第２０卷第１期 北京石油化工学院学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｅｔｒｏ—ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏ１．２０ Ｎｏ．１ Ｍａｒ．２０１２ ２０１２年３月 高效液相色谱法同时测定复方乙酰水杨酸片 中各有效成分的含量＊ 王 腾 王晓敏 张亚运 姜玉婷 张志红 沈齐英 （北京石油化工学院制药工程系，北京１０２６１７） 摘 要用高效液相色谱法分离并建立了复方乙酰水杨酸片中阿司匹林、非那西丁和咖啡 因含量的测定方法。色谱分析条件分别为：色谱柱为Ｋｒｏｍａｓｉｌｃ ｓ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５ ｍ），柱温为３５ ℃；流动相为甲醇一１ 冰醋酸（４５：５５），流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。检测波长为２７６ ｎｍ。进样量为２Ｏ Ｌ，外 标法定量。在该色谱条件下，阿司匹林、非那西丁及咖啡因分离度均大于１．５，且浓度与峰面积呈良好 的线性关系，线性范围分别为４～９６０￣ｇ／ｍＬ（Ｒ 一０．９９９ ９）、４～２００／￣ｇ／ｍＬ（Ｒ 一０．９９９ ９）及４～２００ “ｇ／ｍＬ（Ｒ 一０．９９９ ９），平均加标回收率分别为９９．２ （ＲＳＤ一１．２％）、１００．４％（ＲＳＤ一１．４％）及 １０１．１ （ＲＳＤ＝０．９ ）。所建立的方法简单、灵敏、准确，可用于复方乙酰水杨酸片的质量控制。 关 键 词中图法分类号高效液相；复方乙酰水杨酸片；阿司匹林；非那西丁；咖啡因 Ｒ９２７．２ 复方乙酰水杨酸片为临床中常用的复方解 热镇痛药物，每片含阿司匹林２２０ ｍｇ，非那西 丁１５０ ｍｇ及咖啡因３５ ｍｇ。其中阿司匹林和 非那西丁均具有解热镇痛作用，咖啡因为中枢 神经兴奋药，能使大脑皮层兴奋从而提高对外 界的感应性，并有收缩脑血管、加强前２种药缓 方法简便、准确、重复性好，可有效控制复方乙 酰水杨酸片的质量。 １ 实验部分 １．１仪器与试剂 Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪（包括四元 泵、自动进样器及柱温箱，Ｗａｔｅｒｓ２９９８二极管 解头痛的效果ｎ］。目前复方乙酰水杨酸片的质 量标准收载于《卫生部药品标准》化学药品及制 阵列检测器，美国沃特世公司生产）；Ｋｒｏｍａｓｉｌ ｃ１８色谱柱（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，５ ｍ，瑞典 ＡＫＺ０ Ｎ０ＢＥＬ公司生产）；ＵＶ一２８００型紫外 可见分光光度计（日本日立公司生产）；赛多利 斯ＢＳＡ１２４Ｓ分析天平（德国赛多利斯公司生 剂第一分册（ＷＳ。一６５（Ｂ）－８９），其各组分含量测 定的方法均为滴定分析法，方法操作繁琐、费 时，同时在分析过程中存在阿司匹林水解的现 象，使得测定值偏低。有文献研究高效液相色 谱法（ＨＰＬＣ）、胶束薄层色谱法凹］、分光光度 法Ｌ３ 等用于复方乙酰水杨酸片中各组分的含量 产）；ＫＱ－５０Ｅ型超声波清洗器（昆山市超声仪 器有限公司生产）。 的测定，控制其质量。笔者在文献［４—６］研究 的基础上建立并优化了ＨＰＬＣ分析方法，在流 动相体系中加入少量的冰醋酸，既避免了主要 成分阿司匹林的水解，又可实现３种组分的良 阿司匹林对照品、非那西丁对照品、咖啡因 对照品均购自美国Ｓｉｇｍａ公司，纯度＞９９ ９／５； 复方乙酰水杨酸片（西安某制药有限公司生产， 批号：１１０５２０９，１１０５２１０，１１０５２１２）；甲醇为色谱 纯；冰醋酸为分析纯；实验用水为娃哈哈纯 净水。 １．２溶液的制备 好分离，同时将检测波长由文献报道的３０２ ｎｍ 或２７３ ｎｍ调整为２７６ ｎｍ，更有利于复方制剂 中主要成分阿司匹林的定量准确性。所建立的 收稿日期：２０１２－０１—０６ ＊北京市大学生科研训练（ＵＲＴ）项目，项目号：２０１１Ｊ０００５３。 １．２．１标准品溶液的制备 取阿司匹林对照品１００．０ ｍｇ，精密称定， ４２ 北京石油化工学院学报 ２０１２年第２Ｏ卷 置于１００ ｍＬ容量瓶中，加甲醇适量使其溶解 并稀释至刻度，摇匀，作为阿司匹林对照品储备 溶液。 取非那西丁对照品５０．０ ｍｇ，精密称定，置 于１００ ｍＬ容量瓶中，加甲醇适量使其溶解并 稀释至刻度，摇匀，作为非那西丁对照品储备 溶液。 取咖啡因对照品５０．０ ｍｇ，精密称定，置于 １００ ｍＬ容量瓶中，加甲醇适量使其溶解并稀释 至刻度，摇匀，作为咖啡因对照品储备溶液。 １．２．２供试品溶液的制备 取本品１０片，研细，精密称取适量（相当于 阿司匹林２２０ ｍｇ），置于１００ ｍＬ容量瓶中，加 乙醇适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过， 为供试品储备液。精密量取１ ｍＬ置于１０ ｍＬ 容量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作 为供试品溶液。 １．２．３空白溶液的制备 按处方量取处方中所用辅料混合均匀，按 “１．２．２”所述方法制备空白溶液。 １．３ 色谱条件 １．３．１波长的选择 取阿司匹林、非那西丁及咖啡因对照品溶 液适量，加甲醇稀释至适当浓度，根据中国药典 所述的紫外一可见分光光度法进行实验＿７ｊ，在 ２１０￣３５０ ｎｍ的波长范围内扫描，结果如图１ 所示。由图１可见，阿司匹林、非那西丁及咖啡 因分别在２７６、２４５ ｎｍ及２７５ ｎｍ处具有最大 吸收。在２７６ ｎｍ下，阿司匹林和咖啡因的响 应值最高，且非那西丁也具有较大吸收。在以 往的文献中，选用了３０２ ｒｉｍ或２７３ ｎｍ作为相 应的检测波长［４，６３，在该波长下，复方乙酰水杨 酸片中３种主要成分的响应值均未达到最大 值，因此，笔者最终选择了阿司匹林的最大吸收 波长２７６ ｎｍ作为检测波长。 Ｍｎｍ 图１阿司匹林、非那西丁和 咖啡因的紫外吸收光谱图 １．３．２系统适应性实验 采用Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃｌ８色谱柱（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，５ ｍ），流动相为甲醇一１ 冰醋酸（４５： ５５），流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２７６ ｎｍ， 柱温为３５。Ｃ，进样量为２０ Ｌ。在此条件下，阿 司匹林、非那西丁和咖啡因与相邻色谱峰的分 离度均大于１．５，塔板理论数均高于６ ０００，拖尾 因子在０．９５～１．Ｏ５。在该条件下，辅料空白溶 液、样品、阿司匹林标准品、非那西丁标准品和 咖啡因标准品的色谱图如图２所示。 ０－３ ≤０．２ 墨ｏ． ０ ０ ２ ４ ６ ８ １Ｏ １２ １４ ｔ／ｍｉｎ ｆａ）空白溶液 一０．３ ≤０．２ 誓０－－ Ｏ Ｏ ２ ４ ６ ８ １Ｏ １２ １４ ｔ／ｍｉｎ （ｂ）样品 ０．２０ ０ ０ ２ ４ ６ ８ １０ １２ １４ ｔ／ｍｉｎ （Ｃ）阿司匹林对照品 —０．