・１１４２・中华流行病学杂志２０１６年８月第３７卷第８期ＣｈｉｎＪＥｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ａｕｇｕｓｔ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８・实验室研究・天津市２０１５年ＨＩＶ流行和传播的分子流行病学特征分析郑敏娜宁铁林高永军赵璇李龙程绍辉３０００１ｌ天津市疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制所（郑敏娜、宁铁林、赵璇、李龙、程绍辉）；３００１３２天津市红桥区疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制所（高永军）通信作者：程绍辉，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｓｈａｏｈｕｉ＠ｇｍａｉｌ．ｔｏｍＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４－６４５０．２０１６．０８．０１８【摘要】目的了解２０１５年天津市ＨＩＶ流行株的亚型分布和传播特点。方法从７７例新报告未治疗且ＣＤ。＋Ｔ淋巴细胞计数＞，２００个／ｕｌ的ＨＩｖ一１感染者，提取血浆中ＲＮＡ，应用反转录和巢式ＰＣＲ扩增ＨＩＶ的ｐｏｆ和ｅ聊区，并测序进行相关分子生物学分析。结果共获得６３例样本的Ｈ１Ｖ毒株序列结果，亚型依次为ＣＲＦ０１ＡＥ、ＣＲＦ０７ＢＣ、Ｂ、ＣＲＦ５５０１Ｂ和其他独特型二代重组毒株，分别占４６．０３％（２９／６３）、３０．１６％（１９／６３）、１１．１１％（７／６３）、４．７６％（３／６３）和７．９４％（５／６３）；感染者以性传播为主，其中又以ＣＲＦ０１ＡＥ和ＣＲＦ０７ＢＣ重组亚型为主，除异性传播无Ｂ和ＣＲＦ５５＿０１Ｂ亚型外，同性和异性传播者的亚型分布无明显差别。重组毒株的构成比为８８．８９％（５６／６３），并首次发现的二代重组亚型８例，包括３例ＣＲＦ５５０１Ｂ、２例ＡＥ／ＢＣ、１例ＡＥ／Ｂ和１例新型的ＡＥ／Ｂ／Ｃ重组均为男男同性传播；ｌ例ＡＥ／ＢＣ重组为异性传播。ＨＩＶ感染者中传播耐药率为５．３％，均为ＮＮＲＴＩ类监测性耐药突变Ｌ１００Ｉ；进化分析中３对ｐｏ！区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值均≥９８％，ｅｎｖ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值均≥８０％，调查显示３对样本来源确认有性伴传播关系。结论天津市ＨＩＶ感染者中重组毒株不断增加并广泛流行，性传播者中ＨＩＶ新型二代重组和耐药毒株不断产生并在不同人群和不同地区间传播，应引起高度重视。【关键词】艾滋病病毒；亚型；耐药；系统进化分析基金项目：天津市卫生行业重点攻关项目（１４ＫＧｌ１９）ＭｏｌｅｃｕｌａｒｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆＨⅣｉｎＴｉａｎｊｉｎ，２０１５ＺｈｅｎｇＭｉｎｎａ，Ⅳ吆Ｔｉｅｌｉｎ，ａｎｄＰｒｅｙｅｎｔｉｏｎ，ＧａｐＹｏｎｇｉｕｎ，ＺｈａｏＸｕａｎ。ＬｉＬｏｎｇ，ＣｈｅｎｇＳｈａｏｈｕｉＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｆｏｒＡｌＤＳ，ｓＴＤＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．ＴｉａｎｊｉｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌＴｉｏｎｊｉｎ３０００１１，Ｃｈｉｎａ（ＺｈｅｎｇＭＮ，ＮｉｎｇＣｈｉｎａ（ＣａｐｒＪ）ＴＬ，ＺｈａｏＸ，ＬｉＬ，ＣｈｅｎｇＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＨｏｎｇｑｉａｏＤ蠡ｔｒｗｔａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌｓＨ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｆｏｒＡＩＤＳ／ＳＴＤａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１３２。Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＣｈｅｎｇＳｈａｏｈｕｉ，Ｅｍａｉｈｃｈｅｎｇｓｈａｏｈｕｉ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｎ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｒｅｌａｔｅｄＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｎｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨＩＶｓｕｂｔｙｐｅｓａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｉｎＴｉａｎｉｉｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｔｏｔａｌｏｆ７７ｎｅｗｌｙｄｉａｇｎｏｓｅｄＡＩｍｎａｉｖｅＨⅣｉｎｆｅｃｔｏｒｓｉｎ２０１５ｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｂｖＣＤ。