胎盘提前老化的临床意义及发病机制的研究

甲●●８１８６‘８密级编号分类号ＵＤＣ第一军医大学硕士学位论文胎盘提前老化的临床意义及发病机制的研究Ｓｔｕｄｙｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆｐｌａｃｅｎｔａ张莉英指导教师姓名余艳红教授单位名称及地址专业名称论文提交日期论文答辩日期学位授予单位和日期答辩委员会论文评闻人２００５年５月１｜］硕士学位论文胎盘提前老化的临床意义及发病机制的研究硕士研究生：张莉英指导教师：余艳红教授摘要虽然迄今为止尚无准确的胎盘老化的定义，但一般认为，胎盘自妊娠３７周以后开始有老化改变并逐渐加重，胎盘老化改变主要表现为胎盘生长减慢甚至ａｇｉｎｇｏｆ声征象的病理基础及发病机制尚不清楚，从多个方面研究胎盘提前老化的超声超声观察到的强光点和强光团与胎盘内的钙化和纤维化相对应。研究表明，妊娠各期胎盘组织中都有细胞凋亡现象，随孕周进展，胎盘组织中凋亡细停止，胎盘表面、绒毛板和绒毛间隙出现纤维蛋白沉着和钙化灶，绒毛上皮和血管基底膜增厚，常伴有胎盘功能减退。胎盘提前老化（Ｐｒｅｍａｔｕｒｅｐｌａｃｅｎｔａ）是指妊娠足月前胎盘提前出现上述退行性的结构改变。临床上主要是通过超声检查在３７周之前发现ⅡＩ级胎盘成熟度而诊断。临床观察发现，在３７周前，尤其是在３４周以前出现Ⅲ级胎盘成熟度的孕妇，围生期并发症如先兆子痫、胎儿生长受限、羊水过少、胎儿窘迫的发生率显著增加。故有人提出胎盘提前老化的超声征象是妊娠结局不良的一个敏感预测指标。但是胎盘提前老化的超征像与胎盘功能及胎盘病理改变的关系，探讨胎盘提前老化的发生机制，对该现象的观察和处理，及妊高症、ＦＧＲ等妊娠并发症的防治具有十分重要的意义。胞逐渐增加，而过期妊娠、先兆子痫、ＦＧＲ等妊娠并发症中又进一步增加。胎盘的细胞凋亡常与胎盘钙化及纤维化有关，细胞凋亡先于钙化，凋亡小体可以成为钙化的核心。另一方面，伴有胎盘功能下降的妊娠并发症如ＦＧＲ、先兆子痫等均与母体血液循环中前列腺素水平失衡有关，在这些疾病的临床症状出现摘要前２月就可在母体中就可检测到前列环素／血栓素的比例下降，主要表现为前列环素合成减少。最近的研究显示，前列腺素不仅能调节血管的反应性，而且能调节多种细胞的增殖、分化和凋亡，前列腺素中的血栓素可促进体外培养滋养细胞的凋亡，抑制其分化，但前列环素对滋养细胞的影响尚不清楚。为了解胎盘提前老化的超声征象的病理生理基础，及细胞凋亡、前列环素在胎盘提前老化发病机制中的作用。我们进行了此研究。资料和方法１．系统性分析南方医院２０００年１月一２００５年５月５４例经超声诊断为胎盘提前老化孕妇的临床资料，并随机抽取同期２４８例非胎盘提前老化孕妇的资料作为对照，比较两组的分娩孕龄及小于胎龄儿、羊水过少、胎粪污染、先兆子痫等并发症发生情况；控制分娩孕龄及分娩方式，按２：１比例随机选择同期正常孕妇作为对照，比较两组的新生儿出生体重和Ａｐｇａｒ评分；控制检查孕周，按１：１比例选择同期正常孕妇作为对照，比较两组的多普勒脐血流参数和母体血清Ｅ３浓度。２．前瞻性地选择２００３年９月一２００４年１２月在南方医院及广州市第二人民医院进行产前检查和住院分娩的经超声诊断为胎盘提前老化的孕妇１５例作为研究对象，随机选择同期分娩孕龄与其相匹配的１５例正常孕妇作为对照，分娩后留胎盘行ＨＥ染色观察胎盘的病理改变，采用计算机图象分析仪测量胎盘终末绒毛毛细血管、绒毛间腔及绒毛的面积及视野总面积，利用ＳＰＳＳ软件计算出这些参数的体积密度。３．采用免疫组化的方法检测胎盘ＨＰＬ的表达及分布情况，并采用计算机图文分析软件对结果进行半定量分析。４．采用ＴＵＮＥＬ染色法检测胎盘细胞凋亡情况，记数凋亡指数（ＡＩ）。５．取正常孕产妇胎盘组织，采用绒毛组织预消化法进行原代胎盘滋养细胞培养，培养６天后滋养细胞爬满瓶底，予进行滋养细胞鉴定后，分别以不同浓Ⅱ硕士学位论文度的ＰＧＩ。刺激培养。用放射免疫的方法测量２４、４８小时培养液中ＨＰＬ的浓度；刺激培养４８小时后收集细胞，用台盼兰染色判断细胞活力，用流式细胞仪和ＴＵＮＥＬ染色法检测细胞凋亡。记录各项检测指标的数据，经统计学分析，比较不同浓度前列环素对滋养细胞凋亡和分泌功能的影响。结果１．胎盘提前老化组的发病率约为１．２８％，其妊娠并发症的发生率为４４．４４％，对照组为２２．１７％，两者比较，差异具有显著性（Ｐ（Ｏ．００１），其中羊水过少（２５．９２％）、子痫前期（１２．９６％，）、和小于胎龄儿（１６．６７）的发生率显著高于对照组（８．８７％，１．６１％％和４．８４％，Ｐ（Ｏ．０５）；两组的分娩孕龄分别为（３７．２６±２．０８）周和（３９．２７±２．１１）周，胎盘提前老化组的孕龄显著高于对照组；胎盘提前老化组的新生儿出生体重显著低于配对对照组［（２７６９．８１±５６１．３０）ｇｖｓ（２９４１．９６±４６０）ｇ，Ｐ＜Ｏ．０５］，说明胎盘提前老化的超声征象与羊水过少、子痫前期、低体重胎儿等不良妊娠结局的发生有关。２胎盘提前老化组的脐动脉血流的搏动指数（ＰＩ）及脐动脉收缩期最大血流速度（Ｓ）与舒张期血流速度（Ｄ）的比值（ｓ／Ｄ）显著高于配对对照组［（０．７９±０．１５）ｖｓ（０．７１±０．０９）Ｐ＜Ｏ．０５］和［（２．３３±０．３８）ｖｓ（２．００±０．１７），Ｐ＜Ｏ．００１］，说明胎盘提前老化的形态学改变已对脐血流造成影响。３．病理学检查提示提前老化的胎盘发生了绒毛间隙纤维素沉着和钙化、基底膜增厚和钙化、绒毛间质纤维增生、绒毛纤维素样坏死、绒毛合体结节增生、细胞滋养细胞增生等病理改变；病理定量学分析显示胎盘提前老化组胎盘绒毛纤维素样坏死病灶数及含合体结节的绒毛的比例显著高于对照组［（３５．