盐酸小檗碱对肝纤维化大鼠肠道黏膜屏障的保护作用及机制

肝纤维化是多种慢性肝病进展的共同病理过 程,是我国严重的公共卫生问题，同时也是患者进展

为肝硬化甚至死亡的主要病因［1'2］。肝纤维化的发

病机制十分复杂，传统研究普遍认为肝脏纤维化的

纤维化大鼠肠道黏膜屏障的保护作用，并探讨其机制。方法

将大鼠随机分为正常对照组(CON组)、模型组(MOD 组)、乳果糖口服液组(LOL组)和盐酸小槃碱组(BH组)，除

CON组外，其他各组建立肝纤维化模型,LOL组按100 m/ kg的剂量灌胃乳果糖口服溶液,BH组按150 mg/kg的剂量 灌胃盐酸小槃碱药液,CON组和MOD组按10 ml/kg的剂量

灌胃生理盐水。各组连续灌胃12周。灌胃结束后，计算肝

脏指数和脾脏指数;检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶

(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶# AST)、碱性磷酸酶(ALP)、 透明质酸钠# HA)、层粘连蛋白(LN)、IV型胶原蛋白(IA-C)

及血清内毒素的含量&用HE染色观察肝脏和回肠病理变

化;用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印 迹法(Western blot)检测回肠中闭合蛋白(Claudins)、闭锁连

接蛋白O(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平。结果乳果糖 口服液和盐酸小槃碱可不同程度减轻大鼠肝脏指数和脾脏

指数(2 <0. 01,2 <0.05 )&乳果糖口服液和盐酸小槃碱可

减少血清中ALT、AST、ALP的含量(2 <0.01,2 <0.05)。乳 果糖口服液和盐酸小槃碱可减少大鼠血清中HA、LN'IVC 及内毒素的含量(2<0, 01,2 <0.05)&乳果糖口服液和盐

酸小槃碱改善了大鼠肝细胞、肝小叶、肝索的结构，并能减少

炎性细胞浸润&乳果糖口服液和盐酸小槃碱可减少回肠肠 黏膜充血、水肿及炎性细胞浸润&乳果糖口服液和盐酸小槃 碱均提高大鼠回肠中Cmudins、ZOO mRNA和蛋白表达水平 (2 <0.01,2 <0.05 )&结论 盐酸小槃碱对肝纤维化大鼠

肠道黏膜屏障具有保护作用,其机制可能与其调节回肠中肠

道屏障保护蛋白Cmudins、ZOO的表达有关。关键词盐酸小槃碱;肝纤维化;肠道黏膜屏障;机制中图分类号 R 392. 5文献标志码A 文章编号1000 -1492(2019)12 -1888 -06

doi：10. 19405/j. cnkd issnlOOO - 1492. 2019- 12. 0102019 -06 -27 接收基金项目：2018年度河南省重点研发与推广专项(编号:

182102310210)作者单位:1郑州大学附属南阳中心医院(南阳市中心医院)药学部,

南 (4730002郑州大学药学院，郑州450001作者简介:李 震，男，硕士,副主任药师；侯桂琴，女,副教授，博士，责任作者,E-mail: hougq@ zzu.

edu.cn形成主要包括肌成纤维细胞的形成和细胞外基质沉 积两个连续的过程。但近年研究［3\"4〕显示肝纤维化

与肠道黏膜屏障损伤有关。研究［5\"7］表明，盐酸小

糜碱具有抑菌和改善肠道菌群的作用，但尚不确定

其是否对肠道屏障有保护作用。基于此，该实验拟

通过肝纤维化模型探讨盐酸小糜碱对肝纤维化肠道

黏膜屏障的保护作用。1材料与方法1.1材料1 -1.1动物 健康SPF级雄性SD大鼠,40只，体 质量为200 -220 /,由湖北省实验动物研究中心提

供，许可证号:SCXK(鄂)2015 -0018。1.1.2 主要药晶及试剂 CCl4购自上海展云化工

有限公司，批号20180112 ；盐酸小糜碱购自吉林省

临江市健今药业有限责任公司，批号20180412;果 糖口服溶液购自莱阳江波制药有限责任公司,批准

文号：国药准字H20074010,生产批号：180721 ；丙氨

酸氨基转移酶(alanina aminotransferasa, ALT)、天门 冬氨酸氨基转移酶(aspa/ala aminotransferasa, AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatasa, ALP)生化

