●工艺技术 双中性蛋白酶水解制备花生活性肽的研究 张春红，张月秋。李晨，袁亚男，刘晓宇 摘要‘工素 沈阳农业大学食品学院（沈阳１１０８６６） 为提高花生蛋白资源的综合利用程度和简化生产工艺，以冷榨花生粕为原料、利用木瓜蛋白酶和复合蛋 白酶水解花生蛋白，研究制备和分离纯化花生活性肽的工艺条件，并对产品的主要活性进行分析。结果表明，优化 的酶解工艺条件为：底物浓度３％，加酶量５ ４４４ Ｕ／ｇ，木瓜蛋白酶与复合蛋白酶质量比１：２，ｐＨ ６．５；６３℃下水解１８０ ｍｉｎ，酶解液的水解度为３４．４６％±０．１２％，分布在１ ｋＤａ￣Ａ下的短肽占８５．１％。经超滤和Ｓｐｅｈａｄｅｘ Ｇ－１５分离纯化后得到 三个组分。花生短肽及其组分具有较高的抗氧化活性和一定的降胆固醇活性，其中组分Ⅲ的抗氧化活性最高。 关键词 花生粕；双酶水解；活性肽；分离纯化 Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｔｉｖｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒＯｍ Ｐｅａｎｕｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ Ｐａｐａｉｎ ａｎｄ Ｐｒｏｔａｍｅｘ Ｚｈａｎｇ Ｃｈｕｎ－ｈｏｎｇ，Ｚｈａｎｇ Ｙｕｅ－ｑｉｕ，Ｌｉ Ｃｈｅｎ，Ｙｕａｎ Ｙａ－ｎａｎ，Ｌｉｕ Ｘｉａｏ－ｙｕ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＦｏｏｄ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０８６６） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｍａｋｅｆｕｌｌｕｓｅｏｆｐｅａｎｕｔｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｓｏｕｒｃｅａｎｄ ｓｉｍｐｌｉｆｙｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ，ｃｏｌｄｐｒｅｓｓｅｄｐｅａｎｕｔｍｅａｌｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓｔｈｅｌａＷｍａｔｅｒｉａｌ，ｐｅａｎｕｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓ ｈｙａｒｏｌｙｚ￣ｂｙｐａｐａｉｎａｎｄｃｏｍｐｏｓｉｔｅｐｒｏｔｅａｓｅ，ｐｒｏｃｅｓｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆｐｒｅｌｍｍｔｉｏｎａｎｄ ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆｐｅａｎｕｔ ａｃｔｉｖｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｗｅｒｅ ｓｍ￣ｅ＆ａｎｄ ｍａｉｎ ａｃｉｔｖｉｔｉｅｓ ｏｆｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｅｓｒｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ ｃｏｎｄｉｉｔｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓ：ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｏｎｃｅｎｔｃｒａｔｉｏｎ ３％．ｅｎｚｙｍｅ－ｔｏ－ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｒａｔｉｏ ５ ４４４ Ｕ／ｇ，ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｒａｔｉｏ Ｉ：２（ｐａｐａ／ｎ：ｐｒｏｔａｍｅｘ）；ｐＨ ６．５；ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｅｍｐｅｍｔｕｒｅ ６３℃，ｒｅａｃ￣ｏｎｔｍｅ １ｉ８０ ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅ ｃｏｎ￣ｔｉｏｍ，ｔｈｅ ＤＨｗａｓ ３４．４６％ｉ－０．１２％．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ １ ｋＤａ ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ８５．１％．