３３±１５．１９）个ＶＳ（２３．７６±１１．９２）个，Ｐ＜Ｏ．０５和［０．３４（０．２４，０．５６）ＶＳ０．２５１９，０．３０］，Ｐ＜Ｏ．０５］］；胎盘的功能组织计量显示绒毛血管的体积密度显著小于对照组［（２３．５７±１．１４）ＶＳ（２５．７８－ｔ－１．５５），Ｐ＜Ｏ．０１］］，绒毛间隙的体积密度显著小于对照组［（３８．９８±６．３９）ＶＳ（５５．４１±６．９５），Ｐ（Ｏ．００１］，两组的绒毛体积密度无显著差异［（４９．３１±１３．５６）ＶＳ（５０．８４±１４．５６），Ｐ＞Ｏ．０５），提示Ｉｌｌ摘要胎盘提前老化组胎盘功能组织结构受到损害，有效功能组织结构减少，使胎盘的气体交换及物质运输、合成能力降低，造成围生期发病率显著增加。３．胎盘提前老化组的孕妇的母血Ｅ３浓度与正常对照组相比无显著性差异［７．９５（４．７，１２．２５）ｎｇ／ｍｌＶＳ８．７（５．４５，１１．６５）ｎｇ／ｍｌ，Ｐ＞０．０５］；胎盘提前老化组的孕妇胎盘内ＨＰＬ的免疫组化显色反应半定量值与正常对照组相比无显著性差异［２０．８７（１５．４４，２４．９２）ＶＳ１９．６１（１８．３２，２０．６７），Ｐ＞０．０５］，说明胎盘提前老化的形态学改变尚未影响胎盘的Ｅ３和ＨＰＬ分泌。４．胎盘的原位细胞凋亡检测（ＴＵＮＥＬ法）提示提前老化胎盘细胞凋亡指数显著高于对照组［Ｏ．４２（０．２９，０．７４）ＶＳ０．２３（０．１２，０．２７），Ｐ＜０．００１］，提示细胞凋亡增加可能是胎盘提前老化的发病机制之一。５．１ｕＭ、３ｕＭ和１０ｕＭ．浓度的ＰＧＩ：分别刺激培养原代第６天的正常足月滋养细胞，与空白对照组相比，培养４８小时后研究组滋养细胞融合增加，细胞活力显著高于对照组ｆ（０．６５±０．０２２）、（０．７０±０．２０）、（０．７３±０．０２１）ＶＳ（０．６３±０．０２０），Ｐ＜０．０５］；与空白对照组相比，在３ｕＭｌ／Ｌ和１０ｕＭ／ＬＰＧＩａ中培养４８小时后滋养细胞凋亡指数显著降低【ＯＯ．６３－４－１．０５）、（２６．８４±１．６６）ｖｓ（３２．９０－－－－－１．７３），Ｐ＜０．００１］；在ｌｕＭ／ＬＰＧｌ２中培养４８小时后，滋养细胞凋亡指数与对照组比较，差异无显著性［０１．９８４－１．２０）ｖｓ（３２．９０＋１．７３），Ｐ＞０．０５］。２４小时和４８小时ＨＰＬ分泌量显著高于对照组［（０．５２４－０．１０）（０．５７±０．０６）（０．７１±０．０３）ＶＳ（０．２８±０．０６），＜Ｏ．００１］和［（０．３３±０．０７４）（０．４２４－＿０．１ｌ＃）（０．５２４－０．０８）ＶＳ（Ｏ．２１±Ｏ．０４）。说明ＰＧｌ２能在形态和功能上显著促进体外培养足月滋养细胞的分化，抑制其凋亡，对滋养细胞有保护作用。结论１．胎盘提前老化的超声征象与不良妊娠结局相关，应在妊娠晚期加强监护２．提前老化胎盘功能组织结构受损，有效功能组织结构减少，导致脐血流减少，是造成其围生期发病率显著增加的病理基础。３．提前老化胎盘分泌Ｅ３和ＨＰＬ的功能无明显改变，说明提前老化胎盘仍有硕士学位论文很强的代偿能力。５．胎盘内细胞凋亡增加是胎盘提前老化的发病机制之一。ＰＧＩ。能抑制体外培养滋养细胞的凋亡，在形态和功能上促进其分化，对滋养细胞有保护作用。关键词胎盘超声细胞凋亡胎盘泌乳素胎盘病理前列腺素Ｖ硕士学位论文ＳｔｕｄｙｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆｐｌａｃｅｎｔａＳｔｕｄｅｎｔ：ＺｈａｎｇｌｔｙｉｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＰｒｏｆＹｕｙａｎｈｏｎｇＡＢＳＴＲＡＣＴｔｈｅｒｅｉｓｎｏｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎｏｎｐｌａｃｅｎｔａｌｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｕｎｔｉｌｔｏｄａｙ，ｉｔｉｓｂｅｌｉｅｖｅｄｔｈａｔａｆｔｅｒ３７ｗｅｅｋｓｉｎｎｏｒｍａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｌｙａｎｄｈａｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ．Ｐｌａｃｅｎｔａｌｇｒｏｗｔｈｓｌｏｗｓ，ｃｅａｓｅｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｌａｓｔｆｅｗｗｅｅｋｓｏｆｇｅｓｔａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｐｌａｃｅｎｔａｌａｓｉｎｆａｒｃｔｓ，ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｂａｓａｌｍｅｍｂｒａｎｅｔｈｉｃｋｅｎ，ｏｒｍａｓｓｉｖｅｆｉｂｒｉｎｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅ，ｏｆｔｅｎｃｏｍｐａｎｉｅｄｗｉｔｈｐｌａｃｅｎｔａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｄｅｃＵｎｅ．ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｅｒｍｐｌａｃｅｎｔａａｒｅｏｆｔｅｎｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓａｇｉｎｇ．Ｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆｐｌａｃｅｎｔａｍｅａｎｓｔｈａｔｐｌａｃｅｎｔａａｐｐｅａｒｓｔｈｅａｇｉｎｇｃｈａｎｇｅｏｎｂｅｆｏｒｅｔｅｒｍ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｐｌａｃｅｎｔａｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃａｐａｃｉｔｙｄｅｃｌｉｎｅ．ＴｈｉｓｉｓｄｉａｇｎｏｓｅｄｂｙａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｇｒａｄｅＩＩＩｐｌａｃｅｎｔａｌｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｎｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｂｅｆｏｒｅ３７ｗｅｅｋｓｏｆｇｅｓｔａｔｉｏｎ．ＩｔｉｓｗｉｄｅｌｙｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓｇｒａｄｅＩＩＩｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｌｃｈａｎｇｅｓｐｒｉｏｒｔｏ３７ｗｅｅｋｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｐｒｉｏｒｔｏ３４ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｃｉｄｅｎｃｅｓｏｆｐｅｒｉｎａｔａｌｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｓｕｃｈａｓｇｒｏｗｔｈｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎｅｔａ１．ＳｏｐｒｅｔｅｒｍｇｒａｄｅＩＩＩｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｐｒｅｄｉｃｔｏｒｏｆｐｏｏｒｐｅｒｉｎａｔａｌｏｕｔｃｏｍｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｂａｓｅａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｓｏｆｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆａｒｅｎｏｔｓｔｉｌｌｕｎｄｅｒｓｔｏｏｄ．ＩｔｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｆｉｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎａｍｏｎｇｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｉＡｌｔｈｏｕｇｈｗｉｄｅｌｙａｇｅｓｅｖｅｎａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ，ｓｕｃｈｐｅｒｉｖｉｌｌｏｕｓＴｈｅｓｅｐｌａｃｅｎｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｕｓｕａｌｌｙｉｍａｇ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ｌｕｍｅｄｅｎｓｉｔｙｏｆｖｉｌｌｉｓｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．［（４９．３１±１３．５６）ＶＳ（５０．８４±１４．５６），Ｐ＞Ｏ．０５］，３．Ｔｈｅｒｅｗａｓ１１０ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＰＬｉｎｐｌａｃｅｎｔａｓａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＥ３ｉｎｍｏｔｈｅｒｎｂｌｏｏｄｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓ［２０．８７（１５．４４，２４．９２）ＶＳ１９．６１（１８．３２，２０．６７），Ｐ＞０．０５］ａｎｄ［７．９５（４．７，１２．２５）ｎｇ／ｍｌＶＳ８．７（５．４５，１１．６５）ｎｇ／ｍｌ，Ｐ＞Ｏ．０５］４．Ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｉｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ．ｉｎｃｏｎｔｒｏｌｓ［０．４２（０．２９，０．７４）ＶＳ０．２３（０．１２，０．２７），Ｐ＜Ｏ．００１］５．ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｐｌａｃｅｎｔａｌｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰＧｈｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＨＰＬｏｆｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｉｒａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｏｎｅｌｕｓｉｏｎ１．Ｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｅｇｎａｎｔｏｕｔｃｏｍｅｓ．２．Ｔｈｅｔｉｓｓｕｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｓｗａｓｄａｍａｇｅｄ．Ｔｈｅｉｒａｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄａｎｄｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍｏｆｕｍｂｉｌｉｃａｌａｒｔｅｒｙｗａｓｒｅｄｕｃｅｄ．Ａｌｌｔｈｅｓｅｃｈａｎｇｅｓｍａｙｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｐｒｅｇｎａｎｔｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｍ．．３．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＰＬｉｎｐｌａｃｅｎｔａｓａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＥ３ｉｎｍｏｔｈｅｒｎｂｌｏｏｄｉｎｔｈｅｓｔｕｄｉｅｄｄｉｄｎ’ｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｌｉｎｅｄ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｓｐｒｅｍａｔｕｒｅｌｙａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｈａｓｓｔｉｌｌｅｎｏｕｇｈｃａｐａｂｉｌｉｔｙｔｏｃｏｍｐｅｎｓａｔｅｔｈｅｄａｍａｇｅｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．４．Ａｐｏｐｔｏｔｉｃｉｎｄｅｘｉｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｍａｙｂｅｏｎｅｏｆｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆｐｌａｃｅｎｔａ．ＰｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎＣａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＨＰＬ丝！坐里ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔＰＧｌ２ｃａｎｐｒｏｔｅｃｔｔｅｒｍｈｕｍａｎｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｆｒｏｍａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｉｎｔｈｅｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｓａｎｄｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆＨＰＬｄｅｃｒｅａｓｅｓ．ＡｌｌｔｈｅｓｅｓｈｏｗｔｈａｔｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｄｅｃｒｅａｓｅｍａｙｂｅｏｎｅｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｐｌａｃｅｎｔａ；Ｕｌｔｒａｎｓｏｕｎｄ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｌｌａｃｔｏｇｅｎ；Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ；Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ硕士学位论文前言迄今为止，尚无准确的胎盘老化的定义，关于胎盘是否存在老化的过程目前也存在争议。Ｆｏｘ［１】认为，妊娠足月后，胎盘虽已达到一个充分满足转运功能的规模，但作为滋养细胞再生的干细胞成分…细胞滋养细胞…仍具有再生潜能，能分化为寿命较短的合体滋养细胞，在不良的母体环境中，可通过增加胎盘的重量来维持胎儿的需要；同时，妊娠足月后，胎盘中仍可见到具有生发能力的不成熟中间绒毛，胎盘的激素分泌功能无明显下降，介导物质转运的特殊胎盘载体仍有增加，故认为足月胎盘并不是一个老化器官。但是，有大量证据证实，妊娠足月以后，胎盘的生长速度确实减慢，ＤＮＡ合成减少，胎盘内出现退行性改变如毛细血管和滋养层的基底膜增厚、细胞滋养细胞增生、血管闭锁、绒毛表面纤维素沉积，绒毛板和基底板纤维素沉着、于绒毛和成熟中间绒毛血管周围结缔组织纤维性硬化等变化增加，提示胎盘交换效益降低【２３４５６１。