试剂盒购自南京建成生物技术有限公司，批号分别

为 20180712、20180614、20180523& 大鼠透明质酸

( hyaiueonicacid, HA) 、 ( iaminin, LN) 、 IV型胶原蛋白(typo IV collagen, IV-C )及内毒素 ELISA试剂盒、二抗(HRP标记山羊抗大鼠抗体)、

内参(p-actin)均购自武汉巴菲尔生物技术有限公

司，批号分别为 1800405、180610、180326、180617、 20180528、20180412; Takara 逆转录试剂盒、SYBR

Premia Ex Taq(TM)购自大连Takara公司，批号分别

为M9004、A2801;闭合蛋白(Claudins)、闭锁连接蛋

白-1 ( zonula occludens-1, ZO-1 )为兔抗鼠抗体,购自

英国Abeam公司，批号分别为W216327、W150077。1 -1-3 主要仪器 AE224型分析天平购自上海舜

安徽医科大学学报 Acta UniveTsitatis Me/icinalis Anhui 2019 Dcc；54(12)-18 -宇恒平科学仪器有限公司；FastTrackTM型紫外分光 取50 mg。参照TRIzol说明书提取回肠总mRNA,

用核酸蛋白仪检测纯度,纯度为1-8-2.2即可进行 下一步;按照Takara逆转录试剂盒说明书逆转录合 成cDNA,按照SYBR Premia Ex Taq[T试剂盒说明

光度计购自上海梅特勒-托利多有限公司；Genova

Bia型核酸蛋白分析仪购自苏州艾泰赫生化科技有

限公司;9700型PCR扩增仪购自美国ABI公司；

WDT413C型凝胶成像分析系统购自北京六一仪器

厂。l.2方法书依次添加试剂，用PCR仪进行基因扩增&每个基 因重复3次,用2-AACt表示mRNA相对表达水平。 Ciaudins、 ZOC1 及 -Cacein 1 。l-2.l动物分组 适应性饲养1周后将大鼠随机 分为正常对照组(control gwup, CON组)、模型组 表l引物序列

(model gwup, MOD 组)、乳果糖口 服液组(lactulose oral liquik gwup, LOL 组)和盐酸小糜碱组(berbeOna

hydwchloOkv gwup, BH 组)，每组 10 只，除 CON 组

外,其他各组制作肝纤维化模型&l-2.2肝纤维化模型的建立 参考文献⑷制作肝

纤维化模型：MOD组、LOL组和BH组按0. 1 m/ 100 g的剂量腹腔注射50% CC/橄榄油溶液,2次/

周，共12周。CON组按0. 1m/100g的剂量腹腔

注射橄榄油溶液,2次/周，共12周。l-2.3给药灌胃和给药同时进行，每天上午定时 造模,下午定时给药，即LOL组按100 mg/kg的剂 量灌胃乳果糖口服溶液,BH组按150 mg/kg的剂量

灌胃盐酸小糜碱药液，灌胃容积均为10 m/kg,CON

组和MOD组按10 ml/kg的剂量灌胃生理盐水，连 续灌胃12周,1次/d。l .2.4 指标检测1.2.4.1肝脏指数和脾脏指数 末次灌胃结束后 24 h取材，称重,用10%水合氯醛溶液按0.3 m/

100 g的剂量麻醉，麻醉好后经腹主动脉取血，分离

肝脏和脾脏,剥离脂肪韧带，擦干血水,称取肝脾重 量,计算脏器指数,脏器指数=脏器质量(g)/体质

量(g) x100%。1.2.4.2血清酶检测 采血后离心取上清液，检测

各组大鼠血清酶的表达水平，检测步骤按照各指标

的说明书进行。1.2.4.3 血清HA、LN、IV半及血清内毒素检测血后离 取上清液, 用 ELISA 检 各 大鼠 HA、 LN、IV半和内毒素的表达水平，检测步骤按照各指

标的说明书进行。1-2.4.4肝脏和肠道病理学检测 称重后，取肝右

叶和回肠，置4%多聚甲醛固定48 h,用HE染色观 察肝脏和回肠的病理改变。1.2. 4. 5 RT-CCR 检测回肠中 Claudine, ZO-1 mR-

NA表达水平 用RT-CCR检测检测回肠中Clau- dins、ZO-1 mRNA表达水平。取血后，分离回肠，称目的基因

引物序列

产物8度____________________________________________________________________(bp)