Ｏ６ ≤００４ 臻ｏ．０２ Ｏ ０ ２ ４ ６ ８ １０ １２ １４ ｔ／ｍｉｎ （ｄ）非那西丁对照品 一０．３ ０．２ 墨ｏ． ０ ０ ２ ４ ６ ８ １０ １２ １４ ｔ／ｍｉｎ （ｅ）咖啡因对照品 １ 咖啡因；２一阿司匹林；３一非那西厂 图２高效液相色谱图 ２结果与讨论 ２．１ 线性关系与检测限 分别精密量取阿司匹林对照品储备溶液 ０．１，０．２，０．２５，０．５，１．０，１．５，２．０，２．５，５．０， １０．０，２４．０ ｍＬ，置于２５ ｍＬ容量瓶中，用流动 相稀释至刻度，摇匀，各取２０ Ｌ依上述色谱条 件分别进行测定，记录峰面积。结果以浓度 第１期 王 腾等．高效液相色谱法同时测定复方乙酰水杨酸片中各有效成分的含量４３ （ｘ）为横坐标，以峰面积（ｙ）为纵坐标进行线性 回归，得回归方程为：Ｙ一７ ３３０．５Ｘ一２ ３２９．５ （Ｒ。一０．９９９ ９），阿司匹林在４～９６０ ｔｔｇ／ｍＬ浓 度范围内呈良好的线性关系。 分别精密量取非那西丁对照品溶液０．２， ０．４，０．５，１．０，２．０，３．０，４．０，５．０，８．Ｏ，１０．０ ｍＬ，置于２５ ｍＬ容量瓶中，用流动相稀释至刻 度，摇匀，各取２Ｏ Ｌ依上述色谱条件分别进行 测定，记录峰面积。结果以浓度（ｘ）为横坐标， 以峰面积（ｙ）为纵坐标进行线性回归，得回归 方程为：ｙ一１６ ４８７Ｘ＋６ ７８４．４（Ｒ 一０．９９９ ９）， 非那西丁在４￣２００￣ｇ／ｍＩ 浓度范围内呈良好 的线性关系。 分别精密量取咖啡因对照品溶液０．２， ０．４，０．５，１．０，２．０，３．０，４．０，５．０，８．０，１０．０ ｍＬ，置于２５ ｍＬ容量瓶中，用流动相稀释至刻 度，摇匀，各取２Ｏ Ｌ依上述色谱条件分别进行 测定，记录峰面积。结果以浓度（Ｘ）为横坐标， 以峰面积（Ｙ）为纵坐标进行线性回归，得回归 方程为：Ｙ一５７ ００６Ｘ＋４４ ８２１（Ｒ 一０．９９９ ９）， 非那西丁在４￣２００／￣ｇ／ｍＬ浓度范围内呈良好 的线性关系。 分别取阿司匹林、非那西丁及咖啡因对照 品溶液，以流动相稀释，按上述色谱条件进样， 使对照品的峰高分别为仪器响应噪声３倍时， 测得阿司匹林、非那西丁及咖啡因的最低检测 限分别为３．１５ ｒｉｇ，０．６６ ｇｇ及０．１９ ｇ。 ２．２重复性试验 取批号为“１１０５２０９”的样品６份，按 “１．２．２”所述方法制备供试品溶液，按上述色谱 条件进样分析。结果样品中阿司匹林、非那西 丁和咖啡因的平均含量为１００．２ ，１００．３ ， ９９．８ ，峰面积的ＲＳＤ分别为０．１２％， ０．１４％，０．１４ （ 一６）。 ２．３精密度试验 取批号为“１１０５２０９”的样品，按照“１．２．２” 所述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件连 续进样６次测定峰面积。结果样品中阿司匹 林、非那西丁和咖啡因峰面积的ＲＳＤ分别为 ０．１０ ，０．０３ ，０．１６ （ｎ一６）。 ２．４稳定性试验 取批号为“１１０５２０９”的样品，按照“１．２．２，， 所述方法制备供试品溶液，置室温放置１，２，４， ６，８ ｈ，按上述色谱条件进样分析。结果样品中 阿司匹林、非那西丁和咖啡因峰面积的ＲＳＤ分 别为０．１５ ，０．０１ ，０．０６ ，表明上述３种成 分供试品在８ ｈ内稳定。 ２．５加标回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品适量，共 ９份，分别加入阿司匹林、非那西丁及咖啡因对 照品８８．０，６０．０，１４．０ ｇ；１１０．０，７５．０，１７．５ ｇ； １３２．０，９０．