维普资讯 http://www.cqvip.com （ ｌ按封３）１５ｌＴｉｓｃｈｅ ｒＥ．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ Ｒ，ＨａｒｔｍａｎＴ，ｄ ．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅｆｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ∞一 ｄｏｔｈｅｌｉａ ｆａｃｔ￣，ｎｍｈｉｐｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｍｓ ａｒｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｚｘｏｎ ｓｐｌ￣ｉｎｇ［Ｊ Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏ１．ａ舢，１９９１，２６６：２６０３ｌ一２６０３７． １ｌ６ ＪＫｌ／ｌｇ￣ｌｌＵｌ Ｍ，Ｄａｍｏｍ ＰＡ． ａｔ０ｒｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｌＪ Ｊ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ． Ｐｈ￣ｏｌ，１９９１。５３（２）：２１７—２３９． ［１ ］毛春明，杨晓．ＴＧＦ一８在创伤愈合中的作用［Ｊ］．军事医学科学院 刊，２∞ｌ。２５（３）：２３２—２３５． １ｌ８ ｌ Ｂｉｃｋｎｅｌｌ Ｒ。ａｎｄ Ｖａｌｌｅｅ Ｂ Ｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｓ６ｍｕｌａｔｅｓ ｅｎｄｏｔ｝１ｅｂａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｓｔａｃｙｄｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｆｉｖａｔｉ０ｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２ ｌＪ Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａ－ ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６：１５７３—１５７７． １ｌ９ ＪＳｒｏｇｉ Ｅ，Ｗｕ Ｔ，ｄ ａ／．Ｉｎｄｉｒｅｃｔ ａｎｇｉ ∞ｉｃ ｃ￣ｏｋｉｎｅｓ ｕｐｍｇｕｌａｔｅ、１ＥｃＦ ａｎｄ ｂＦＧＦ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅ￣ａｉｏｎ ｉｎ ｖａ￣ｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｒｒｍｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ，ｗｈｅｒｅａｓ ｈ）１３ｏｘｉａ ｕｐｒｅｇｕ－ ｌａｔｅｓ ＶＥＧＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎｌｙｌ Ｊ １．Ｃｉｒｔａｄａｔｉｏｎ，１９９４，９０：６４９—６５２． ［２０］Ｍ￣ｏｎ ＪＣ，Ｌｉｄｉｎ￣ｏｎ Ｅ Ａ，Ａｂｒｏａｄ ＳＲ，ｄ ａ／．ｂＦＧＦ ａｎｄ、 ＧＦ ｓ）ａａｅｒｇｉｓｔｉ・ ｃａｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｄｅｃａｖ—ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ …．Ａｍ Ｊ ＰｔＩ ０Ⅱ，２０（１２，２８２：Ｃ５７８—５８７． １２１ ｌＰａ呲ｉ Ｍ，Ｈｅｒｍａｎ ＩＭ．Ｍ∞ｈ且ｎｉｓｒｎｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｔｌｍ￣ｏｒ—ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎｇｉｏ－ ｇｅｎｅｓｉｓ ｌＪ Ｊ．Ａｍ Ｊ ＰＩｌｙ ，２１３１３２，２８２：９４７—９７０． ｝２２ ＪＳｆｔ＇ｉｌｏｒｌ￣ＰＶ，Ｇｕｅｒｒｉｎ Ｍ，Ｃｈｏｌｌｅ Ｐ，ｄ ａ／．Ｖａｓｃｕｌｏｔｒｏｐｉｎ—Ｖ耐ｓｔｉｍｕｌａｒｅｓ ｒｅｔｉｎａｌ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｌｌ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｐａｔｈｗａｙ ｌＪ Ｊ．Ｉｎｖｅｓｅｔ ｏｐｈ－ ｔｈａｈｎ￣Ｖｉｓ Ｓｄ，１９９４．３５：３３０３一 ｌ００． ［２３］龚晓敏，江时森．血管新生和动脉粥样硬化［Ｊ］．中国循环，２００１，５ （２）：９ｌ一９３． 分子标记技术及其进展 收稿日期：２００１—１０—２１：修回日期：２（１Ｙ２—０１—１５ 佳者算 ：王志 ｆｌ界 婆博士 熬授 §一），男，硕士生。赵树进（１９５８一）， ，代药理、中药。 主任药师，博士导，研究方向，神经生化，现 卫星或微卫星序列的完整性。另外，内切酶在基因组的其他 部位有较多酶切位点，则可使卫星序列所在片段含有较少无 关序列，性。