料饲 养，给予腺嘌呤１００ ｍｇ／ｋｇ隔天灌胃；对照组普通饲 料喂养，并以同体积蒸馏水灌胃。于实验第６周调 整灌胃方法：持续高嘌呤组给予腺嘌呤５０ ｍｇ／ｋｇ每 药物制备动物模型，与临床上原发高尿酸血症的发 病病因不符，且乙胺丁醇、烟酸等尿酸排泄抑制剂对 肾损害严重 ，实验动物存活率低。酵母粉可引起 机体嘌呤代谢紊乱，配合腺嘌呤灌胃可以快速升高 血尿酸。而腺嘌呤对机体肾脏有很强毒性，尿酸升 高的同时伴有肾功能损害¨ ，亦不符合人体高尿酸 血症形成原理。２０１２年ｌ０月１１日～２０１３年１月６ 天灌胃；间隔高嘌呤组给予腺嘌呤５０ ｍｇ／ｋｇ隔天灌 胃；同时，持续高嘌呤组与间隔高嘌呤组给予１００ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）氧嗪酸钾，分２次（每天上午８时与下 午４时）腹部皮下注射，并继续饲以质量分数为 １０％的酵母粉饲料。 １．５各组大鼠血尿酸、肌酐、尿素氮检测 于模型 建立过程中的第０、２、４、６、８、１０、１２周早晨，大鼠禁 食１４ ｈ后腹腔注射水合氯醛麻醉，内眦静脉采血 １．５～２．０ ｍＬ，室温静置凝血，３ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心 日，我们用不同剂量腺嘌呤建立慢性持续性高尿酸 血症大鼠模型并观察了其肾脏损伤情况。现介绍如 下。 ４ ｍｉｎ，取３００ 血清，用全自动生化分析仪测定尿 酸、肌酐、尿素氮。 １材料与方法 １．６各组大鼠肾脏病理检查 于模型建立过程中 的第１２周后，大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，摘取各 组大鼠肾脏，４％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋后制 １．１ 实验动物 雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５Ｏ只，体质量 （２００±２０）ｇ，购自山东鲁抗医药股份有限公司，饲 于青岛大学医学院附属医院实验动物中心ＳＰＦ级 动物饲养房，实验开始前普通饲料饲养１周，实验中 大鼠自由饮食。 成３ ｍ厚切片，ＨＥ染色，光镜（×４００）下观察。 １．７统计学方法 采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件。 计量资料用 ±ｓ表示，采用单因素方差分析作统 计推断，多组间比较方差齐用ＬＳＤ后续处理、方 差不齐用Ｔａｍｈａｎｅ处理。Ｐ≤０．０５为差异有统 计学意义。 ２ 结果 １．２材料与设备氧嗪酸钾，羧甲基纤维素钠，尿 酸测定试剂盒，肌酐及尿素氮测定试剂盒，腺嘌呤， 甲醛溶液，酵母粉饲料，全自动生化分析仪。 １．３ 大鼠灌胃液的制备 将腺嘌呤用蒸馏水溶解 成４ ｇ／Ｌ的悬浊液。将羧甲基纤维素钠粉剂用生理 盐水，配成８ ｇ／Ｌ的乳状溶液，再加入氧嗪酸钾配成 终浓度为２５ ｇ／Ｌ的乳悬液。 ２．１ 各组大鼠一般情况比较随造模时间的延长， 腺嘌呤组大鼠饮水量逐渐增加，同时体质量下降（见 表１），尿量逐渐增多，体毛干枯、竖立，活动减少。 表１各组大鼠体质量比较（ｇ， ± ） 注：与正常对照组相比， Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．０１；与持续高嘌呤组相比， Ｐ＜０．Ｏ１ ２．２各组大鼠血尿酸水平比较３、４。 结果见表２。 结果见表 脏明显增大，两肾灰白，表面呈颗粒状，皮、髓质交界 ２．３各组大鼠血肌酐、尿素氮水平比较２．４各组大鼠肾脏组织病理变化不清；间隔高嘌呤组大鼠肾脏略大，表面散在白色斑 点，切面皮质变薄，髓质可见放射状白线，皮、髓质交 肉眼观察，正常 界尚清。ＨＥ染色显示，正常对照组肾小囊腔内未 见异物沉积，肾曲小管、集合管亦未见异常改变；两 模型组肾小球萎缩、数量减少，肾小管扩张，肾小管 对照组大鼠肾脏表面光滑无肿胀，呈红褐色，质软有 光泽，切面皮、髓质界线清晰；持续高嘌呤组大鼠肾 ３０ 山东医药２０１３年第５３卷第４３期 及间质部位大量尿酸盐结晶沉积，间质内有炎性细 胞浸润，间隔高嘌呤组肾组织改变略轻，尿酸盐沉积 较少。 ３讨论 表２各组大鼠血尿酸比较［ｅ／（ｔａｎｏｌ・Ｌ），ｉ－ｔ－￥］ 注：与正常对照组相比， Ｐ＜０．０５，～Ｐ＜０．Ｏ１；与持续高嘌呤组相比， Ｐ＜Ｏ．０５ 表３各组大鼠血肌酐水平比较［ｅ／（ｔｔｒｎｏｌ・Ｌ），ｘ± ］ 注：与正常对照组相比。 Ｐ＜Ｏ．０５，一Ｐ＜Ｏ．０１；与持续高嘌呤组相比， Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１ 表４各组大鼠血尿素氮水平比较［ｃ／（１ａｍｏｌ・Ｌ）。 ４－￥］ 注：与正常对照组相比， Ｐ＜０．０５，～Ｐ＜０．０１；与持续高嘌呤组相比， Ｐ＜Ｏ．０５， Ｐ＜０．０１ 动物实验是研究高尿酸血症发病机制及治疗方 法的重要途径。建立高尿酸血症动物模型的主要方 ［２］宋娓，李长贵．原发性高尿酸血症与代谢综合征关系的研究进 展［Ｊ］．山东医药，２００６，４６（７）：７７． ［３］王颜刚，阎胜利，李长贵，等．山东沿海居民血尿酸水平与心血 法有以下几种＿ｌ ：①单用腺嘌呤灌胃。②腺嘌呤灌 胃加酵母饲料饲养。③腺嘌呤加乙胺丁醇、烟酸等 抑制尿酸排泄药物。④尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾灌胃 或皮下注射。本实验综合几种常用造模方法，在酵 母饲料的喂养环境下使用不同剂量腺嘌呤配伍氧嗪 酸钾制作高尿酸血症大鼠模型，观察其血尿酸水平 变化及肾组织损害情况。结果发现，大剂量持续给 管疾病危险因素的关系［Ｊ］．中华内分泌代谢杂志，２００９，２５ （２）：１５９—１６３． ［４］Ｊｏｈｎｓｏｎ ＲＪ，Ｋｉｖｌｉｇｈｎ ＳＤ，Ｋｉｍ ＹＧ，ｅｔ ａ１ Ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈ— ｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ｃａｒ— ｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄ ｒｅｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ， １９９９，３３（２）：２２５－２３４． ［５］王义标，沈卫峰，张建盛，等．高尿酸血症与冠心病的相关性 ［Ｊ］．中国动脉硬化杂志，２００２，１０（１）：５６－５８． ［６］苗志敏，赵世华，王颜刚，等．山东沿海居民高尿酸血症及痛风的 流行病学调查［Ｊ］．中华内分泌代谢杂志，２００６，２２（５）：４２１４２５． ［７］闫胜利，赵世华，李长贵，等．山东沿海居民高尿酸血症及痛风５ 年随访研究［Ｊ］．中华内分泌代谢杂志，２０１１，２７（７）：５４８－５５２． 予大鼠腺嘌呤灌胃，２周后即可升高血尿酸水平并 保持在较高水平，但大鼠一般睛况较差，体质量明显 下降，且出现肾功能的改变；而间隔给予大鼠低剂量 腺嘌呤灌胃，在升高尿酸的同时，大鼠肾功能改变 小，肾组织损害出现晚、程度轻，大鼠体质量等一般 情况无明显变化。人体主要靠肾脏来排泄尿酸，高 剂量腺嘌呤构建高尿酸大鼠模型与临床常见的原发 性高尿酸血症不符，较低剂量腺嘌呤配伍氧嗪酸钾 能使尿酸升高且对肾功能改变轻，与临床原发高尿 酸血症更相似。间隔高嘌呤组出现大鼠肾脏病理改 变是长期血尿酸水平升高所致还是腺嘌呤对肾的毒 性作用，需要后续实验来验证。 参考文献： ［１］Ｄｉｎｅｅｒ ＨＥ，Ｄｉｎｃｅｒ ＡＰ，Ｌｅｖｉｎｓｏｎ ＤＪ．Ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅ一 ［８］方卫纲，黄晓明，王玉，等．高尿酸血症在北京地区１９９７人中的 患病情况及相关因素分析［Ｊ］．中华医学杂志，２００６，８６（２５）： ｌ７６４，１７６８． ［９］Ｓｔａｖｒｉｃ Ｂ，Ｎｅｒａ ＥＡ．Ｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｉｅａｓｅ—ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｒａｔ ａｓ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｌ，１９７８，１３（１）：４７－７４． ［１Ｏ］杨桂梅，黄胜华，连希艳，等．大鼠高尿酸血症模型的建立［Ｊ］． 实验动物科学，２０１１，２８（３）：２５－２８． ［１１］周小舟，张盛光，杨晓，等．腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的 机理研究［Ｊ］．基础医学与临床，１９９７，１７（１）：５４－５７． ［１２］张培，苗志敏，李长贵，等．慢性高尿酸血症大鼠模型建立方法 的探讨［Ｊ］．青岛大学医学院学报，２０１０，４６（３）：２１９－２２１． ［１３］陈光亮，徐叔云．高尿酸动物模型研究进展［Ｊ］．中国药理学通 报，２００４，２０（４）：３６９＿３７３． （收稿日期：２０１３－０８－２９） ｍｉａ：ｔｏ ｔｒｅａｔ ０ｒ ｎ０ｔ ｔｏ ｔｒｅａｔ［Ｊ］．Ｃ１ｅｖｅ Ｃｌｉｎ Ｊ Ｍｅｄ，２００２，６９（８）： ５９７－６０２