Ｔｈｒｅｅ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ ｕｌｌｒａｆｉｌｔｍｔｉｏｎ ａｎｄ ＳｐｅｈａｄｅｘＧ－１５．Ｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅａｎｄｉｔｓｆｒａｃｔｉｏｎｓｈａｄｈｉｇｈｅｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ－ｌｏｗｅｒｉｎｇａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ，ａｎｄｆ／ａｃｔｉｏｎ ＩＩＩ ｈａｄ ｈｅｈｉｇｈｅｔｓｔａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｉｔｖｉｅｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｐｅａｎｕｔｍｅａｌ；ｄｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ；ａｃｔｉｖｅｐｅｐｔｉｄｅ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ 花生（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ Ｌ．）为一年生豆科植物 质２５％～３６％，其营养价值可与动物蛋白相媲美…。 种子，是中国四大油料作物之一。花生中约含蛋白 目前，我国５０％以上的花生用于榨油，制油的副产 参考文献： 【１】ＩＢＡＮＯＧＬＵ Ｅ，ＥＲＧＥＬＥＢＩ Ｅ Ａ．Ｔｈｅｒｍａｌ ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｍｐｅｍｍ ｏｆｅｇｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄ ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｇｒａｎｕｌｅ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｏｆ ｅｇｇ ｙｏｌｋ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＦｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，６２（３）：４８４—４８７． ［７］ＤＥＮＭＡＴ ＬＥ Ｍ，ＡＮＴＯＮ Ｍ，ＢＥＡＵＭＡＬ Ｖ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ Ｏ／Ｗ ｇｕｍｓ［Ｊ１．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７（１０１）：６２６—６３３． 【２】陈有亮，杨燕军．蛋黄酱的稳定性研究Ｕ】．中国调味品， ２００４（１ １）：８－１０． ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｍａｙｏｎｎａｉｓｅ：ａ ｒｅｖｉｅｗ叩．Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｑｕａｈｔｙ， １９８５，８（１）：１—２０． ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｈｅｎ ｅｇｇ ｙｏｌｋ，ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｇｒａｎｕｌｅｓ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ，２０００（１４）：５３９—５４９． ［３】ＨＡＲＲＩＯＮ Ｌ Ｊ，ＣＵＮＮＩＮＧＨＡＭ Ｆ Ｅ．Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ 【８］ＷＥＢＢ Ｎ Ｂ，ＩⅦＹ Ｆ Ｊ，ＣＲＡＩＧ Ｈ Ｂ．ｅｔ １ａ．Ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７０（３５）：５０１～５０４． ［４】ＨＡＲＲＩＳＯＮ Ｌ Ｊ，ＣＵＮＮＩＮＧＨＡＭ Ｆ Ｅ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｒｆｏｚｅｎ 【９】顾振宇，江美都，付道才，等．大豆分离蛋白乳化性的研究 ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｓａｌｔｅｄ ｙｏｌｋ ａｎｄ ｉｔｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ 中国粮油学报，２０００，１５（３）：３２－３５． 