因此，从定量的观点来看，足月胎盘确实发生了一个储备能力逐渐下降的老化过程。这种老化是由于代谢和增殖过程中结构和功能的氧化损害累积效应抑或是细胞发育过程中生命钟基因的开启表达的结果尚有待于进一步的研究。从上述老化的观点来看，胎盘提前老化（Ｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆｐｌａｃｅｎｔａ）是指在妊娠足月前胎盘提前出现退行性的形态结构改变。临床上主要是通过超声检查在３７周之前发现ＩⅡ级胎盘成熟度而诊断［７］ｏ临床观察发现，超声诊断为胎盘提前老化的孕妇，尤其是在３４周以前出现ＩＩＩ级胎盘者，围生期并发症如先兆子痫、胎儿生长受限、羊水过少、胎儿窘迫的发生率显著增加【８９１０１，故有人提出胎盘提前老化的超声征象是妊娠结局不良的一个敏感预测指标ｆ９Ｊ】。尽管这些与胎盘提前老化的超声征象有关的围生期并发症都与胎盘功能下降有关，但这种超声征象的病理生理基础及其发病机制尚不清楚。从多个方面研究胎盘提前老化的超声征象与胎盘病理改变及胎盘功能的关系，探讨胎盘提前老化的发生机制，对该现象的观察和处理及妊娠并发症的防治具有十分重要的意义。超声胎盘成熟度分级的Ｇｒａｎｎｕｍ标准［１１】是在将超声观察到的强光点和强光前言团进行分区量化的基础上制定的一种超声诊断标准。组织学及放射影像学的研究已证实超声观察到的强光点和强光团与胎盘内的钙化和纤维化相对应“２…。早在１９７６年，Ｆｉｓｈｅｒｌｌ４】等就发现，提前出现的ⅡＩ级胎盘与伴有胎盘功能下降的妊娠并发症有关，Ｃａｒｒｏｌｌｌ９１报道２２例先兆予痫中，２２．７％的患者３５周之前有ＩＩＩ级胎盘。不同文献对胎盘提前老化的超声诊断标准描述不一致。在１９８２年，Ｑｉｎｌａｎｌ８Ｊ等将超声诊断胎盘提前老化标准定义为在为足月之前发现ＩＩＩ级胎盘，依据此标准，他们分析了一年的超声检查结果，发现胎盘提前老化的发生率约为２．１％（４１／１９３６），７８％的胎盘提前老化孕妇合并明显的围生期并发症，例如先兆子痫、胎儿生长受限、胎儿窘迫、胎盘早剥等。Ｃｈｉｔｌａｎｇｅ（１９９０）【９】、Ｂａｅｚａ（１９９５）１７１和ＭｃＫｅｎｎａ［１０】（２００５）分别采用３４周前、３７周前及３６周前发现ＩⅡ级胎盘钙化作为诊断标准进行对照研究也获的类似结论。但是Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ［１６１等采用ＩＩ级或ＩＩＩ级胎盘出现在比人群中同级胎盘出现的平均时间早一个标准差作为胎盘提前老化的超声诊断标准，提前出现的ＩＩ级和ＩＩＩ级胎盘组与正常对照相比，母体高血压、胎儿窘迫的发生并无显著差异，但提前出现的ＩＩＩ级胎盘组中，小于胎龄儿的发生显著增加。这种妊娠并发症发生的差异可能与他们采用的标准不同有关，另外ＩＩ级胎盘功能旺盛，提前出现的Ⅱ级胎盘相对更少对胎儿构成不利影响。随着超声观察到的胎盘提前老化现象与围生期问题的关系日渐明了，迫切需要选择一种敏感和特异性都ｂＥ较好的反应胎盘功能的指标来了解这种现象与胎盘功能的关系，但是尚未见该方面的研究报道。目前监测胎盘功能的手段有直接测定和间接测定两种，前者是检测胎盘的产物（如激素、酶和特异蛋白），后者是监测胎儿是否有缺氧（如胎心监护、胎儿物理评分、子宫动脉血流和脐血流测定等）。血游离雌三醇（Ｅ３）、胎盘生乳素（ＨＰＬ）、妊娠特异性Ｂ．糖蛋白（Ｂ．ＳＰｌ）检测是目前国内外常用的生化指标。ＨＰＬ是胎盘合体滋养细胞合成分泌的一种单链多肽激素，母体和胎儿都不产生。正常妊娠第５周起，即可在母血中测出微量，以后随孕期增长而含量升高，妊娠晚期的产生量是早期的５００—１０００２硕士学位论文倍，半衰期短，约２０—３０分钟，可迅速反应胎盘功能状态，已成为胎盘功能的检测的金标准。但是母体血胎盘激素浓度受多种因素的影响，可能不能敏感地反映胎盘的分泌功能。随着免疫组化技术和计算机技术的发展和成熟，使得胎盘原位ＨＰＬ的检测和半定量成为可能。目前国内外有将ＨＰＬ的胎盘原位检测用于胎盘功能的研究报道【１７】。正常胎盘随孕周不同及胎盘不同区域，绒毛变化的差异很大，而多数胎盘的病理变化是量变而非质变，因此定量分析胎盘病理变化在胎盘的研究中尤为重要。体视学方法是将光镜提供的二维平面结构推论出三维立体结构，从而更好地了解器官和组织的真实情况的定量病理研究方法。胎盘提前老化是在胎盘超声钙化改变量化基础上作出的一种诊断，而胎盘钙化、纤维素沉积、绒毛纤维素样坏死等胎盘老化的病理改变是妊娠晚期胎盘中常见的非特异性的退行性改变，因此，欲准确了解出现提前钙化的超声征象的胎盘的病理改变与正常钙化的胎盘的差异，及其与妊娠并发症及胎盘功能的关系，必须从定量的角度进行分析。胎盘的体视学研究己被广泛应用于胎儿宫内发育受限、先兆子痫等妊娠并发症的胎盘功能的研究中【１８】。胎盘提前老化的发生机制尚不清楚，缺氧和氧化应激引起的细胞凋亡增加可能在胎盘提前老化的形成机制中发挥了重要作用。近年来大量研究表明，妊娠各期胎盘组织都有细胞凋亡，而且细胞凋亡异常与妊娠并发症的发生密切相关，尤其是合体滋养的细胞凋亡。Ｓｍｉｔｈｔｌ９ｚｏＪ等１９９７通过研究各期胎盘组织发现随孕周进展，胎盘组织中细胞凋亡显著增加，随后，他们又相继发现先兆子痫和胎儿生长受限胎盘中存在细胞过度凋亡现象。Ａｘｔ［２１】（１９９９）年也通过实验证实足月胎盘组织细胞凋亡增加，而过期妊娠、ＦＧＲ中又进一步增加。Ｉｓｈｉｈａｒａ（２００４）１２２】年进一步证实，滋养细胞凋亡以妊娠第４—５周最高，但妊娠第７－９周又显著下降，以后又逐渐增加，足月胎盘中较中期胎盘高。