＋Ｔｃｅｌｌｃｏｕｎｔｓ≥２００ｃｅｌｌｓ／Ｉ－ｔ１．ＶｉｒａｌＲＮＡｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｐｌａｓｍａｓａｍｐｌｅｓ．ＲｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲａｎｄｎｅｓｔｅｄＰＣＲｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｏｌａｎｄｅｎｖｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｓ，ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ａｎｄｒｅｌａｔｅｄｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ４６．０３％（２９／６３），ｔｈｅ３０．１６％（１９／６３），１１．１１％（７／６３），４．７６％（３／６３）ａｎｄ７．９４％（５／６３）ｏｆｔｈｅｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｅｒｅｉｎｆｅｃｔｅｄｕｎｄｅｒＨＩＶｓｕｂｔｙｐｅｓＣＲＦ０１ＡＥ．ＣＲＦ０７ＢＣ．Ｂ．ＣＩ强５５０１ＢａｎｄＵＲＦＳ．ｗｉｔｈｓｅｘｕａｌｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎａｓｍａｊｏｒｍｏｄｅｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＣＩ江０ｌＡＥａｎｄＣＲＦ０７ＢＣｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｉｎｂｏｔｈＭＳＭａｎｄＨＳＴｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．ＴｈｅｐａｔｔｅｒｎｓｏｆｓｕｂｔｙｐｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｄｉｄｎｏｔｓｈｏｗｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｄｉｆｉｅｒｅｎｃｅｓｏｔｈｅｒｔｈａｎｓｕｂｔｙｐｅＢａｎｄＣＲＦ５５０１ＢｓｔｒａｉｎａｍｏｎｇＨＳＴｓ．ＴｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＣＲＦｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｔｏ８８．８９％，８ｎｅｗｓｅｃｏｎｄ—ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｆｏｒｌｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅ．ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ３ＣＲＦ５５０１Ｂ．２ＡＥ／ＢＣ．１ＡＥ／ＢａｎｄｌＡＥ／Ｂ／ＣａｍｏｎｇＭＳＭＳａｎｄ１ＡＥ／ＢＣａｍｏｎｇＨＳＴｓ．５．３％ｏｆｔｈｅＮＮＩＵ’ＩＬｌ００ＩＨＩＶｉｎｆｅｃｔｏｒｓｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｔｈｅｄｒｕｇ．ｒｅｓｉｓｔａｎｔ．ｍｕｔａｔｉｏｎｓｔｒａｉｎ．３ｌｉｎｋａｇｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏＨＩＶｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｒｏｕｇｈｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｗｉｔｈＢｏｏｔｓｔｒａｐ≥９８％ｏｆｐｏｌｏｆｅｎｖ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｎｄａｎｄ≥８０％ＴｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙｏｆＨＩＶｈａｄｂｅｅｎｎｏｔｉｃｅｄｉｎＴｉａｎｊｉｎ．ｉｎｅｌｕｄｉｎｇｔｈｅｏｆｓｅｃｏｎｄ．－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｎｄｄｒｕｇ．－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎｓｔｈｒｏｕｇｈｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ万方数据中华流行病学杂志２０１６年８月第３７卷第８期ＣｈｉｎＪＥｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ａｕｇｕｓｔ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｏｕｔｅｓｏｆｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｇｉｏｎｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ；Ｓｕｂｔｙｐｅ；Ｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓＦｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＨｅａｌｔｈＩｎｄｕｓｔｒｙＫｅｙＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｊｅｃｔｓｏｆＴｉａｎｊｉｎ（１４ＫＧｌ１９）近年来，我国ＨＩＶ／ＡＩＤＳ病例数逐年上升，ＨＩＶ感染途径也逐渐变化。异性传播和男男同性传播是ＨＩＶ感染的主要途径，其中男男同性传播呈快速上升趋势。新的重组毒株不断出现，耐药毒株流行，大大增加了ＨＩＶ传播的风险。２０１５年１—１０月天津市新报告ＨＩＶ／ＡＩＤＳ有５６０例，较２０１４年的４１３例增长３５．５９％。为此本研究应用分子生物学技术探索天津市ＨＩＶ流行株亚型分布、重组和耐药株传播和流行趋势。材料与方法的可能性。美国洛斯阿拉莫斯国家实验室ＨＩＶ核酸序列库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ＨＩＶ．１ａｎｌ．ｇｏｖ）的ＢＬＡＳＴ工具进行亚型和序列比对分析。对各亚型进化树内的传播对进行分析，Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值≥８０％提示有可疑传播关系，Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值＜８０％但在一个的分支上判定为无法确定传播关系，两条序列不聚集且被其他序列分开则判定为无传播关系…，并结合后期流行病学调查进行综合分析。以ＨＸＢ２做参考株，ｉｐＨＭＭ—ＨＩＶ在线软件（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ＨＩＶ．１ａｎｌ，ｇｏｖ）进行ＨＩＶ序列重组断点分析。经整理合格的ｐｏＺ基因用美国斯坦福大学ＨＩＶ耐药数据库中的ＣａｌｉｂｒａｔｅｄＰｏｐｕｌａｔｉｏｎ１．样本及其处理：２０１５年天津市艾滋病确证中心实验室新确认的未经抗病毒治疗且ＣＤ。＋Ｔ淋巴细胞计数≥２００个ｍ１的ＨＩＶ感染者共５０５例，其中按不同感染途径分层随机抽样，共抽取样本７７例，在知情同意的情况下，采集ＥＤＴＡ抗凝全血４—８离心分离血浆分装后，一８０℃保存备用。ｍＩ，Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＣＰＲ）Ｉ具进行传播性耐药分ＨＩＶＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ析，并将序列提交Ｓｔａｎｆｏｒｄ分析。Ｄａｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｈｉｖｄｂ．Ｓｔａｎ—ｆｏｒｄ．ｅｄｕ）进行亚型耐药４．统计学分析：ＳＰＳＳ软件进行统计学分析，ｘ２检验比较不同传播途径的亚型分布差异，Ｐ＜０．０５判断为差异具有统计学意义。结果２．核酸提取和基因序列扩增：采用德国Ｑｉａｇｅｎ公司ＶｉｒａｌＲＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ提取感染者血浆中的病毒ＲＮＡ，大连宝生物工程有限公司Ｏｎｅ．ｓｔｅｐＰＣＲＫｉｔ（ＡＭＶ）反转录ＲＴ－ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ扩增ＨＩＶ－１的ｅ／ｚ／）和ｐｏｆ基因区，引物和反应条件见表ｌ。ＰＣＲ产物经１％琼脂糖凝胶电泳，ＱＩＡＧＥＮ公司ＱＩＡｑｕｉｃｋｇｅｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔ切胶纯化，使用ＡＢＩＰＲＩＳＭ３７３０ＸＬ进行测序。ＲＮＡ１．样本特征和亚型分布：７７例ＨＩＶ感染者中，最终扩增得到５７条ｐｏｌ区和５８条ｅ／ｚｕ区基因序列，两区结果综合分析后，共获得６３份样本的亚型信息（其中５２例样本均扩增出两区；５例只扩出ｐｏＺ区；６例只扩出ｅ／ｚｖ区）。男性占９６．１０％（７４／７７），女性占３。９０％（３／７７）；年龄１２—５８岁，平均（３３±１０）岁；未婚者占５４．５５％（４２／７７）；高中以上文化程度者占７４．