C/udins Fowardd'连GGGGGATGTGGAGGTGTGAGT'___________130Rewwe：5'- TTCCAACCATCACTCCCTGGT'ZO-1

Fowardd'-CGAGGAAGCTCCAAAGGTAT'

112Reeeose ：5'@CTCCTTCACTTTTATTTTCACAGTGCAA @3 '-actin Fornard: 5^CACCCGCGAGTACAACCTTCT' 221Reeeose：5'@CCCATACCCACCATCACACC@3'1.2.4. 6 Westeo blot 检测回肠中 C/udins、ZO-1

的蛋白表达 用Westeo blot检测4组大鼠回肠中

C iaudins、ZO C1 的

, GAPDH。 取肺组织50 mg,加蛋白裂解液，冰上研磨，以4 C、 12 000 oFmin 离 30 min, 取上清液, 用 BCA 质

试 盒分 定 4 ； 、 、转膜和室温圭寸闭；按抗体说明书加入一抗Claudins (1 : 300)和一抗 ZO-1(1 : 200)，置 4 C 冰箱过夜,

洗膜，再加入二抗(1 : 1 000 ),ECL显色;置于凝胶

图像成像分析系统，曝光各组蛋白条带，拍照&l.3统计学处理 采用SPSS 17. 0进行统计分析, 实验数据以1±p表示,多组间的比较采用单因素方

差分析，方差齐性时，多组间比较采用LSD法，方差 不齐时，采用Dunnete' s法,P <0. 05为差异有统计 学意义。2结果2.l肝脏指数和脾脏指数 与CON组相比,MOD

组大鼠肝脏指数和脾脏指数都明显升高(P <

0. 01)；与MOD组相比,LOL组和BH组大鼠肝脏指

数和脾脏指数均有不同程度降低(P <0.01,P <

0.05),其中BH组下降最为明显。见表2。2.2 血清酶的检测结果 与CON组相比,MOD组

大鼠血清中 ALT、 AST、 ALP 升 ( P <0.01 )；MOD 相 , LOL BH 大鼠 血清 中 ALT、

AST、ALP均有不同程度降低(P <0.01,P <0. 05),

其中 BH 下降 , 3。2.3血清MA、LN、IV-C及血清内毒素检测结果-10 -安徽医科大学学报 Acta UnhersPotis MePhinolis Anhui 2019 Dee %54 (12)表2各组大鼠肝脏指数和脾脏指数检测结果(1 ±s%)肝细胞大小均匀，整齐，肝索 小叶 整变、空泡样MOD组，也存组别CONMOD(m/kg)--100150脏指4.78 ±0.196.50 ±0.51 # #5.53 ±0.56##5.65 ±0.48##脏指0.26±0.08且排列整齐。MOD组大鼠肝细胞大小不一，排,小叶

变

0.54 ±0.14 # #0.38 ±0-11#索 ， 气

LOL细胞浸润& LOL： BH组大鼠肝细胞、1 & HE :较 整、整齐 ,BHF值2值0.40 ±0.09#0.8710.016小叶、肝索的

在 的 细胞浸润&

CON 大鼠

1.7440.175与 CON 组比较：## 2 <0.01 % 与 MOD 组比较：# 2<0- 05,## 2<0.01脱落、的

胞浸润& MOD组大鼠

表3各组大鼠血清酶检测结果(U/L,1 土 $,n = 10)，上皮黏膜间 细，绒毛变，肠黏膜充血、水肿， LOL BH

的 细胞浸润&组别CONMOD(m/kg)ALT42.47 ±14.71AST60.17 ±10.94.67 ±11.59##71.68 ±14.21##78.28 ±9.51##ALP73.52±11.43100.47±9.81 # #黏膜充血、水肿及炎性细胞2 &--69.75 ±15.16# #47.79 ±14.29##浸 2.5

改善&

LOLBHF值10015081.40±11.18##86.84 ±15.23#1.063RT-PCR检测结果 CON组大鼠回肠中52.25 ±9.15##Claudins^ZO-l mRNA表达水平较高，造模后，MOD

