高效液相色谱仪操作规程
1系统组成
高效液相色谱仪系统由进样器系统、输液系统、分离系统、检测和记录五大系统组成。
2 准备工作
2.1 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
2.2 根据检测样品需要更换合适的色谱柱（色谱柱上标示的箭头方向与流动相的走向一致）。
2.3 准备所需用流动相，用适当的0.45μm滤膜过滤。
2.3.1 流动相是否充足，满足当天工作使用，一般应在预计使用量上加150 mL。
2.3.2 流动想要新鲜配制，一般情况下在48h内使用完，超过此时间需重新抽滤或超声波脱气。
2.4 制备样品溶液，必要是要用0.45 μm滤膜过滤。
3 程序
3.1 依次打开仪器电源、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。
3.2 检查仪器显示内容是否正常，例， 有异常应先排除。
氘灯是否点亮，开泵后泵压是否过高等。如
3.3 根据待测样品更换合适的流动相，设置合适的检测波长、流速。
注意：酸性、碱性流动相相互更换或更换缓冲盐类流动相时，应先用最好为含有机相比例较低的的中性流动相过渡30 min以上。
3.4 将管路的吸滤器放入流动相储液瓶中，吸滤头接近储液瓶底部。
3.5 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀。
3.6 启动泵，待检查流量稳定，无气泡后，将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。若管路中仍有气泡，则重复以上操作至气泡排尽。
3.7 平衡系统，启动泵后，用6倍柱体积的流动相平衡色谱柱（一般为30 min）；检查各管路连接处是否漏液；观察泵控制屏上的压力值，压力波动不超过0.5 MPa；观察基线变化，调整工作站显示范围为5~100mV，观察基线20min以上，基线基本平直即可进样。此时，进样器处于Inject位置。
3.8 在平衡色谱柱的同时进行定量环的清洗，同一样品进样30次或进不同的样品时应清洗定量环。用专用接头，以先纯水后甲醇的方式对进样阀在Load位置进行清洗。
3.9 进样，先按”Zero”调零，用洗针液（与样品液一致的溶剂）洗净针筒（10遍以上），排除针筒中的气泡。
3.10 用平头液相色谱针吸取定量样品溶液，将进样阀逆时针旋至Load档，进样针从进样空处水平推入，样品溶液推入样品环后，立即将进样阀顺时针旋至Inject位置，开启数据采集。
3.11 在检测成品或必要的样品前，在清洗进样器定量环后，首先测定样品液的溶剂作为空白图，再者必要时进行平行进样。
3.12 数据处理，根据不同色谱工作站的使用方法，处理所测样品的色谱图；记录所测样品的检测结果；保存数据处理结果。为更好的保证数据安全，勿将数据存在“C“盘。
3.13 关机，停止使用前，用3.3的方法置换系统为中性，纯甲醇冲系统30min后可关闭检测器、输液泵（分析间隔不超过10h，尽量不要关闭检测器或氘灯，以延长灯的寿命）。
3.14 记录，认真填写样品检验记录和仪器使用记录。
4 注意事项
4.1校准，定期对出峰时间、定量的重复性进行进行评价。
4.2 确保检验用标准溶液的准确性。配置工作标准，保存期不应超过7天；浓度低于100ppm的要当日配制；易分解变质的要使用前配制。在配置和保存时要避免玷污。
4.3 在分析过程中，待测组分的浓度应符合标准曲线的线性范围。
4.4 进样前先确定仪器色谱柱型号、流动相种类及比例、检测器波长是否与待检品一
致，再按“pump”键，启动泵。
4.5 若检测的上一样品所用流动相为碱性或缓冲盐类，确定无此类样品后及时用中性流动相冲洗系统30min。
4.6 进样针的使用进完样后要清洗进样针；进样针不好抽拉时可将针在肥皂水中抽拉几次，再用纯水清洗，用滤纸轻轻擦拭。平时使用中应避免空抽拉或将活塞拔出针筒。
4.7 关注样品检验中的异常情况，若是车间的常规样品，检验时谱图异常，先看泵、检测器、采集通道是否开启，再看流动相使用是否正确（包括种类、比例和pH值三方面），波长是否对应，在考虑是否该更换新的色谱柱；若开发部样品异常时，除考虑以上情况外及时与其交流。
4.8 谱图中组分位置不确定时，可采用峰高增量定性。
4.9流动相配制，确定流动相的种类后，按比例配置时注意倍数的换算。
例，流动相：甲醇：氨水=40:1，即甲醇：水：氨水=40:60:1（v/v）,由于所给比例为百分制，配制500mL的此流动相需量取：
甲醇：水：氨水=40×5:60×5:1×5=200:300:5（v/v）
配制1000mL，同理，乘10即可。
4.10 抽滤配好流动相时，注意更换滤膜。抽滤含有机相的流动相使用油膜（抽滤离子色谱所用淋洗液、再生液使用水膜），抽滤含缓冲盐、离子对试剂的流动相时会出现多泡沫
现象，属正常。
4.11 进样器有漏液现象，判断是否转子密封已磨损，具体操作有专人完成，勿轻易卸开进样器。
4.12 若谱图为一直线，一般情况是由于泵、检测器或工作站未开启，再者看检测器是否显示“over”，这是按“zero”键，还不行查看氘灯能量，判断是否寿命已到。
4.13 仪器出现假死状态时，需关闭打开的所有软件，重启仪器、电脑。
4.14 废液瓶中废液及时处理，应满足当天使用。
4.15 超声仪中的水应及时更换，纯水加到超声仪腔体的2/3处。
4.16 液相室内为卫生打扫。
