第２２卷 第３期 ２００８正 山东轻工业学院学报 Ｖ０１．２２．Ｎｏ．３ Ｓｅｐ． ２００８ ９月 ＪＯＵＲＮＡＬ ｏＦ ＳＨＡＮＤＯＮＧ ＩＮＳｆｌｑＵｑ￣ＯＦ ＬＩＧＨＴ ＩＮＤＵｓｒＲＹ 文章编号：１００４—４２８０（２００８）０３—００１２—０２ 三黄片中盐酸小檗碱的ＨＰＬＣ含量测定方法研究、 何 军 ，李 涛 ，刘晓辉 （１．山东润华药业有限公司，山东济南２５０１＂１７；２．山东轻工业学院校医院，山东济南２５０３５３： ３．山东省科学院情报研究所，山东济南２５００１４） 摘要：建立了三黄片中盐酸小檗ｃ。 碱含量的高效液相色谱测定方法。具体方法为：采用中性氧化铝对样品进行了 前处理；采用ｏｈ￣ｎｏｍｅｎｅｘ—Ｃｌ８柱（４．６ Ｉｎｔｏｘ ２５０ ｍｍ）以乙腈一０．０３３ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾水溶液（３０：７０）为流动相，检测波 长：３２５ ｒｉｍ；进样量１０ 。结果显示盐酸小檗碱和其它成分能获得基线分离，线性关系良好，平均加样回收率为 １００．５９％，ＲＳＤ ２．６％（ｎ＝５）。该法结果准确，分离效果好，可用于三黄片的质量控制。 关键词：ＨＰＬＣ；三黄片；盐酸小檗碱；中性氧化铝 中图分类号：ＴＱ４６０．６ ‘ 文献标识码：Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ Ｓａｎｈｕａｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ ＨＥ Ｊｕｎ ，ＬＩ Ｔａｏ２，ＬＩＵ Ｘｉａｏ—ｈｕｉ （１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｒｕｎｈｕａ Ｐｈａｎｎｅｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｊｉｎａｎ ２５０１ １７，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｊｉｎａｎ ２５０３５３，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉｎａｎ ２５００１４，Ｃｈｉａ）ｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ Ｓ￣ｕａｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｍｓｕｈｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ａ ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ—Ｃ１８ ｃｏｌｌｕｍｎ（４．６ ｍｎｌ ｘ ２５０ ｍｍ）；ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ：ａ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ０．０３３ ｍｏｌ／Ｌ～ＫＨ２ＰＯ４一ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（３０：７０， Ｖ）；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：３２５ Ｂｉｎ；ｉｎ— ｉｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ：１０ Ｌ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｌｓｏ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ Ｓａｎｈｕａｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ ｗｅｒｅ ｗｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｅｄ．Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｈａｄ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｆｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ６．２０～１３．９５ ｒｎＬ ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ Ｗａｓ １００．５９％，ＲＳＤ：２．６％（ｎ＝５）．Ｔｈｅ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｅｒｂｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ Ｓ￣ｕａｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｓａｎｈｕａｎｇ ｔａｂｌｅｔｓ；ｅｒｂｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ；ｎｅｕｔｒａｌ Ａ１２ ０３ 三黄片是由大黄、黄芩、盐酸小檗碱三味药组成 的复方制剂，具有清热泻火、消炎利便之功效。２００５ 版《中国药典》中该制剂仅有大黄的含量测定¨ 。为 溶液成分较为复杂，易对色谱柱造成污染，故采用中 性氧化铝对样品进行了前处理。研究结果显示建立 的方法准确可靠，专属性强，简便快捷，可用于该制 剂中盐酸小檗碱的含量测定。 有效控制产品质量，保证临床用药的安全、有效，有 关学者采用ＨＰＬＣ法对三黄片中盐酸小檗碱进行了 含量测定＿２Ｉ４Ｊ。