这些研究说明，细胞凋亡增加是胎盘成熟老化和妊娠并发症发生的机制之一。体外试验显示，缺氧可以抑制足月滋养细胞分化和促进其凋亡【矧，而妊娠３前言第４．５周正是胎盘高度缺氧时期，这可以解释滋养细胞凋亡以妊娠第４．５周最高的现象。先兆子痫和胎儿宫内发育迟缓的主要病理特征是绒毛外滋养细胞螺旋动脉侵入不足导致胎盘灌注不良，组织缺氧。组织缺氧可以解释先兆子痫和胎儿生长受限时的胎盘细胞过度凋亡现象。由于胎盘提前老化常见于先兆子痫、胎儿生长受限等产科并发症，故我们推测，胎盘提前老化胎盘中可能也存在细胞过度凋亡，其主要原因是各种原因引起的胎盘组织缺氧。前列腺可以调节多种细胞的增生、分化和凋亡【２４２５１。最近研究显示，缺氧导致的滋养细胞凋亡与前列腺素有关，缺氧体外培养的滋养细胞分化，上调列腺素合成酶２（ＰＧＨＳ一２）的表达【２６】。运用免疫组化和ＲＴ－ＰＣＲ等方法也证实ＰＧＨＳ．２在先兆子痫、足月胎盘中表达增加【２７２８１。Ｙｕｓｕｆ等（２００１）发现ＰＧＨＳ一２的产物血栓素Ａ２可以直接抑制体外培养的滋养细胞的分化和促进其凋亡【２…。先兆子痫、胎儿富内发育受限等产科并发症孕母体内都存在舒血管和缩血管的的前列腺素比例失调，主要表现为舒血管ＰＧｌ２减少ｐ０３”。前列环素是迄今为止发现的能在所有血管组织中都能检测到的一种花生四烯酸产物，具有强烈的舒张血管作用，同时也是最强的血小板聚集抑制物，不但能抑制血小板聚集，而且能使聚集的血小板分散。近来的研究显示，前列环素似乎还有细胞保护的作用，它不仅能保护细胞免于坏死，而且能发挥抗凋亡的作用【３２３３３４吲。前列环素对滋养细胞的分化凋亡的影响尚不清楚，可能对ＴＸＡ２的促凋亡作用拮抗作用。虽然阿司匹林用于预防先兆子痫显示了有利的作用，这种作用可归功于其对前列腺素合成酶的不可逆抑制【”。但是如果上述假设成立，那么选择性应用前列环素制剂预防滋养细胞凋亡将是更佳的治疗方案。有鉴于此，我们拟观察３７周前超声检查提示有ＩＩＩ级胎盘成熟度的孕妇的脐血流和血Ｅ３浓度变化，分娩时留胎盘行ＨＥ染色、ＴＵＮＥＮＬ染色及ＨＰＬ的免疫组化染色，观察胎盘组织学结构的改变，细胞凋亡情况及ＨＬＰ的胎盘表达情况，并对其病理改变及有效功能结构进行定量分析，探讨胎盘提前老化的超声征象与胎盘病理改变、胎盘功能及胎盘细胞凋亡的关系。并观察ＰＧｌ２对体外培４硕士学位论文养的足月胎盘的滋养细胞分化和凋亡的影响，探讨前列环素水平下降在胎盘提前老化的发生机制中的作用。艟盘提鼹老化与妊娠结局戆关系第一章胎盘提前老化与妊娠结局的关系１．１材料和方法１．１．１研究对象及分组磺究组（黢盘提戴邃健维）：２０００年１兵～２００５年５兵在凌方医科大学露属南方医院产检和分娩的经超声诊断为胎盘提前老化的产妇５４例。对照组１：涎极弦取２４８穗瓣期菲耱鑫老纯孕菇戆瓷麓作必对照（葵中１４９餐孕妇分娩蘸为ＩⅡ级胎盘，９９例为ＩＩ级胎盘），比较两组孕妇的分娩孕龄及妊商征、羊水过少等妊娠并发症的笈生情况；对照缀２：控涮分娩孕周，随机抽取１０８铡与研究对象按２：１比例进行配对的正常孕妇的资料作为对照，比较两者新生儿出生体重、新生儿Ａｐｇａｒ评分。对照组３和对照组４：控制检查孕龄，按１：Ｉ比例抽取与磺究组对藩据匹瓣螅正露孕妇的资料｛乍必对照，分别比较嚣组瓣脐壶、凌、盔Ｅ３假。合并内外科疾病患者排除本研究。掰骞蚕耍突对象妊娠藏是经均攫爨，孕麓有《次或４次爨±瓣超声稔查，综合术次月经、早孕反应、胎动时问及孕期检查确定孕龄，不符合上述条件者排除本磷究。各组年龄、孕次及产次均衡穗检验无差异。１．Ｌ２研究方法１．１．２．１诊断标准采用在３７髑耱Ｂ超梭查发现ＩｌＩ级胎摄成熟发作为胎盘提前豢亿的诊断标准ｍ’；以杨锡强“１主编第六版《儿科学》中中国１５个城市不同胎龄新生儿出生体熬蓬馋蔻标准，托毅生ｊｂ出生髂霪低予该表中鼷孕龄黯，ｋ体重的第十位吾分数则诊断为小于胎龄儿；妊高征、羊水过少等妊赚并发症诊断标准同乐杰㈣主编第六舨《螽产科学》；１．１．２．２胎盘成熟度分级采用系芝黑自超声诊断仪和ＡＴＬＨＤＩ５０００彩色多谱勒超声诊断仪进行超声溅察。擞据Ｇｒａｎｎｕｍ“”标准将胎盘成熟艘分为４级。０级：绒纛扳平鸯光滑，验６硕士学位论文盘实质回声均匀，基底层无致密回声。Ｉ级：绒毛板呈微小的波浪起伏，胎盘实质显示散在的分布不均匀的致密点状回声，基底层无致密回声。ＩＩ级：绒毛板呈明显锯齿状，并可延伸入胎盘实质，但未达基底层；胎盘的实质的粗点状的致密回声，基底层回声呈线状排列。ＩＩＩ级：绒毛板显著地呈锯齿状，伸入胎盘实质并达基底层；胎盘小叶形成，实质内可出现透声暗区，周围围绕光环，有时可见反光强钙化斑，可见声影；基底层大而融合的回声增强可有声影。２．１．２．３脐血流的检测脐血流检测采用ＡＴＬＨＤＩ５０００型彩色多谱勒超声诊断仪。探头频率３．５ＨＺ，超声束与血流方向夹角为０－３００，取样容积２ｍｍＸ２ｍｍ。在距胎盘附着点５ｃｍ范围内取得满意频谱后停帧测定脐动脉（ＵｍＡ）波形，电脑选定最佳波形。测定项目有脐动脉的搏动指数（ＰＩ）、阻力指数（ＲＩ）、脐动脉收缩期最大血流速度（ｓ）和舒张末期血流速度（Ｄ）的比值。２．１．３．４血Ｅ３的检测：每次抽静脉血４ｍｌ，送南方医院外科实验室检测。检测方法为酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）。Ｅ３ＥＬＩＳＡ检测试剂合购自Ｂｉｏ－ＥｋｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司。１．１．