０，２１．０ ｎａｇ；按供试液制备方法制备 成相当于样品测定项下浓度的８Ｏ ，１００Ｋｏ和 １２０ 的溶液，按上述色谱条件测定。计算阿司 匹林、非那西丁和咖啡因的加样回收率分别为 ９９．２ ，１００．４ 和１０１．１ ，ＲＳＤ（ 一９）分别 为１．２ ，１．４ 和０．９ 。 ２．６ 样品测定 分别精密称取不同批号样品适量，按 “１．２．２”所述配制溶液，取２Ｏ Ｌ按“１．３．２”所 述方法中色谱条件进行测定，３批样品的质量 分数见表１。 表１样品含量测定结果 建立的ＨＰＬＣ同时测定复方乙酰水杨酸 片中各有效成分质量分数的方法是可行的。 ３ 结论 复方乙酰水杨酸片中阿司匹林的标示量最 高，且其与咖啡因的最大吸收波长均在２７６ ｎｍ 附近，因此选择２７６ ｒｉｍ作为检测波长，结果表 明３种组分检测灵敏度均较好。阿司匹林在中 性条件下易于水解，在常用的化学滴定分析法 中，由于操作时间较长，造成水解较多，导致分 析结果偏低。在流动相中加入一定比例的冰醋 酸，使得阿司匹林在一定时间内保持稳定，有效 的抑制了阿司匹林的水解。同时对甲醇比例及 流动相ｐＨ进行了优化，最终选择流动相为甲 醇一１ 冰醋酸（４５：５５），在此条件下，３种组 分的峰形好，出峰时间理想，分离度高。 参考文献 Ｅｌｉ沈蓉滨．药物学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００８： １１７－１２１． ４４ 北京石油化工学院学报 ２００７，Ｚ７（８）：１２５２—１２５５． ２０１２年第２０卷 ［２］ 赵怀清，王学娅，杨丽，等．胶束薄层色谱法同时 测定ＡＰＣ片中３组分含量［Ｊ］．沈阳药科大学学 报，２００１，１８（５）：３３８—３４０． Ｅｓ］ 李锐，李香风．ＨＰＬＣ测定复方乙酰水杨酸片中３组分的含量ＥＪ］．中国现代应用药学，２００９，２７ （２）：１４８—１５０． 周金玉．双波长比值光谱法测定 ［３］ 孙增先，张骞峰，复方乙酰水杨酸片中三组分含量ＥＪ］．光谱学与 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ａｓｐｉｒｉｎ，４～２００／￣ｇ／ｍＬ（Ｒ 一０．９９９ ９）ｆｏｒ ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎ，ａｎｄ ４～２００ ｔｔｇ／ｍＬ（Ｒ。一０．９９９ ９）ｆｏｒ ｃａｆｆｅｉｎｅ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ａｒｅ ９９．２ ，１００．４ ，１０１．１ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｗｉｔｈ ＲＳＤ ｏｆ １．２ ，１．４ ，０．９ ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｏ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐｉｒｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ＨＰＬＣ；ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐｉｒｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ；ａｓｐｉｒｉｎ；ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎ；ｃａｆｆｅｉｎｅ