1.0760.3720.8540.474p值0.377组大鼠回肠中Claudins、ZO-1 mRNA表达水平降低 ( 2 <0.01 )， 后， LOL

BH 大鼠 5&与 CON 组比较：## 2 <0.01 % 与 MOD 组比较：# 2<0- 05,## 2<0.01中Claudins^ZO-l mRNA 表达水平升高(2 < 0. 05)，其

中BH组上升

与CON组相比，MOD组大鼠血清中HA、LN、IV-

&

2.6 Western blot检测结果 CON组大鼠回肠中Claudins^ZO-l

及内毒素

LOL

升高(2 <0.01)% MOD组相比,素水平较高，造 后，MOD组水平降低(2 大鼠回肠中ClaudinS'ZO-1 dins、ZO-1

均有不同程度降低(2<0- 01,2 < 0. 05),其中BH

0.01), 后，LOL： BH 组大鼠 中 CUu-

下降 2.4

， 4 &水平升 (2<0.01，2<0.05)，理组织学结果 肝脏HE染色:CON组大鼠其中BH组上升 & 6、图3&表4各组大鼠血清HA、LN、IV-C及血清内毒素检测结果(1士s,n = 10)组别CONMODLOLBHF值(m/kg)--100150HA( i/L)LN( i/L)73.35 ±13.68112.34 ±13.65 # #IVT( i/L)素(m/F)0.26±0.0925.24 ±9.7857.99 ±5.37##14.33 ±7.2843.79 ±10.76 # #25. 02 ±5.15##0.54 ±0.11 # #0.41 ±0.08##40. 69 ±10.45#42.63 ±5.54##86.17 ±12.93##94.38 ±14.73#0.15232.23 ±8.91#3.7620.46 ±0.08#0.2330.8733.7050.0202值0.9280.019与 CON 组比较：# # 2<0. 01；与 MOD 组比较:#2<0. 05,##2 <0.01图1各组大鼠肝组织HE染色结果 X400A： MOD % B： CON % C： LOL % D： BH安徽医科大学学报 Acta Universitatis Me/icinalis Anhui 2019 Dee %54( 12)-11 *图2各组大鼠回肠HE染色结果 x400A：MOD 组；B：CON 组；C：LOL 组；D：BH 组表5 各组大鼠回肠中Claudint'ZO-1 mRNA的表达水平（1土s,n =5）组别(mg/kg)C/udins mRNAZO-1 mRNACON-0.78 ±0.240.61 ±0. 12MOD-0.40 ±0.20 # #0.33 ±0. 14 # #LOL1000.59 ±0.15#0.46 ±0.11 #BH1500.61 ±0.22#0.55 ±0.15##;值0.4110.435P值0.7460.729与 CON 组比较：## P<0. 01；与 MOD 组比较：#P<0.05,##P<0.01表6各组大鼠回肠中Claudint、ZO1的灰度值（1±s，n =5）组别(mg/kg)C/udinsZO-1CON-1.06 ±0.260.87 ±0.28MOD-0.65 ±0.17 # #0.35 ±0. 19 # #LOL1000.86 ±0.22#0.59 ±0.24##BH1500.90 ±0.24#0.65 ±0.28#;值0.8140.233P值0.4950.873与 CON 组比较：## P<0. 01；与 MOD 组比较：#P<0.05,##P<0.01ABCDClaudins48ZO-156P-actin42图3各组大鼠回肠中Claudint'ZO-l蛋白条带图A： CON ；B： MOD ；C： LOL ； D： BH3讨论CC/是动物实验中诱导肝纤维化最广泛使用

的药物，一般而言，腹腔注射吧CC/ 15 min后即可 造成 ，48 h 峰，此后脏 修复期，因 3~4d就 成 化⑻。该实每周2 腔 50% CC/ 液，连续造模12周。肝脏HE,