笔者在采用ＨＰＬＣ法对三黄片中盐 酸小檗碱进行含量测定的试验过程中发现，供试品 收稿日期：２００８—０４—０２ １仪器与试药 作者简介：何军（１９８０一），男，山东省荣城市人，山东润华药业有限公司质检部，中药师，山东中医药大学学士，主要从事中药新药研究 开发方面的工作． 第３期 －何军，等：三黄片中盐酸小檗碱的ＨＰＬＣ含量测定方法研究 １３ ＬＣ一１０Ａｔｖｐ岛津高效液相色谱仪，甲醇、乙腈 为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，水为二次蒸馏水。 盐酸小檗碱对照品（购自中国药品生物制品检定所， 含量测定用。批号：１１０７１３—２００２０８）。 ２方法与结果 ２．１色谱条件 色谱柱：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ．Ｃ１８柱（４．６ ｒａｉｎ×２５０ ｌＴｌｌｎ）； 流动相：乙腈一０．０３３ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾水溶液 （３０：７０）；检测波长：３２５ ｎｒｎ；柱温：３０℃；流速： １．０ ｍＥ／ａｒｉｎ；进样量：ｌ０ 。理论塔板数：按盐酸小 檗碱计算不低于５０００。盐酸小檗碱峰与相邻杂峰 的分离度应符合要求。 ２．２样品制备 ２．２．１对照品溶液制备 取盐酸小檗碱标准品５ ｍｇ，精密称定，置５０ ｍＬ 容量瓶中加甲醇使溶解，定容，摇匀作为对照品储备 液；精密量取１．０ ｔｎＬ，置１０ ｍＬ容量瓶中，加流动相 稀释定容，摇匀，即得。 ２．２．２供试品溶液制备 取本片２Ｏ片，除去包衣，精密称定，研细（过３ 号筛），精密称取适量（约相当于１片的重量），置 ５０ ｎ１Ｉ苍量瓶中，加浓ＨＣ１．甲醇（１：１００）约４０ ，振 摇数次，超声２０ ｍｉｎ，冷却，用甲醇稀释定容，静置。 上清液过中性氧化铝柱，精密量取续滤液１．０ ｚｎＬ， 置１０ ｍＬ容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用 ０．４５／ｘｍ微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 ２．２．３阴性溶液制备 按处方比例取除盐酸小檗碱外的药材同２．２．２ 项方法制成阴性溶液。 ２．３专属性试验 取供试品溶液、对照品溶液和阴性溶液各 １０ ，在上述色谱条件下进样，分析，供试品溶液主 峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致，阴性 无干扰。 ２．４线性关系考察 依次精密吸取６．２０、７．７５、９．３０、１０．８５、１２．４０、 １３．９５六个浓度（ｔ￣ｇ／ｍＬ）的对照品溶液各１０ ，分 别进样，按上述色谱条件测定峰面积。以盐酸小檗 碱进样量对峰面积积分值Ａ做线性回归，其回归方 程：Ｙ＝一２９３８．８＋１５３３８．５ｘ，ｒ＝０．９９９４。结果表 明，盐酸小檗碱在６．２０～１３．９５ ｔ￣ｇ／ｍＬ范围内与峰面 积线性关系良好。 ２．５精密度试验 精密吸取供试品溶液ｌ０ ，连续５次进样测 定，峰面积平均值为１５２６７９．２，ＲＳＤ＝０．６％。 ２．６稳定性试验 取室温放置的同一份供试品溶液（批号： ２００５０２１０），于配制后的０、２、４、６、８、１０ ｈ各进样１ 次，共进样６次，所得峰面积的平均值为１５６８２７．５， ＲＳＤ为０．８％。表明供试品溶液在室温１０ ｈ内稳 定。 ２．７重复性试验 取样品（批号：２００５０２１０）制备供试品溶液５份， 分别进样测定，并计算含量，平均值为５．４ ｍｇ／片， ＲＳＤ为１．６％。 ２．８回收率试验 精密称取已知含量的样品适量，分别精密添加 标准品适量，按供试品溶液制备方法处理样品，测 Ｄ Ｄ Ｄ ０ Ｄ 定，计算回收率，结果表明本方法回收率好，方法可 行。结果见表１。 ２ ２ ２ ２ ２ 表１回收率考察结果 鼢 镪 样品 ｔ丰盐酸小檗小檗碱对小檗碱总 率 收率 囊篆譬 ２ ２ ２ ２ ２ 样品 ／ｏ／。 碱量，『Ｔ１ｇ照品，Ⅱ１ｇ 量，ｎ１ｇ ，％ ／ ％ …．５ ５ ５ ５ ５ ∞∞∞∞∞ 啪 瑚Ⅲ ∞ ２．９样品测定 取５批样品，依法制备供试品溶液，分别取对照 ２ ６ 品溶液、供试品溶液各１０ 进样，测定峰面积，按 外标法计算含量，结果见表２。 表２ ５批三黄片盐酸小檗碱的含量测定结果（ｎ＝５） 样品批号 ２００５０２１７ ２００５０２１８ ２００５０２２０ ２００５０３１０ ２００５０３１５ 含量／嗽．片 蘖 ———一５＿４４５ ４・９２７ —５・ｌ７８ —４・７７９ ５・ｏ８５ 一 ３讨论 ３．１流动相选择 曾对乙腈一０．０３３ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾水溶液比 例按６０：４０、５５：４５、４５：５５、０４：６０、３０：７０进行考察，结 果发现，以乙腈一０．０３３ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾水溶液 （３０：７０）为流动相，样品中盐酸小檗碱分离效果理 想。 ３．２提取条件的选择 （下转第６６页） ６６ 山东轻工业学院学报 第２２卷 （上接第ｌ３页） 曾试用回流与超声提取样品进行对比，结果发 现二者提取效果相差无几，超声较为简单、节能，故 选择超声提取。超声提取时间考察结果表明盐酸小 檗碱经超声提取２０ ｍｉｎ即可提取完全。 ［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００５． ［２］段志红，董利富，张雯洁，等．三黄片中盐酸小檗碱的ＦＩＰＬＣ测 定［Ｊ］．云南中医学院学报，２００３，１６（４）：１７—１９． 【３］周文枭，曾立威，刘伟林．ＨＰＬＥ测定三黄片中盐酸小檗碱的含 量［Ｊ］．华西药学杂志，２００３，１９（３）：２２１—２２３． ［４］李小燕．ＨＰＬＥ法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量【Ｊ］．中成药， ２Ｏ０２，２４（９）：６７９—６８０． 参考文献： ［１］中华人民共和国药典编写委员会．中华人民共和国药典（一部）