０３％（５７／７７）；汉族占８９．６１％（６９／７７）；感染途径为男男同性传播占７６．６２％（５９／７７），异性传播占１８．１８％（１４／７７），静脉吸毒占３．９０％（３／７７），垂直传播占１．３０％（１／７７）。３．序列分析：从ＬｏｓＡｌａｍｏｓＤａｔａｂａｓｅＨＩＶ数据库中下载各亚型的参考序列，ＶｅｃｔｏｒＮＴＩ８．０软件包中ＣｏｎｔｉｇＥｘｐｒｅｓｓ软件和ＢｉｏＥｄｉｔ软件对原始序列进行拼接、比对和质量控制，Ｍｅｇａ６．０软件进行Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ系统进化分析（Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ分析重复１０００次），可疑样本重新采血检测以排除实验污染表１反转录结合巢式ＰＣＲ法扩增ＨＩＶ－１的ｐｏｌ和ｅｒｔｖ基因区的引物和反应条件引物名称ＥＤ５ＥＤｌ２Ｅｎｖ７８Ｅｎｖ８ａ碱基构成５’一ＡＴＧＧＧＡＴＣＡＡＡＧｃｃＴＡＡＡＧｃｃＡＴＧＴＧ一３’５，一ＡＧＴＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴ（；ＣＴＣＣＣＡ一３，位置ｆｆＬＹ（Ｂ２）６５５７—６５８２７７９２～７８１１７００２～７０２１７６４８～７反应条件ｅｎｖ区反转录反应条件：５０℃３０ｍｉｎ；９４℃２ｍｉｎ，９４℃３０５５℃３０ｓ，７２℃８０Ｓ，３０个循环；７２℃１０ｍｉｎＳ，５５Ｓ，５’一ｃＴＧＴＴＡＡＡＴＧＧＣＡＧＴｃＴＡＧｃ一３’５，一ＣＡＣＴＴＣＴＣＣＡ—ｄ１ＧＴＣＣＣＴＣＡ一３，ｅｒｔｖ区第二轮反应：９４℃３ｍｉｎ，９４℃３０６６８３０个循环；７２℃１０ｒａｉｎｃｃ３０Ｓ，７２℃８０Ｓ，ＭＡＷ－２６５’一ＴＧＧＡＡＡＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＡＧＧＡＣ－３’ＲＴ－２１ＰＲＯ—ｌ‘ＲＴ－２０ｎ２０２７—２０５０７５，一ＣＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧｃＴＡＴＴ从（汀ＣＴＴＴＴＧＡ一３５’一ＣＡＧＡＧＣＣＡＡｃＡＯＣＣＣＣＡＣＣＡ－３’５，一ｃＴＧｃｃＡＧＴＴＣｌＡＧｃＴｃＴＧｃＴＴｃ一３，３５０９～３５３９２１４７—２１６６３４４１。３４６２ｐｏｌ区反转录反应条件：５０℃３０ｒａｉｎ；９４ｏＣ２ｍｉｎ，９４５５℃３０ｓ，７２℃１５０ｓ，３０个循环；７２℃１０ｍｉｎｏＣ３０ｓ，ｐｏｌ区第二轮反应：９４℃５ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，６３℃３０Ｓｔ７２℃１５０３０个循环；７２ｏＣ延伸１０ｍｉｎｓ，注：以ＨＸＢ２作为参考序列，‘为测序引物万方数据・１１４４・中华流行病学杂志２０１６年８月第３７卷第８期ＣｈｉｎＪＥｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ａｕｇｕｓｔ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８ＨＩＶ流行株亚型依次为ＣＲＦ０１ＡＥ占４６．０３％（２９／６３），ＣＲＦ０７ＢＣ占３０．１６％（１９／６３），Ｂ亚型占１１．１１％（７／６３），ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型占４．７６％（３／６３）其他独特型二代重组亚型（ＵＲＦ）占７．９４％（５／６３）。ＵＲＦ包括３例ＡＥ／ＢＣ、１例ＡＥ／Ｂ和１例新型重组亚型ＡＥ／Ｂ／Ｃ（表２）。所有感染者中除７例为Ｂ亚型毒株外其他均为重组毒株，重组毒株的构成比为８８．８９％（５６／６３）。不同感染途径的亚型分布特点为：４８例ＭＳＭ中，以ＣＲＦ０１ＡＥ为主占４５．８４％（２２／４８），其次为ＣＲＦ０７ＢＣ占２５．００％（１２／４８），Ｂ亚型占１４．５８％（７／４８），ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型占６．２５％（３／４８），ＵＲＦ占８．３３％（４／４８）；１２例异性传播感染者中ＣＲＦ０１ＡＥ占５０．００％（６／１２）、ＣＲＦ０７ＢＣ占４１．６７％（５／１２）和ＵＲＦ占８－３３％（１／１２），无Ｂ和ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型，与ＭＳＭ的亚型分布的差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；２例静脉吸毒感染者均为ＣＲＦ０７ＢＣ亚型；１例垂直传播途径感染者为ＣＲＦ０１ＡＥ。表２不同感染途径的ＨＩＶ亚型分布特点注：‘指男男同性传播者亚型分布与异性传播者比较差异无统计学意义，Ｐ＜０．０５２．ＵＲＦ的重组特点：８例ＵＲＦ中，ＭＳＭ共７例（ＣＩＵ５５０１Ｂ３例，ＡＥ／ＢＣ２例，ＡＥ／Ｂｌ例及ＡＥ／Ｂ／Ｃ新型重组１例）；异性传播途径感染者中ＡＥ／ＢＣ重组ｌ例。