，MOD组大鼠细胞大小不一， ，小叶 索 I紊乱， 气球样变、空泡样变和炎性细胞浸润&

ALT、AST、ALP是评价肝功能的重要指标，该研究显

示，造模后模型组大鼠血清中ALT、AST、ALP明显

升高（P<0. 01 ）&

化 许多慢性肝病的共同病理过程，肝脏细胞外基质（extrccellulcs matriv， ECM） 积 其主 （9一10）。ECM 的主要成分

，IV半是ECM的 成分之一,而HA和LN是IV半形成的主要成分，因 IV半、HA

和LN对 化的诊断

意义。该 :，MOD组大鼠血清中IV半、HA和LN的 明 CON组&综合HE；

、血清酶检IV和、HA、LN检 ，该 成功通过CC/诱导建立了 化大鼠模型&道黏膜屏障主

屏障、

屏障、化学屏障和生物屏障

分组成，是防

道

害物质 环境， 持 环境稳定的一道 屏障&该屏障中任何一功能出现紊，均 细 素的异位。研究（11）

化中

的肠道机械屏障 &肠道 屏障 主

道通透性& 道黏膜

屏障 上皮细胞及细胞间的接 成，因 道黏膜上皮间的 连接（tight functions，TJ）对于维持肠道黏膜 屏障的完整性尤 键（12）& TJ由许 接 组合构成， 合 （occludin ）、合 （C/udin家族）和闭锁连接蛋白（zonule occludens，ZOs），其 中C/udins和ZO-1 ，二者 道机屏障的 指标[13] & C/udins]

对肠道黏膜屏障 定性作用，主要存在 道上皮细胞间的T，一情况下仅允许小分

& ZO-1的氨基 C/udins竣基端相连，可将C/udins与细胞

・12・安徽医科大学学报 Acta Universitatis MePicinalts Anhui 2019 Dee；54(12)[6] 朱超霞，仓 桢，加孜热亚•再依拿提，等•盐酸小槃碱对高脂

饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肠道菌群的影响[J] •上 海交通大学学报(医学版)，2015,35(4) ：483 -8.骨架连接起来[14] & Claudins和ZO-1相互连接构成 肠道黏膜机械屏障，二者表达减少时会导致肠道黏 膜的通透性增加，从而使肠道黏膜的保护作用减 弱[15]&该实验表明，MOD组大鼠回肠有绒毛排列 紊乱，绒毛变短，肠黏膜充血、水肿，存有明显的炎性

[7] 黄 倜•黄连煎剂对代谢综合征SD大鼠肠道菌群及GPR43

通路glp-1和py的影响[D] •北京:北京中医药大学，2017.[8] 万 星，郭 琼,刘向东，等•鬼箭羽醇提物对四氯化碳诱导小

鼠肝纤维化模型的作用[J]-中国药理学通报，2018,34 (4 )：

485 -90.细胞浸润，同时回肠中ClaudinS'ZO-1 mRNA和蛋白

表达水平明显降低，因此，肝纤维化会伴随肠道机械 屏障功能受损，其受损原因可能与回肠中Claudins、 ZO-1的蛋白表达水平有关&[9 ] Cao H，Li S L，Xie R，et al. Explo/ng the mechanism of Dang-

guiaiuhuangDecoceion againsehepaeiciibeosisbyNeewoek Phaema-

coaogyand expeeimeneaavaaidaeion [ J] .FeonePhaemacoa， 2018 ，

该实验显示盐酸小糜碱可以明显改善肝脏和回

9 ：187 -97.的 ， 中 Caaudins、 ZO-1 的[10] 李芳群•肝纤维化大鼠肠道上皮屏障变化及贯叶连翘提取物

mRNA和蛋白表达水平&这说明盐酸小糜碱对肝纤

保护作用研究[D]-合肥:安徽医科大学，2016.[11] 周 莹,王振常•从改善肠黏膜屏障论大黄煎保留灌肠治疗肝

化大鼠 道黏膜屏障 护作用， 其与其改善回肠中Claudins、ZO-1的表达有关。参考文献[1] 田志良，秦春宏.肝纤维化的诊断研究进展[J].西南军医，

2018,20(3) ：379 -82-硬化自发性细菌性腹膜炎[J]-山东中医杂志,2018,37 (6 )：

452 -5.[12] 崔勇鹤，孙少明,李占武，等•肠道上皮细胞在肠道免疫屏障中

的维护及炎性肠病发生机制[J] •中国中西医结合消化杂志,

2019,27(2) ：160 -2-[ 13 ] ManabeA， FueukawaC， EndoS， eeaa.Chaoephenieamineinceeases