３统计学方法配对资料采用配对ｔ检验或相关资料秩和检验，非配对资料采用两样本ｔ检验或秩和检验，构成比采用Ｐｅａｒｓｏｎ卡方检验或Ｆｉｓｈ精确概率法，选择性对部分母胎围生期结局进行优势比（ＯＲ值）和０Ｒ值的９５％的可信区间（ＣＩ）估计。所有结果由计算机ＳＰＳＳｌｌ．０软件包处理。１．２结果１．２．ｉ两组孕妇的孕龄和剖宫产率比较５４例胎盘提前老化孕妇中，２例在３１周之前Ｂ超检查发现为ⅡＩ级胎盘，２３例在３２周－３５周之间发现ⅡＩ级胎盘，２９例在３４周一３７周之间发现ＩⅡ级胎盘；其中４８例病人为剖宫产，６例阴道分娩；３２周前分娩ｌ例，在３２—３４周之间分娩７胎盘提前老化与妊娠结局的关系４例，３６—３７周之间分娩１７例，在３７周以后分娩３２例。胎盘提前老化组孕龄缩短，两组比较差异显著（，＝５．０８８，Ｐ＜０．００１）。胎盘提前化组的剖宫产率为８８．８９％，剖宫产率显著高于对照组（Ｘ２＝１０．９８，Ｐ＝０．００１），详见表１。表１－１两组孕妇孕龄和剖宫产率的比较Ｔａｂ．１－１ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌａｇｅｓａｎｄｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆＣｅｓａｒｅａｎｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（Ｍｅａｎ士ＳＤ）粑＃Ｐ＜０．００１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｍｕｐｌ１．２．２新生儿Ａｐｇａｒ评分和体重经配对比较，胎盘提前老化组和对照组的新生儿１分钟Ａｐｇａｒ评分和５分钟Ａｐｇａｒ评分无显著差异（乃０．０５）；胎盘提前老化组新生儿体重明显低于对照组（ｆ＜０．０５），见表卜２。表卜２两组新生儿Ａｐｇａｒ评分和出生体重的比较Ｔａｂｌ－２ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＡｐｇａｒｓｃｏｒｅＩ；ａｎｄｎｅｗｂｏｒｎｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（Ｍｅａｎ－＋ＳＤ）’Ｐ＜Ｏ．０５ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２１．２．３两组孕妇母血Ｅ３浓度的比较５４例提前老化孕妇中，２１例孕妇产前进行了母血Ｅ３浓度的检测，共进行了４０次Ｅ３浓度的检测。选择４０例检查孕龄一致的正常孕妇的资料与之进行对硕士学位论文照比较，两组母血Ｅ３浓度无显著性差异（Ｐ＞０．０５），详见表卜３。表ｌ一３两组母血Ｅ３浓度的比较Ｔａｂｌ·３ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＥ３ｉｎｍｏｔｈｅｒｎｂｌｏｏｄｂｅｔｅｅｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ叫ｅｔｈａｎ（ｉｎｔｅｒｑｕａｒｔｉｌｅｒａｎｇｅ）】１．２．４两组孕妇脐血流的比较５４例孕妇中有３ｌ例孕妇在产前进行了多普勒脐血流检查，共进行了３７次检查，选择同期３７例检查孕龄与其一致的正常孕妇的脐血流检查结果与之进行对照比较，胎盘提前老化组的脐动脉血流博动指数（ＰＩ）显著高于对照组（Ｋ０．０５），脐动脉收缩期最大血流速度（ｓ）与舒张期血流速度（Ｄ）的比值（Ｓ／Ｄ）值显著高于对照组（尺Ｏ．００１），详见表卜４。表１—４两组孕妇脐血流的多普勒参数的比较Ｔａｂｌ·４ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＤｏｐｐｌｅｒｉｎｄｉｃｅｓｏｆｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍｏｆｕｍｂｉｌｉｃａｌａｒｔｅｒｙｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐ（Ｍｅａｎ＋ＳＤｌ＋Ｐ＜Ｏ．０５ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２”Ｐ＜０．００１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２１．２．５两组妊娠并发症的发生情况的比较胎盘提前老化组羊水过少、小于胎龄儿、子痫前期的发生率显著高于对照组（尸（０．００１），胎盘提前老化发生羊水少的优势比为（ＯＲ值）３．５９５（Ｐ＝Ｏ．００１），其９５％的可信区间（ＣＩ）为（７．６０９，１．６９９）；发生子痫前期的优势比为９．０８５，胎盘提前老化与妊娠结局的关系其９５％的可信区间（ＣＩ）为（２．５５８，３２．２７１）；发生小于胎龄儿的的优势比为３．９３３，ＣＩ为（１．５５６，９．８８２）。但两组羊水粪染的发生率无显著性差异（Ｐ＝０．５９８），详见表卜５。表１－２两组孕产妇的妊娠并发疰发生情况Ｔａｂｌｅｌ．２Ｐｅｒｉｎａｔａｌｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ（％）叩＜０．０５ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２４＋Ｐ＜Ｏ．００１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２１．３讨论１．３．１不同超声胎盘成熟分级在妊娠中分布情况关于胎盘成熟度分级的分布，不同地区的报道有差异。