重组断点分析结果显示，３例ＡＥ／ＢＣ重组者ｐｏｚ区为ＣＩ讧０７ＢＣ，ｅｒ／，ｕ区为ＣＲＦ０１ＡＥ，两区内均未发现重组断点；１例ＡＥ／Ｂ重组者＿ｐＤＺ区为ＣＲＦ０１ＡＥ，ｅｎｖ区为Ｂ亚型，两区内均未发现重组断点；３例０１Ｂ亚型的ｐｏｌ区发生了ＣＲＦ０１ＡＥ和Ｂ亚型重组，ｅｎｖ区为未发生重组的ＣＲＦ０１ＡＥ，且ＴＪｌ５Ｍ０９和ＴＪｌ５Ｍ１１的重组断点基本一致；１例新型重组亚型ＴＪｌ５Ｍ２１的ｐｏｌ区出现了ＡＥ、Ｂ和Ｃ亚型的重组，ｅｎｖ区为未发生重组的ＣＲＦ０７ＢＣ（表３）。３．耐药毒株流行隋况：根据ＷＨＯ公布的２００９版监测性耐药突变名录（ｈｔｔｐ：／／ｃｐｒ．ｓｔａｎｄｆｏｒｄ．ｅｄｕ／ｃｐｒ．ｃｇｉ），共发现３例监测性耐药突变感染者，其突变位点均为ＬＩＯＯＩ，传播耐药率为５．３％（３／５７），略高于万方数据表３ＨＩＶ流行株ＵＲＦｆｌｑｊｐＨＭＭ．ＨＩＶ重组断点分析结果（以ＨＸＢ２序列全长做参照）样本号霉雾萏重卷爹重釜扩亚型ＴＪｌ５Ｍ２１ｐｏｌ区２２６２～３２８９２２６２～２５４３ＣＲＦ０１ＡＥＡＥ／Ｂ／Ｃ２５４４～３０９７Ｃ３０９８～３１６７Ｂ３１６８—３２８９ＣＲＦＯｌＡＥＴＪｌ５Ｍ０９ｐｏｌ区２２６２～３２８９２２６２～２９１５ＣＲＦＯｌＡＥ０１Ｂ２９１６～３２８９ＢＴＪｌ５Ｍ１１ｐｏｌ区２２６２～３２８９２２６２～２９５２ＣＩｔＦ０１ＡＥ０１Ｂ２９５３～３２８９ＢＴＪｌ５Ｍ３６ｐｏｌ区２２６２～３２８９２２６２～２７９１ＣＲＦＯｌＡＥ０１Ｂ２７９２—３２８９Ｂ０１Ｂ亚型２例和ＣＲＦ０７ＢＣ亚型１例）、２例（ＣＲＦ０７ＢＣ亚型）、Ｋ２３８ＮＳ１例（Ｂ亚１例（ＡＥ／Ｂ）；蛋白酶抑制剂（ＰＩ）次要ＡＥ亚ＢＣ或Ｂ表４ＨＩＶ感染者的耐药相关突变位点和药物敏感性分析样本号ＨＩＶｅ３［型耐药突变位点药物敏感性４．进化及传播关系：ＣＲＦ０１ＡＥ主要分为２簇，ＷＨＯ提出的５％的中度流行警戒线乜１，属于中度流行。应用美国斯坦福大学ＨＩＶ基因型耐药分析数据库（ｈｔｔｐ：／／ｓｉｅｒｒａ２．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／ｓｉｅｒｒａ／ｓｅｒｖｌｅｔ／ＪＳｉｅｒｒａ）对其他耐药突变位点进一步分析显示（表４），非核苷酸反转录酶抑制剂（ＮＮＲＴＩ）耐药突变者７例，为ＥＦｖ／ＥＴ洲ｖＰ舢ｖ潜在低度耐药，依次为Ｖ１７９Ｅ３例（ＣＲＦ５５Ｖ１７９Ｄ型）、和Ｈ２２１Ｙ突变者８例，４例ＬＩＯＩ／Ｖ突变者（均为ＣＲＦ０１型），４例Ａ７１ＡＴ／ＡＶ／Ｔ突变者（均为ＣＲＦ０７亚型），未发现对ＰＩ耐药。均呈相对散在分布，以同性和异性传播者为主，中华流行病学杂志２０１６年８月第３７卷第８期ＣｈｉｎＪＥｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ａｕｇｕｓｔ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８ＣＲＦ０１ＡＥ（１）内有１个可疑传播对（ＴＪｌ５Ｍ０３／ＨＩＶ感染者中重组毒株的构成比为８８．８９％，其中ＵＲＦ占１２．７０％，流行形势严峻。ＴＪｌ５Ｈ０３）；ＣＲＦ０７ＢＣ亚型分为２簇，均以性传播为主，静脉吸毒者均聚集在ＣＲＦ０７ＢＣ（２），２簇各有可疑传播对１对（ＴＪｌ５Ｈ０１／ＴＪｌ５Ｍ５３和ＴＪｌ５Ｍ２８／ＴＪｌ５Ｈ１５）；Ｂ亚型呈高度聚集，均为男男同性传播，内有１个可疑传播对（ＴＪｌ５Ｍ０８／ＴＪｌ５Ｍ１７）；０１Ｂ亚型仅有的３例聚集，均为ＭＳＭ，内有１个可疑传播对（ＴＪｌ５Ｍ０９／Ｔ儿５Ｍ１１）。见图ｌ。二代重组毒株是多种毒株共感染或超感染的产物，是复杂的免疫环境中优势选择的结果，较单一的基因亚型或重组亚型的适应性更强，更容易在人群中传播ｂ“。亚型重组断点分析结果显示，首次发现的４例区内重组样本的重组断点均出现在ｐｏｌ区而ｅｎｕ区未发生重组，提示ｐｏＺ区较ｅｎｖ区可能更易发生重组。３例ＭＳＭ的ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型毒株ｐｏｌ区发生了ＣＲＦ０１ＡＥ和Ｂ亚型重组，大大增加了新型二代重组毒株的传播风险。目前天津市ＨＩＶ抗病毒治疗仍以一线治疗方案为主。本研究发现，天津市ＨＩＶ感染者传播耐药率为５．３％（３／５７），略高于ＷＨＯ提出的５％的中度流行警戒线，属于中度流行，３个ＳＤＲＭ感染者的突变位点均为ＮＮＲＴＩ的Ｌ１００Ｉ。其他耐药突变位点分析中发现，７例样本有ＮＮＲＴＩ类潜在低度耐药，未发现ＮＲＴＩ和ＰＩ主要突变位点。研究还发现携带ＮＮＲＴＩ类突变Ｋ２３８ＮＳ和Ｖ１７９Ｄ／Ｅ的毒株均为Ｂ亚型或含有Ｂ亚型序列的重组毒株；一些Ｐ１次要突变对ＰＩ主要耐药位点具有重要的协同作用，如ＬＩＯＩ／Ｖ、Ａ７１Ｖ／Ｔ等ｂ蚓，本研究中８例ＰＩ辅助性耐药突变的感染者，携带Ｌ１０Ｉ／Ｖ突变者均为ＣＲＦ０１ＡＥ亚型，携带Ａ７１Ｖ／Ｔ突变者均为Ｂ亚型或含有Ｂ亚型序列的重组毒株，从毒株的亚型和耐药突变特点来看，ＮＮＲＴＩ耐药突变和Ｐ１次要突变位点可能与其亚型有关。本研究分析ＴＪｌ５Ｍ０８／ＴＪｌ５Ｍ１７、ＴＪｌ５Ｍ２８／ＴＪｌ５Ｈ１５和ＴＪｌ５Ｍ０３／ＴＪｌ５Ｈ０３样本对结果显示，ｐｏＺ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值均≥９８％和ｅｎｖ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值均≥８０％以上的传播对结合流行病学调查可确认其传播关系。