pa/ceOular permeability to marker fuorescein lucifes yellow medi­

[2] 张玲玲-糖皮质激素受体共伴侣蛋白FKBP51通过线粒体自噬

调节小鼠CC14诱导的肝脏纤维化[D].北京：北京协和医学 院，2017-ated by internalization of Occludin in mu/ne colonic epithelial cells[ J]. BNi Pharm Bull,2017 ,40(8) ：1299 -305.[ 3 ] Chen P， Chen Y， WangY， eeaa.Compaeaeiveevaauaeion oihepaeo-

protective activides of geni/oside，crocins and croceOn by CC-4 -in­

[14 ] Li X F, Zhang X J, Zhang C, et al. Ulinasta/n protects brain against

ceeebeaaichemiaLeepeeiu/ion inuueyeheough inhibieingMMP-9 and aaeviaeingaosoiZO-1 and occaudin peoeeinsin mice[ J] .Exp

duced lives inju/ in mice [ J ] - Biomol Thes ( Seoul)，2016，24

(2) ：156 -62.[4] 石鼎•肝硬化患者十二指肠微生态及益生菌干预肝纤维化

机制研究[D]-杭州:浙江大学，2018.Neurol,2018,302：68 -74.[15]邹小慧，陆付耳,舒婷婷，等•小槃碱改善肠黏膜屏障损伤及其

可能机制的实验研究[J] •武汉大学学报(医学版),2018,39

[5] 罗方云，黄晨^i，朱萱•肝硬化与肠屏障功能障碍相互影响的研究进展[J]•广东医学,2017,38(22) ：3543 -6.(2)：20; -12，218.Protective effec of bernerine hydrochlorine on intestinai

mucosai barrier in rate with hepatic finrosicLi Zhen1, Liu Wei2, Hou Guiqin2(1 Dept c Pharmacy, Fanyang Central Hospital, Nanyang Central Hospital AffiliateP i Zhengzhou

Unhefpy, Nanyang 473000;2School lO Pharmacy, Zhengzhou Unhefpy, Zhengzhou 450001 )Abstract Objective Ta investi/ala tha protective eWects of berbe/na hydmchm/na on intestinal mucosal bwearin rats with livar fibrosis and explore its mechanism. Methods Rats were i/ndomly divided into control group (CON group) , model group ( MOD group ) , lactulosa oral liquid group ( LOL group ) and berbe/na hydmchm/na

group ( BH group) - In addition to CON group, other groups established livar fibrosis modWs. In tha LOL group, tha lactulosa oral liquid was administered al / doss of 100 m/kg,tha BH group was administered with berbe/na liquid

al / doss of 150 m/kg,and tha CON group and tha MOD group were oralla adminatered with normal salina al / doss of 10 ml/kg. Each group was continuously administered for 12 weeks. Afar gastxc administration, livar indea

and spleen indea were calculated. Tha 110- of alanina aminotransferase( ALT) , aspwtala aminotransferase( AST), alkaline phosphatase( ALP) , sodium hyaluronate( HA) , laminin( LN) , typo I collagen( rV-C ) and endotoxin in

安徽医科大学学报 Acta UniveTsitatis Me/icinalis Anhui 2019 Dcc；54(12)-13 -网络出版时间：2019 -12-2 13 ：42 网络出版地址：http://kns. enki. net/kems/detail/34. 1065. r. 20191126. 1716. 011. htmlPERK在肝癌中的表达及其

对肝癌细胞侵袭和索拉菲尼抵抗的影响

周琲,鲁倩倩，范璐璐,孙国平摘要 目的 观察蛋白激酶RNA样内质网激酶#PERK)在

拉 抵抗肝细胞癌和对应癌旁组织中的表达，探究PERK基因在肝癌 细胞侵袭和索拉菲尼抵抗中的作用。方法免疫组化法检

中图分类号 R 735.7文献标志码A 文章编号1000 -1492(2019)12 -13 -06

doi： 10. 19405/j. enki. issnlOOO - 1492. 2019. 12. 011测PERK在人肝癌组织中的表达水平并分析其表达差异与 临床病理特征之间的关联性;利用脂质体转染干扰序列至肝 癌细胞，分为3组:对照组、sPNC转染组、P-/ERK转染组，