分子杂交所用ＤＮＡ控针核苷酸序列必须是小卫星序列或 通过电泳可充分显示不同长度重复序列片段的冬态 微卫星序列，通过分子杂交和放射自显影后，就可一次性检测 到众多小卫星或微卫星位点，得到个体特异性的ＤＮＡ指纹图 谱［７ｌ。 邶一次可检测到基因座位数可达几十个，同ＲＦＬＰ标 记一样，ｖＮｒＲ实验操作程序繁锁，检测时间长，成本耗费较 高［ 。 ． ２基于ＰｃＲ技术分子标记技术 ２．１随机扩增多态性ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｉｆｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ＤＮＡ ＲＡＰＤ） ． ， ＲＡＰＤ技术是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ［９ｊ和Ｗｅｌｓｈ［ｍＪ同时发展起来的一 种新型遗体标记技术的。ＲＡＰＤ基本原理：它是利用随机引物 （一般为８～１０ｂｐ）通过ＰｃＲ反应非定点扩增ＤＮＡ片段，然后 用凝胶电泳分析扩增产物ＤＮＡ片段的多态性。扩增片段多态 性便反映了基因组相应区域的ＤＮＡ多态性。ＲＡＰＤ所使用的 引物理各不相同，但对任一特定引物，它在基因组ＤＮＡ序列上 有其特定的结合位点，一旦基因组在这些区域发生ＤＡＮ片段 插入、缺失或碱基突变，就可能导致这些特定结合位点的分布 发生变化，从而导致扩增产物数量和大小发生改变，表现出多 态性。就单一引物而言，其只能检测基因组特定区域ＤＮＡ多 态性，但利用一系列引物则可使检测区域扩大到整个基因组， 因此，ＲＡＰＤ可用于对整个基因组ＤＮＡ进行多态性检测，也可 用于构建基因组指纹图谱。 与ＲＦＬＰ相比，ＲＡＰＤ具有以下优点：（１）技术简单，检测速 度快；（２）ＲＡＰＤ分析只需少量ＤＮＡ样品：（３）不依赖于种属特 异性和基因组结构，一套引物可用于不同生物基因组分析； （４）成本较低。但ＲＡＰＤ也存在一些缺点：（１）ＲＡＰＤ标记是一 个显性标记，不能鉴别杂合子和纯合子；（２）存在共迁移问题， 凝胶电泳只能分开不同长度ＤＮＡ片段，而不能分开那些长度 相同但碱基序列组成不同的ＤＮＡ片段；（３）ＲＡＰＤ技术中影响 因素很多，所以实验的稳定性和重复性差＿６Ｊ。 与ＲＡＰＤ技术类似的还有ＡＰ＿－ＰｃＲ（Ａｒｂｉｔｒａｒｙ Ｐｒｉｍｅｄ ＰＣＲ） 标记和ＤＡＦ（ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｉｆｅｄ Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ）标记。 ２．１，１任意引物ＰｃＲ（ＡＰ＿－Ｐ（ ） 在Ａｐ＿＿ＰＥＲ分析中，所使用的引物较长（１０～５０ｂｐ），ＰＥＲ 反应分为两个阶段，首先寡核苷酸引物在低严谨条件下与模 板ＤＮＡ退火，此时发生了一些合成，以便稳定模板与引物之间 相互作用。然后进行高严谨退火条件的循环，两个位点问那 些序列在低严谨度退火条件下发生的引物延伸可继续在高严 谨条件下扩增Ｌｌ 。采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析ＰＥＲ 产物，最终反应结果与ＲＡＰＤ类似。 只要设计的引物在低严谨退火条件下能减少引物产生人 为产物，应用成对组合的引物可以产生新的Ａｐ＿＿ＰｃＲ谱带，但 引物配对组合使用时，得到的图谱与单引物单独使用时产生 的图谱之和很不相同，这样，５０个引物能产生（５０）ｚ／２＝１ ２５０ 种不同指纹图谱Ｌｌ０Ｊ。 ＡＰ－－－ＰＣＲ方法不需预知序列资料，而且检测的基因组样 本是任意的，ＡＰ＿＿ＰＣＲ还能够用于检测近等基因系（或同类 系）中的多态性【１１］。ＡＰ－－ＰＥＲ的缺点是每个新的多态性都必 须经纯化才能进一步使用。另外，此方法在杂合体中仅可辨 别长度多态性。 ２．１．２ ＤＮＡ扩增指纹（ＤＡＦ） ＤＡＦ是一种改进的ＲＡＰＤ分析技术，与ＲＡＰＤ技术不同的 是，ＤＡＦ分析中所使用的引物浓度更高，长度更短（一般为５ ８ｂｐ ＲＡＩＤ ．），因此它所提供的谱带信息比 大得多，如当使用５个核苷酸的引物时，引物和模板的组合大约可扩增出１０～１００ 个ＤＮＡ片段。ＰＥＲ扩增产物是在凝胶上进行分离，通过银染 即可产生非常复杂带型【 】。 ２．２序列标志位点（ＳＴＳ） ＳＩＳ是对以特定对引物序进行ＰＥＲ特异扩增的一类分子 记的统称。通过设计特定的引物，使其与基因组ＤＮＡ序列 中特定结合位点结合，从而可用来扩增基因组中特定区域，分 析其多态性。利用特异ＰＥＲ技术的最大优点是它产生信息非 常可靠，而不像ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ那样存在某种模糊性。 （未完待续，见下期） ”’“ “ ” ’” ” “ ” ’“ ” “ ” “’ “◆“◆“ ｉ期刊基本参数：ＣＮ２３—１３１９／Ｑ＊１９９１＊ｂ＊Ａ４＊ ４８ ｚｈ＊Ｐ＊￥５．５０＊３５Ｏ０＊３５＊２００２—０６ １ 执行副主编：陈丽娟奚新伟责任编辑：奚新伟 网址：ｈｔｔｐ：∥ｗｗｗ．ｈｌｊｉａｍ．ｃｏｍ．ＣＦＩ Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｗｉｗｚ． ＠ｌ６３．ｃ０ｍ 。 ◆ｌＩ◆ＪＩ◆＋◆“．¨◆｜ｌ◆ＪＩ◆¨◆ ｌ．¨◆¨◆ＪＩ◆¨◆¨．｛◆１Ｉ◆“◆¨◆¨．¨． ◆