这３对样本的ｐ０２区平均基因距离为０．００９，ｅｎｖ区为０．０８６，与２０１５年文献报道的家庭内传播结果（ｐｏｌ区平均基因距离为０．０１０）基本一致ｎ］，考虑到３个传播对均涉及ＭＳＭ人群，且该人群性行为活跃，其毒株变异率可能会受到行为学因素的影响，因此其具体标准有待加大样本量后进行深入研究。进化分析中发现，有传播关系的ＴＪｌ５Ｍ０３／ＴＪｌ５Ｈ０３和ＴＪｌ５Ｍ２８／ＴＪｌ５Ｈ１５样本对，其ＴＪｌ５Ｈ０３和ＴＪｌ５Ｈ１５经后期调查证实为男男性传播。相反ＴＪｌ５Ｍ１８／ＴＪｌ５Ｍ２４前期调查认定为同伴关系，但进化分析后ｐｏｆ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值为５５％且ｅｎｖ区未发生聚集，因此排除其传播关系。ＴＪｌ５Ｍ０９／ＴＪｌ５Ｍ１１中２名ＭＳＭ均为ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型，具有相同的ｐｏＺ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值≥８０％可疑传播对分析结果显示（表５），ＴＪｌ５Ｈ０１／ＴＪｌ５Ｍ５３的ｅｎｖ区未发生聚集而排除传播关系，ＴＪｌ５Ｍ０９／ＴＪｌ５Ｍ１１的ｐｏｚ区具有相同的ＮＮＲＴＩ耐药位点，但由于ｅｎｖ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值过低因此无法确定传播关系。３对ＴＪｌ５Ｍ０８／ＴＪｌ５Ｍ１７、ＴＪｌ５Ｍ２８／ＴＪｌ５Ｈ１５和ＴＪｌ５Ｍ０３／ＴＪｌ５Ｈ０３样本其ｐｏＺ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值均≥９８％，ｅｎｖ区均Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值≥８０％，ｐｏｌ区平均基因距离为０．００９，ｅｎｖ区为Ｏ．０８６，耐药突变位点情况一致，且经后期调查发现每对内的感染者均维持超１年以上的同伴关系，可确认有传播关系。其中ＴＪｌ５Ｍ２８／ＴＪｌ５Ｈ１５中的ＴＪｌ５Ｍ２８是在ＴＪｌ５Ｈ１５感染后３个月发现的；其他两对中ＴＪｌ５Ｍ０８和ＴＪｌ５Ｍ０３确认ＨＩＶ阳性后分别在第一时间对同伴ＴＪｌ５Ｍ１７和ＴＪｌ５Ｈ０３进行告知，经检测证实ＴＪｌ５Ｍ１７和ＴＪｌ５Ｈ０３的ＨＩＶ感染，因此对内感染者确证时间不超过１０ｄ。讨论本研究显示，天津市ＨＩＶ感染者流行的亚型依次为ＣＲＦ０１ＡＥ占４６．０３％（２９／６３），ＣＲＦ０７ＢＣ占３０．１６％（１９／６３），Ｂ亚型占１１．１１％（７／６３），ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型占４．７６％（３／６３），其他ＣＲＦ占７．９４％（５／６３）。性传播以ＣＲＦ０１ＡＥ和ＣＲＦ０７ＢＣ重组亚型为主，同性和异性传播的亚型分布无明显差别；静脉吸毒者均为ＣＲＦ０７ＢＣ亚型；１例垂直传播者为Ｃｌｉ０１ＡＥ。首次发现切Ⅻ共８例，其中３例ＣＲＦ５５０１Ｂ亚型、２例ＡＥ／ＢＣ重组、１例ＡＥ／Ｂ重组和１例新型的ＡＥ／Ｂ／Ｃ重组亚型均为ＭＳＭ；１例ＡＥ／ＢＣ重组为异性传播途径感染者。除ＭＳＭ中有７例为Ｂ亚型外，其他途径感染者均为重组亚型毒株感染，天津市表５样本对亚型譬ｐｏｔ等ｐｏｔ｜堕ｅｎｖ辐吴麓嚣Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值与可疑传播的关系分析ｅ，Ｗ７Ｉ口Ａｍ，Ａ＾＿习、万方数据・１１４６・中华流行病学杂志２０１６年８月第３７卷第８期ＣｈｉｎＴＪｌ５Ｍ２３ＪＥｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ａｕｇｕｓｔ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８——Ｔ儿５Ｍ３４Ｔ儿５Ｍ０６一ＴＪｌ５Ｍ４１——ＴＪｌ５Ｍ０５一ＴＪｌ５Ｈ０５——ＴＪｌ５Ｍ３５ｒ—ＴＪｌ５Ｈ０１ＣＲＦ０７ＢＣ（１）——Ｔｊｌ——ＴＪｌ５Ｈｌｌ９８９９ｌＴＪｌ５Ｍ５３５Ｍ５６ＴＪｌ５Ｍ３８勰ｍ一加＿Ⅷ圳脚州删善ｉ㈣——ＴＪｌ５Ｈ１０８８ＣＲＦＯ７ＢＣ２Ｔ儿５Ｍ３７Ｒｅｆ０７ＢＣ．ＣＮ．９８９８ＣＮ００９ＡＦ２８６２ＲｅｆＣ．ＢＲ．９２．ＢＲ０２５ｄ．Ｕ５２９５３Ｒｅｆ．０８ＢＣ．ＣＮ．９７．９７ＣＮＧＸ６Ｆ．ＡＹ００ＴＪｌ５Ｍ４５Ｔ儿５Ｍ４６一Ｂ，ＣＮ．ｘＲＬ４２ＲｅｆＢ．ＦＲ８３ＨＸＢ２ＬＡＪＩＩｌＢＢＲＵＲｅｆｉＢＵＳ．９８．１０５８１Ｉ．ＡＹ３３１２９５Ｔ儿５Ｍ１４ＴＪｌ５Ｍ３０ＴＪｌ５Ｍ２９］９８ＩＴＪｌ５Ｍ０８厂ＴＪｌ５Ｍ１７ＲｅｆＨ．ＢＥ．９３．Ｖ１９９７．ＡＦｌ９０１２８ＲｅｆＧ．ＫＥ９３ＨＨ８７９３１２１．ＡＦ０６１６Ｒｅｆ０６ｃｐｘ．ＥＥ．０ｌＥＥ０３５９．ＡＹ５３５６ＴＪｌ５Ｍ２ｌ８３广—一ＴＪｌ５Ｍ１１Ｌ一５５０１Ｂ．ＣＮ．２０１１．ＧＤＤＧ３１８．