新型齿科可切削复合树脂陶瓷的细胞生物相容性初探
研究背景与目的全瓷修复近年来在国内临床应用逐渐增多,并作为取代烤瓷修复的牙科修复方式,成为目前口腔修复材料研究的热点。新兴的可切削复合树脂陶瓷材料不但成本较低,弹性模量和硬度更接近天然牙牙本质,成为种植义齿冠部修复材料的更好选择。
然而修复体边缘不可能做到完全密合,临床上也存在少量粘接剂残留的问题。种植义齿冠部材料的生物相容性要求较一般固定义齿会更高。
为使CAD/CAM复合树脂陶瓷能成为国产化的树脂陶瓷材料,本研究结合临床实际,模拟临床冠边缘少量粘接剂外露的状态,以光固化复合树脂陶瓷和氧化锆为对照,将修复材料与粘接剂作为结合体,对可切削复合树脂陶瓷冠部修复材料细胞生物相容性进行初步的检测及评价,为其以后的临床应用提供实验依据。研究方法依据国标和ISO相关标准对CAD/CAM复合树脂陶瓷材料（UR）、CAD/CAM氧化锆（UZ）、光固化复合树脂陶瓷材料（SC）及各自与树脂粘接剂的结合体（+）进行细胞增殖实验、溶血实验、口腔黏膜刺激实验,初步评价材料的细胞相容性。
1.标准试件的制备:将UR、UZ和SC制成直径5mm厚度2mm的圆柱形标准试件。各组分别取部分试件,每片试件仅一面薄薄涂布一层6mg Rely
XTM U200树脂粘接剂,紫外光固化40s,制成UR+、UZ+及SC+组标准试件。
使用内径5mm,厚度2mm的的聚四氟乙烯模具制作医用牙胶标准试件。取以上7种试件在打孔,孔径约为1mm,制成纽扣型试件。
2.体外细胞增殖试验:将L929小鼠成纤维细胞配制成一系列浓度梯度的细胞悬液,根据其生长情况建立本实验室的L929细胞生长代谢标准曲线,从而确定
接种细胞数和加药后的培养时间,并接种于96孔板中。加入UR、UZ、SC、UR+、UZ+和SC+6组材料浸提液,阴性对照组为培养基,分别观察1、3、5天后加入CCK-8溶液,用酶联免疫检测仪测光吸收值,并计算细胞增殖率。
用倒置相差显微镜观察细胞形态。3.溶血试验:实验组为6组试件（同实验一）分别加入生理盐水。
阳性对照组仅为蒸馏水,阴性对照组仅为生理盐水。加入新鲜制备的稀释抗凝兔血0.2ml,培养离心后使用722型分光光度计测各组吸光度值,并计算溶血率。
4.口腔粘膜刺激试验:60-70天雄性叙利亚金黄地鼠30只,分6组（n=5）,分别按左侧对照组牙胶,右侧实验组试件缝合固定于颊囊上。观察2周后处死,肉眼观察试件周围黏膜组织,并取组织切片HE染色,使用光学显微镜进行组织学观察并评分。
研究结果1.通过细胞增殖试验显示:UZ、UR、SC组在观察期内细胞形态基本正常。L929细胞在分别与UZ、UZ+共培养的各时间段都表现出较高的细胞增殖率,其OD值与阴性对照间差异无统计学意义（P>0.05）。
UR和SC在培养5天后的细胞增殖率分别为87.1%和75.1%,其OD值与阴性对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。UR+和SC+在第5天的细胞增殖率为70.6%和58.4%,两组OD值与阴性对照组有差异具有统计学意义（P<0.05）。
2.通过溶血实验显示:以生理盐水组溶血率为0,蒸馏水组溶血率为100%。UZ、UZ+、UR、UR+、SC、SC+组材料溶血率分别为0.3%、1.6%、2.4%、3.7%、3.0%和4.4%,均小于5%,满足生物材料对溶血率的要求。
3.通过口腔黏膜刺激实验结果显示:肉眼观察UZ、UZ+、UR、UR+、SC、SC+组试件与黏膜组织接触部位均正常,无红斑。镜下观察颊囊组织基本正常,与阴性
对照组无明显差异,且镜下评分≤4,各实验组材料对口腔黏膜无刺激性。
结论1、CAD/CAM氧化锆和CAD/CAM树脂陶瓷较光固化树脂陶瓷具有更好的细胞相容性。粘接剂对树脂陶瓷材料,尤其对光固化树脂陶瓷的细胞增殖有略为明显的抑制作用。
2、CAD/CAM氧化锆、CAD/CAM树脂陶瓷和光固化树脂陶瓷在使用粘接剂前后均具有良好的血细胞相容性。3、CAD/CAM氧化锆、CAD/CAM树脂陶瓷和光固化树脂陶瓷在使用粘接剂前后均对口腔黏膜各层细胞表现出良好的相容性。