【１０］ＡＮＴＯＮＭ，ＤＥＮＭＡＴＭ ＧＡＮＤＥＭＥＲＧ．Ｔｈｅｔｍｏｓｔａｂｉｌｉｙｔ ｏｆ Ｈｅｎ Ｅｇｇ Ｙｏｌｋ Ｇｒａｎｕｌｅｓ：Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａｔｉｖｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｍａｙｏｎｎａｉｓｅ［Ｊ］－Ｊｏｕｍａ１ ｏｆＦｏｏｄ Ｑｕａｌｉｙ，１ｔ９８６（９）：１６７—１７４． 【５】ＳＥＶＥＲＡ Ｌ，ＮＥＤ０ＭｏＶＡＳ，ＢＵＣＨＡＲ Ｊ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｓｔｏｒｉｎｇ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ ｏｆ ａｎ ｅｇｇ ｏｆＧｒａｎｕｌｅｓ［Ｊ１．Ｊｏｕｍａｌ ｏｆＦｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００（６５）：５８１—５８４． Ｉ１１】ＣＨＡＮＧＣ帆ＰＯＷＲＩＥＷＤ，ＦＴＡ＇ｑＮＥＭＡＯ．Ｍｉｃｍｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｙｏｌｋ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＦｏｏｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１０（９６）：２６６—２６９． 【６ ＡＮＴＯＮ Ｍ，ＧＡＮＤＥＭＥＲ Ｇ．Ｃｏｍｐｏｓ６Ｊｉｔｉｏｎ，ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｇｇ ｙｏｌｋ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＦｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７７（４２）：１１９３—１２００． 《食品工业｝２０１４年：ｇ３５ｇｇ ９期 ，，、， 品工案 物——花生粕主要用作饲料。同大豆相比，花生蛋白 ●工艺技术 ６）数据分析：通过的三次重复试验得出数据 的研究和利用相对落后，在很大程度上制约了花生产 平均值，使用ＳＡＳ．９２软件进行显著性分析。 业的快速发展。 ２结果与分析 研究发现，利用酶解法制备的短肽比蛋白质和 氨基酸吸收效果好。以某些食物蛋白为原料经酶解 ２．１蛋白酶的筛选 制备的短肽具有矿物结合、免疫调节 】、抗菌、抗血 选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味酶、中性蛋 栓【３ｌ、降血压Ｈｌ、降胆固醇㈣等生理活性，选择适宜 白酶、复合蛋白酶和Ｎ１２０Ｐ六种蛋白酶对花生蛋白进 的蛋白酶水解可将其中的功能性肽段释放出来。为 行酶解，考虑到大量使用碱性蛋白酶会造成后续产品 提高短肽的得率，现有的研究主要集中在利用碱性 中含盐量过高、脱盐工艺复杂等问题，采用中性蛋白 蛋白酶水解蛋白，在水解过程中需要添加碱液维持 酶进行水解，可节省后续脱盐的工序，简化生产工 体系的ｐＨ，造成产品中灰分含量高，后续脱盐工序 艺。通过单一酶和复合酶的筛选，确定采用木瓜蛋白 复杂等的问题 一”。试验以冷榨花生粕为原料，利用 酶与复合蛋白酶同步复合酶解制备花生肽，适宜的木 木瓜蛋白酶和复合蛋白酶同步水解花生蛋白制备活性 瓜蛋白酶与复合蛋白酶质量比为１：２。 肽，为花生肽的进一步研究提供理论依据，促进花生蛋 ２．２复合酶解花生蛋白的工艺优化 白资源的有效利用。 ２．２．１水解底物浓度的确定 由图１４知，随着底物浓度的增加水解度呈下降 １材料与方法 趋势。综合考虑实际生产中的生产效率和生产成本等 １．１材料与试剂 因素。因此，确定适宜的底物浓度为４％。 冷榨花生粕：山东高唐蓝山公司；木瓜蛋白酶： 南宁魇博生物工程有限公司；碱性蛋白酶，风味 酶，中性蛋白酶，复合蛋白酶：丹麦诺维信公司； Ｎ１２０Ｐ：爱尔兰凯丽公司；其他试剂：均为分析纯。 １．２仪器与设备 ＣＳ５０１一ＳＰ数显恒温震荡水浴锅：重庆四达实验 仪器有限公司；ＵＶ一１２０１紫外分光光度计：北京瑞利 分析仪器公司；ＰＨＳ一２５型数显ｐＨ计：上海精密科学 仪器有限公司；微型旋涡混合仪：上海沪西分析仪器 厂；Ｗａｔｅｒｓ ６００高效液相色谱仪：Ｗａｔｅｒｓ公司；８４００ 型杯式超滤器：Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；ＬＧＪ一２５冷冻干 图１ 底物浓度对水解度的影响 燥机：北京四环科学仪器公司；玻璃层析柱（１．６×６０ ２．２．