ＪＸ５７４６６Ｔ儿５Ｍ０９Ｔ儿５Ｍ３６Ｒｅｆ＿Ａ１．ＲＷ．９２．９２ＲＷ００８．ＡＢ２５３４２１Ｒｅｆ．Ａ２ＣＭ．０１．０１ＣＭ１４４５ＭＶ．ＧＵ２０１ＴＪｌ５Ｍ０３ＴＪｌ５Ｈ０３ＴＪｌ５Ｍ１２ＴＪｌ５ＶＯｌＴＪｌ５Ｍ２０Ｔ儿５Ｍ３９Ｔ儿５Ｍ１８ＴＪｌ５Ⅳ１２４ＣＲＦ０１—ＡＥ（１）ＴＪｌ５Ｍ２６ＲｅｆＯｌＡＥ．ＴＨ．９０．ＣＭ２４０．Ｕ５４７７ｌＴＪｌ５Ｍ１５ＴＪｌ５Ｍ０７Ｔ儿５Ｍ１６ＴＪｌ５Ｍ１３——ＴＪｌ５Ｍ５５ＴＪｌ５Ｍ４２．ＴＪｌ５Ｍ４７．ＴＪｌ５Ｈ１３Ｔ儿５Ｍ０４Ｔ儿５Ｍ２５ＴＪｌ５Ｍ１９ＴＪｌ５Ｈ０２Ｔ儿５Ｍ４３ＣＲＦ０１ｊ匹（２）ＴＪｌ５Ｍ１０Ｔ儿５Ｍ４４ＴＪｌ５Ｈ０８ＴＪｌ５Ｍ４０●－－—－－－－－－＿Ｏ．００５注：对各亚型进化树内的传播对进行分析，Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值≥８０％，基因距离＜０．０１５提示有可疑传播关系图１２０１５年天津市ＨＩＶ行株ｐＤＺ区序列Ｎｅｉｇｈｂｅｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ进化树分析万方数据中华流行病学杂志２０１６年８月第３７卷第８期ＣｈｉｎＪＥｐｉｄｅｍｉｏｌ，Ａｕｇｕｓｔ２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８・１１４７・ＮＮＲＴＩ耐药位点且ｐｏｌ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值均＞／８０％，但由于其ｅｎｖ区Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ值过低无法确定传播关系，调查也未发现直接或间接传播关系，该毒株很可能已在ＭＳＭ中传播，其来源有待进一步研究。综上所述，２０１５年天津市ＨＩＶ感染者重组毒株不断增加并广泛流行，以同性和异性传播为主，性传播者中ＨⅣ新型二代重组和耐药毒株不断产生并在不同人群和不同地区间传播，应引起高度重视。利益冲突无［３］ＦｅｎｇＹ，ＬｉＸＧ，ＺａｎｇＸＨ，ｅｔａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌＨＩＶ－１ｓｅｃｏｎｄ・ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｉｎｆｏｒｍ（ＣＲＦ０１一ＡＥ／ＣＲＦ０７＿ＢＣ）Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，２０１４，３０（８）：Ｊｉｌｉｎ，ＣｈｉｎａｌＪｊ．ＡＩＤＳＲｅｓＨｕｍ８１９—８２２．ＤＯＩ：１０．１０８９／ＡＩＤ．２０１４．００７１．［４］ＷｕＪＪ，ＭｅｎｇＺＦ，ＸｕＪＱ，ｅｔａ１．ＮｅｗｅｍｅｒｇｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨＩＶ－ＩｓｔｒａｉｎｓａｎｄｃｌｏｓｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰＬｏＳｌｉｎｋａｇｅａｏｆＨＩＶ－ＩｓｔｒａｉｎｓｉｎＭＳＭｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｉｃａｔｅｎｅｗｅｐｉｄｅｍｉｃｒｉｓｋ［Ｊ］．Ｏｎｅ，２０１３．８（１）：ｅ５４３２２．ＤＯＩ：１０．１３７ｌ／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ，００５４３２２．［５］ＣｈａｎｇＭＷ，ＴｏｒｂｅｔｔＢＥ．Ａｃｃｅｓｓｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｍａｉｎｔａｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ参考文献［１］ＥｓｈｌｅｍａｎＳＨ，ＨｕｄｅｌｓｏｎＳＥ。ＲｅｄｄＡＤ，ｅｔａ１．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｔｉｃｃｏｕｐｌｅｓｅｎｒｏｌｌｅｄｉｎｔｈｅＨＩＶＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎｉｎｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔＨＩＶ－１ｐｒｏｔｅａｓｅｌＪｊ．ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２０１１，４１０【４）：７５６－７６０．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊｊｍｂ．２０１１．０３．０３８．１６ＪＣｌｕｔｔｅｒＤＳ，ＳａｎｃｈｅｚＰＲ，ＲｈｅｅＳＹ，ｅｔａ１．ＧｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｌｉｎｋａｇｅｏｆＨＩＶｆｒｏｍＴｒｉａｌｓＮｅｔｗｏｒｋ０５２ｔｒｉａｌ［Ｊ］ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２０１１，２０４（１２）：Ｈ１Ｖ＿ｌｆｏｒｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓａｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１６．８（２）：４８．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｖ８０２００４８．１９１８－１９２６．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｉｎｆｄｉｓ／ｊｉｒ６５１．［２］刘大锦，冯孟贤，刘民．中国未接受抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒／获得性免疫缺陷综合征（Ｈ１Ｖ／ＡＩＤＳ）人群ＨＩＶ原发耐药的Ｍｅｔａ分析［Ｊ］．北京大学学报，２０１５，４７（３）：４７４—４８２．ＤＯＩ：１０．３９６９０．ｉｓｓｎ．１６７１—１６７Ｘ．２０１５．０３．０２０．ＬｉｕＤＪ，Ｆｅｎｇ［７］董哲，熊润松，梁富雄．ＲＮＡ与前病毒ＤＮＡ进化分析技术在判定ＨＩＶ－１传播关系中的作用比较［Ｊ］．中国病毒病杂志，２０１５，５（４）：２６７—２７６．ＤＯＩ：１０．１６５０５／ｊ．２０９５一０１３６．２０１５．０４．００８．ＤｏｎｇＺ，ＸｉｏｎｇＲＳ，ＬｉａｎｇＦＸ，ｅｔａ１．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＲＮＡａｎｄｐｒｏｖｉｒａｌＤＮＡｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎＭＸ，ＬｉｕＭ．ＰｒｉｍａｒｙｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｈｕｍａｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＨＩＶ－１ｌＪｊ．ＣｈｉｎＪｖｉｒａｌＤｉｓ，２０１５，５（４）：２６９—２７６．ＤＯＩ：ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ（ＨＩＶ）ａｍｏｎｇＣｈｉｎａ：ａｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ－ｎａｉｖｅｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｉｔｈＨＩＶｉｎｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］Ｊ１０．１６５０５／ｊ．２０９５—０１３６．２０１５．０４．００８．ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖ（ＨｅａｌｔｈＳｃｉ），２０１５，４７（３）：４７４—４８２．ＤＯＩ：１０．３９６９０．ｉｓｓｎ．１６７１—１６７Ｘ２０ｌ５０３０２０（收稿日期：２０１６—０５—０９）（本文编辑：斗智）中华流行病学杂志第七届编辑委员会成员名单（按姓氏汉语拼音排序）名誉总编辑顾问总编辑副总编辑编辑委员郑锡文（北京）曲成毅（山西）李立明（北京）曹务春（北京）汪华（江苏）毕振强（山东）陈可欣（天津）冯子健（北京）贺雄（北京）姜宝法（山东）李敬云（北京）刘殿武（河北）吕繁（北京）祁禄（美国）施小明（北京）汪宁（北京）王全意（北京）项永兵（上海）严延生（福建）俞敏（浙江）张作风（美国）朱谦（河南）冯子健（北京）徐建国（北京）蔡琳（福建）陈维清（广东）龚向东（江苏）胡东生（广东）姜庆五（上海）李俊华（湖南）刘天锡（宁夏）吕筠（北京）乔友林（北京）时景璞（辽宁）王蓓（江苏）王素萍（山西）徐飚（上海）杨维中（北京）詹思延（北京）赵方辉（北京）庄贵华（陕西）顾东风（北京）詹思延（北京）曹广文（上海）程锦泉（广东）顾东风（北京）胡国良（江西）阚飙（北京）李立明（北京）卢金星（北京）马文军（广东）邱洪斌（黑龙江）苏虹（安徽）王岚（北京）吴凡（上海）徐爱强（山东）叶冬青（安徽）张瑜（湖北）赵根明（上海）曹务春（北京）杜建伟（海南）郭志荣（江苏）胡永华（北京）康德英（四川）廖苏苏（北京）陆林（云南）孟蕾（甘肃）仇小强（广西）谭红专（湖南）王鸣（广东）吴先萍（四川）徐建国（北京）于普林（北京）张博恒（上海）赵亚双（黑龙江）陈峰（江苏）段广才（河南）何耀（北京）胡志斌（江苏）李丽（宁夏）刘静（北京）栾荣生（四川）米杰（北京）沈洪兵（江苏）唐金陵（）王定明（贵州）吴尊友（北京）许汴利（河南）于雅琴（吉林）张建中（北京）周宝森（辽宁）陈坤（浙江）方向华（北京）何剑峰（广东）贾崇奇（山东）李群（北京）刘民（北京）罗会明（北京）潘凯枫（北京）施榕（上海）汪华（江苏）王建华（天津）夏洪波（黑龙江）闫永平（陕西）余宏杰（北京）张顺祥（广东）周晓农（上海）何耀（北京）贺雄（北京）姜庆五（上海）王滨有（黑龙江）乌正赉（北京）张孔来（北京）赵仲堂（山东）庄辉（北京）万方数据