Western blot分析HepG2细胞基质金属蛋白酶T ( MMP2 )和

肝细胞癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其

发病率在所有肿瘤中排第六位，但在肿瘤所致死亡

原因中高居第二位，肝癌患者5年生存率极低，预后 相比于其他肿瘤较差［1］。肝癌细胞的高侵袭性和

基质金属蛋白酶T( MMP9)的表达变化，Tonsweli小室法检

查肝癌细胞的侵袭性能;HepG2细胞转染干扰序列后作用于 索拉菲尼，分为4组:对照组、索拉菲尼组、索拉菲尼+ w-NC

高频率发生的药物抵抗可能是肝细胞癌呈高度恶性

转染组、索拉菲尼+ P-/ERK转染组，流式细胞术分析各组

凋亡细胞比率。结果相比于癌旁组织,PERK在肝癌组织 中明显高表达，同时PERK高表达与肿瘤的血管侵犯具有关 联性;相比于对照组和P-NC转染组，sPPERK转染组MMP2

的原因。基质金属蛋白酶介导的细胞外基质和基底

膜降解参与肿瘤细胞侵袭的过程,肿瘤细胞借助降 解的屏障发生侵袭、转移等［2］。另外，肿瘤细胞可

以通过细胞内一系列适应性机制应对缺氧、药物等

和MMP9的蛋白表达明显降低、侵袭的细胞数目减少;PERK 的沉默显著提高HepG2细胞在索拉菲尼诱导下发生的凋 亡。结论PERK蛋白在肝癌组织中高表达且与肿瘤的侵 袭能力和索拉菲尼抵抗密切相关&不良刺激减少凋亡的发生以介导化疗抵抗。因此,

对肝癌细胞侵袭能力和化疗抵抗的相关机制研究将

关键词 肝细胞癌;蛋白激酶RNA样内质网激酶;侵袭;索2019 -07 -19 接收有益于提高肝细胞癌患者的预后和疗效蛋白 激酶 RNA 质 激 酶 ( pooeein kinaseRNACiikendopiasmicoeeicuium kinase， PERK) 一 质

跨膜蛋白，细胞内外各种病理因素所诱导的内质网 应激可以激活PERK的表达。PERK广泛参与到肿

瘤细胞凋亡和增殖、细胞存活、肿瘤微血管形成和肿 瘤细胞的浸润、转移等生物事件中⑷。因此，分析 PERK在肝癌中的表达及其与肿瘤生物学特征的关

基金项目：国家自然科学基金(编号：81872047)作者单位：安徽医科大学第一附属医院肿瘤科，合肥230022 作者简介:周琲,男,硕士研究生；孙国平，男，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，?

mail: sungp@ahmu.edu.cnseoum oioaesin each gooup weoedeeeceed.Lieeoand iieaipaehoiogicaichangesweoeobseoeed byHEseaining.Rea

time-CCR and Westew blot were used tv detect the expression of mRNA and protein of occlusion protein( Occludin)

and atresia connexin-1 ( ZO-1) in ileum. ResuUs Lactulose oral liquid and berbeOna could i/viata the /ver indexand spleen indea of rats in dkferent degrees( P < 0. 01 ,P <0. 05 ) - Lactulose oral liquid and berbeOna cou/ reduce ehe eeesoiALT， ASTand ALPin seeum( P <0.01 ， P <0.05) .Laceu oseoea7iquid and beebeeinecou7d eeduce the content of HA, LN,IR-F and endotoxin in ot sewm( P <0. 01 ,P <0. 05 ) - Lactulose oral liquid and berbeOna

impeoeeeheseeuceueeoieaehepaeocyees， hepaeiciobuiesand hepaeiccoeds， and couid eeduceiniiammaeoeyceiiniiiC

eea eion. Lac eu iose o ea i iiquid and beebeeinecouid eeducecoiaeeeaiineeseinaimucosaicongeseion， edemaand iniiamC maeoeyceiiniiieeaeion.Boeh iaceuioseoeaiiiquid and beebeeineinceeased eheexpeesion oiCiaudinsand ZOC1 mRC

NA and protein in ot ileum(P <0. 01 ,P <0. 05) - Conclusion BerbeOna hydwchloOkv has protective effects on

ineeseinaimucosaibaeieein eaeswieh iieeeiibeosis， and iesmechanismmaybeeeiaeed eoeheeeguiaeion oieheexpeesC sion oiineeseinaibaoieopooeeinsCiaudinsand ZOC1 .Key words berbeOna hydoch/Oda; liver fibrosis; intestinal mucosal bvOar; mechanism