２蛋白酶用量的确定 由图２可知，随着酶用量增加水解度呈上升趋 ｅｍ）：上海华美实验仪器厂；ＤＨＬ—Ａ电脑恒流泵： 上海沪西分析仪器厂：ＤＢＳ一１００电脑全自动部分收集 势，在４ ５００ Ｕ／ｇｌ３￣达到２７．２１％４－０．０５％，之后水解度 器：上海沪西分析仪器厂。 增加变慢，经显著性分析无差异。因此，确定适宜的 １．３试验方法 酶用量为４ ５００ Ｕ／ｇ左右。 １）花生肽的制备：首先将花生粕粉碎过１００目 筛，利用碱溶酸沉法制成分离蛋白。将花生蛋白配 制成一定浓度溶液，８Ｏ℃下预热１０ ｒａｉｎ，用１ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液调节到一定ｐＨ，加人蛋白酶后在一定温度 下水解。反应过程中不断搅拌，并保证体系ｐＨ恒定。 ９０℃水浴加热１５ ｍｉｎ，冷却至室温，４ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １５ ｍｉｎ，上清液即为花生肽溶液。 ２）水解度（ＤＨ）的测定：采用ｐＨ—Ｓｔａｒ法【８Ｊ。 ３１肽分子量的测定 】：采用ＧＢ／Ｔ ２２４９２－－２００８中 肽相对分子质量分布的测定方法测定产品中的肽分 子量。 图２ 复合酶用量对水解度的影响 ２．２．３水解温度的确定 ４）胆固醇抑制率的测定 。 ５１抗氧化性（超氧阴离子自由基、羟自由基和 由图３可知，在４５℃～７０℃范围内，水解度呈现 ＤＰＰＨ自由基）的测定 。 先增高后降低趋势。当酶解温度为６０℃时，水解度达 ｌ０４・ 《食品工业））２０１４年第３５卷第９期 基金项目：“十二五”国家科技支撑计划项目（２０１２ＢＡＤ３６Ｂ０６）；辽 宁省自然基金资助项目（２０１３０２００６７） 到最大值２４．１２％－Ｉ－０．０５％。因此，确定复合酶解的适 表１ 中心组合试验方案与结果 宜温度为６０℃。 图３水解温度对水解度的影响 ２．２．４水解反应时间的确定 由图４可知，随反应时间延长，水解度呈先增加 然后趋于平缓的趋势。水解１５０ ｍｉｎｔ￣，水解度达到 ２７．２１％±０．００％，经显著性分析发现随着时间延长水 解度变化不显著。因此，确定适宜的反应时间为１５０ ａｒｉｎ左右 图４ 反应时间对水解度的影响 ２．２．５复合酶解花生蛋白响应面试验 根据Ｃｅｎｔｒａｌ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｄｅｓｉｇｎ原理设计４因素３水 平响应面试验，中心组合试验方案与结果如表１所 示。利用Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘｐｅｒｔ统计软件对试验结果进行回归 分析，回归方程的方差显著性检验分析结果如表２ 所示。 在此基础上，以水解度为响应值ｙ，建立二次 响应面回归模型。回归方程为：Ｙ＝３２．４９＋１．４０Ａ一 ０．９４Ｂ＋１．３６Ｃ＋１．０２Ｄ＋０．４０ＡＢ一０．４５ＡＣ＋０．３６ＢＤ一０．２８Ａ 一 １．１０Ｃ ，Ｒ ＝０．９６８ ３。通过对方程求解，得出水解花 生蛋白优化条件为底物浓度３％，加酶量５ ４４４ Ｕ／ｇ， ６３℃下水解１８０ ｍｉｎ时，水解度的预测值为３４．６６％。 在此条件下进行验证试验，水解度的实测值为 ３４．４６％－ｔ－Ｏ．１２％，与理论预测值基本相符。 ２．３花生短肽分子量分布的测定 由表３可知，花生蛋白在复合蛋白酶的作用下水 解程度较高，花生蛋白被水解为分子量较小的肽段， 短肽的相对分子量分布在１８０ Ｄａ～１５ ９７４ Ｄａ之间，其 中分布在ｌｋＤａ以下的短肽占８５．１％。 （食品三业》２０１４年第３５ｓｇｇ ９期，，、 嚷品工素 表３ 花生短肽的分子置分布 ●工艺技术 ３ 结论 １）适宜水解花生蛋白的蛋白酶为木瓜蛋白酶和复 合蛋白酶。 ２）优化的酶解工艺条件为：底物浓度３％，加酶 量５ ４４４ Ｕ／ｇ，木瓜蛋白酶与复合蛋白酶质量ＬＬ１：２； ｐＨ ６．５；６３ ｏＣ下水解１８０ ｍｉｎ。此条件下，酶解液的水 解度为３４．４６％±０．１２％。利用两种蛋白酶对花生蛋白 同步进行酶解，可在一定程度上提高酶解效率，缩短 ２．４花生短肽的分离纯化 酶解时间。 ３）花生短肽的相对分子量分布在１８０～１５ ９７４ Ｄａ ２．４．１超滤 分别采用截留分子量为５ ｋＤａ和１ ｋＤａ的超滤膜对 之间，其中分布在１ ｋＤａ以下的短肽占８５．１％。经超滤 花生肽进行超滤。超滤结果如表４所示。 和Ｓｐｅｈａｄｅｘ Ｇ一１５分离纯化后可得Ｎ３个组分。 由表４可知，超滤后小于１ ｋＤａ短肽含量高达 ４１花生短肽及其组分具有较高的抗氧化和一定的 ８０．７１％ 降胆固醇活性，其中组分Ⅲ的抗氧化活性最高。 参考文献： 表４ 超滤后不同分子量花生肽所占比例 ［１］张昕蕾，倪德培，江志炜．花生及花生蛋白的制取技术进 展ｍ．中国油脂，１９９８，２３（４）：３－５． 【２】ＧＡＵＴＨＩＥＲ Ｓ Ｆ，ＰＯＵＬＩＯＴ Ｙ，ＳＡＩＮＴ—ＳＡＵＶＥＵＲ Ｄ． ２．４．２凝胶柱层析 Ｉｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ 采用Ｓｐｅｈａｄｅｘ Ｇ一１５对分子量小于１ ｋＤａ的短肽进 ｏｆｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ ＤａｉｒｙＪ，２００６（１６）：１９７—２１１． 行初步分离。分离层析条件为：样品质量浓度４０ ｍｇ／ 【３】ＳＨＩＭＩＺＵ Ｍ，ＳＡＷＡＳＨＩＴＡ Ｎ，Ｍ０ＲＩＭＡＴｓｕ Ｆ，ｅｔ ａ１． ｍＬ，上样量２ ｍＬ，蒸馏水洗脱流速０．２ ｍＬ／ｍｉｎ；在２２０ Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｐａｐａｉｎ——ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎｍ处测定吸光度。结果如图５所示。 ｐｏｒｋ ｍｅａｔ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ，２００９（１２３）：７５３—７５７． 由图５可知，利用Ｓｐｅｈａｄｅｘ Ｇ一１５对分子量小于１ ｋＤａ的短肽进行分离后得到组分Ｉ、组分Ⅱ和组分Ⅲ 【４］ＫＯＲＨＯＮＥＮ Ｈ，ＰＩＨＬＡＮＴＯ Ａ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ： ３个组分。分别收集３个组分经真空冷冻干燥后测定其 ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ［ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄａｉｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ， 活性。 ２００６（１６）：９４５—９６０． ［５】ＳＡＴＯＳＨＩ ＮＡＧＡＯＫＡ，ＡＴＳＵＳＨＩ ＮＡＫＡＭＵＲＡ， ＞ ｇ ＨＡＲＵＨＩＫＯ ＳＨＩＢＡＴＡ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｙｓｔａｔｉｎ（ＶＡＷＷＭＹ），ａ Ｎｏｖｅｌ Ｂｉｌｅ Ａｃｉｄ—Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ Ｍｉｃｅｌｌａｒ Ｓｏｌｕｂｉｈｔｙ 亩 盈 ａｎｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｎ Ｒａｔｓ［Ｊ１．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ，２０１０（ｒ７４）：１７３８—１７４１． ３０ 酏 ９０ １２０ ｌ５０ １８０ ２１０ ２４０ ２７ａ ３００ ３３０ 时间／ａｒｉｎ ［６范远景，孟凡莉，易苗苗，等．酶解花生蛋白制备功能性短 ６］肽条件优化研究Ｕ】．食品科学，２０１０，３１（１８）：３１－３６． ［７】刘４）１１，刘晔，沈娜娜．花生肽的制备及其功能特 ｉ￣－Ｏ］．中 国油脂，２０１３，３８（３）：３１－３３． 图５ 凝胶Ｇ１ ５分离纯化花生短肽图谱 ２．５花生短肽的活性分析 由表５可知，花生短肽及其组分具有较高的抗氧 ８】ＡＤＬＥＲ—ＮＩＳＳＥＮ Ｊ．Ｅｎｚｙｍｉｃ Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ 化和一定的降胆固醇活性，其中组分Ⅲ的抗氧化活性 【最高。 【ＤＪ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ａｐｐｆｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｈｓｈｅｒｓ，１９８６． 表５ 花生短肽及其组分的活性 ［９］王春艳．杏仁短肽制备及其降血压活性研究【Ｄ］．北京：中 国农业科学院，２０１１． 【１０】ＮＡＧＡＯＫＡ Ｓ，ＦＵＴＡＭＵＲＡ Ｙ，ＭＩＷＡ Ｋ，ｅｔ ａ１． Ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｈｙ—ｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｂｏｖｉｎｅｍｉｌｋ ～Ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕ—ｌｉｎ［Ｊ】．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｌａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００１（２８１）：１１—１７． ，，、 《食品工业｝２０１４＃－ｇ３５ｇｇ ９期