正常情况，２８周前很少有ＩＩ级胎盘，ＩＩ级胎盘分布在３０—４０周之间，以３６—４０周多见，ＩＩＩ级胎盘主要分布在３７周以后，ＩＩＩ级胎盘在足月时约占１７－２８％。１。３７周前ＩⅡ级胎盘的发现率约为２．１％。我院２０００年１月一２００５年５月５年期间住院孕产妇有４２０９，其中有５４人在３７周前有ⅡＩ级胎盘，发生率约为１．２８％，低于文献报道，可能与胎盘提前老化的诊断尚未普遍用于临床导致部分病历漏检有关。１．３．２胎盘提前老化和胎盘功能的关系超声胎盘成熟度分级的Ｇｒａｎｎｕｍ标准是将超声观察到的强光点和强光团进超声胎盘成熟度分级的Ｇｒａｎｎｕｍ标准是将超声观察到的强光点和强光团进硕士学位论文行分区量化的基础上制定的一种超声诊断标准。组织学及放射影像学的研究已证实超声观察到的强光点和强光团与胎盘内的钙化和纤维化相对应“”…，胎盘绒毛间和基底膜的广泛钙沉积和纤维化可造成胎盘功能损害。……。李玮景““等通过电镜观察胎儿过熟综合症的胎盘，认为Ｂ超示Ⅲ级胎盘是胎盘老化的直接依据。脐带血流的速度和流量，直接反应胎盘对胎儿的供血情况，体现胎盘功能状态。脐动脉的搏动指数及收缩期最大血流速度（ｓ）与舒张期血流速度（Ｄ）的比值（Ｓ／Ｄ）值是目前监测脐血流的两个特异性和敏感都比较好的多谱勒参数。本研究显示，胎盘提前老化组的ＰＩ及Ｓ／Ｄ值较对照组显著增加（Ｐ＜Ｏ．０５），提示胎盘提前老化的超声形态学改变对脐血流有影响。妊娠期母体血清Ｅ３来源于胎儿一胎盘单位，其动态观察是胎盘功能监测的重要指标，母体血Ｅ３持续低水平或连续测定曲线平坦，常提示胎盘功能不全。本研究显示，两组母体血Ｅ３浓度并无显著性差异，考虑原因有１－本组资料中一部分对象仅进行单次测定，不能准确反应胎盘功能状态；２；本组资料中部分患者进行了肝素等治疗，可对胎盘功能造成影响，我们在临床工作中观察到，胎盘提前老化孕妇使用肝素治疗后，母血Ｅ３值常有较大幅度增加。３母体血清Ｅ３浓度受多种因素影响，不能敏感反应胎盘状态。４提前老化胎盘可能仍有较好的代偿能力，从而使Ｅ３保持在正常水平，但这种假设尚需要进一步的研究证实。１．３．３胎盘提前老化和围生儿结局的关系提前出现的ＩＩＩ级胎盘成熟度常与伴有胎盘功能下降的妊娠并发症有关。Ｃｈｉｔｌａｎｇｅ９３等前瞻性地对２７０名正常孕妇在３卜３４周进行胎盘分级并跟踪妊娠结局，发现在这期间出现ＩＩＩ级胎盘成熟度的孕妇妊高征、低出生体重、胎儿窘迫、Ｆ６Ｒ等围生期并发症显著增加。ＭｃＫｅｎｎａ”１和Ｂａｅｚａ”１分别采用３６周前和３７周前发现ＩＩＩ级胎盘作为胎盘提前老化的诊断标准进行对照研究也获的类似结果。但由于不同操作者的ⅡＩ级胎盘诊断误差较大，可影响这种检查方法对妊娠结局不良的预测价值“…。１１胎盘提前老化与妊娠结局的关系我们以３７周前出现ＩⅡ级胎盘作为胎盘提前老化诊断标准进行回顾性研究，发现虽然两组平均分娩孕周均大于３７周，新生儿平均体重在正常范围，但胎盘提前老化组分娩孕龄和新生儿出生体重显著低于对照组，考虑到不同分娩孕周对体重结果可能造成影响，故在控制分娩孕周的条件下进行配对比较，差异仍具有显著性，而且，胎盘提前老化组小于胎龄儿的比例显著高于对照组Ｉ，说明胎盘提前老化对胎儿的生长发育有一定影响。胎盘提前老化组中２２例孕妇发生了妊娠并发症，发生率为４４．４４％，对照组妊娠并发症的发生率为２２．１７％，两组比较，差异具有显著性（尺Ｏ．００１）。其中羊水过少、小于胎龄儿和子痫前期的发生率均显著高于对照组，提前老化胎盘发生这三种妊娠并发症的优势比分别为３．５９５、３．９３３和９．０８５，它们的优势比的９５％的可信区间分别为（７．６０９，１．６９９）、（１．５６６，９．８８２）、（２．５５８，３２．２７１），均未包括ｌ，说明胎盘提前老化羊水过少、小于胎龄儿和子痫前期的风险显著增加。本组资料中胎盘提前老化孕妇的妊娠并发症的发生率低于国外文献报道，推测可能与本研究的部分对象使用了肝素等治疗有关。我们在研究初曾随机对部分患者进行了肝素治疗，这些治疗了的患者大部分有较好的妊娠结局，由于样本量偏小，本研究未对这部分资料进行总结。两组的羊水粪染的发生率及新生儿１分钟和５分钟Ａｐｇａｒ评分无显著差异，可能与研究设计中未排除脐带因素、分娩方式等造成的混杂影响有关。１．３．４胎盘提前老化与分娩方式的选择胎盘提前老化组剖宫产率高达８８．１９％，显著高于对照组（Ｐ＜０．００１＝，剖宫产的主要指征是羊水过少、子痫前期、ＦＧＲ和胎儿窘迫等，另外，一部分患者在监视过程中虽未发生明显胎盘功能减退或妊娠并发症，亦选择了剖宫产，说明提前出现的ＩＩＩ级胎盘的超声检查结果使医务人员和病人都趋于选择剖宫产以保证胎儿安全。但剖宫产是否是这部分患者的最佳分娩方式尚有待于多中心的大样本临床对照研究证实。硕士学位论文综上所述，我们认为胎盘提前老化的超声征象与胎盘功能减退及予痫前期、羊水过少、胎儿生长受限等妊娠并发症的发生密切相关，是妊娠结局不良的一个预兆，应对其引起高度重视，加强母胎监护。但监护过程中应注意动态观察并联合应用多个指标进行综合评价。胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘ＨＰＬ的及胎盘细胞凋亡的关系第二章胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘Ｉ－ＩＰＬ的表达及胎盘细胞凋亡的关系２．１资料和方法２．１．１研究对象２００３年６月一２００４年１２月在我院及广州市第二人民医院进行产前检查和住院分娩的在３７周前Ｂ超检查发现ＩＩＩ级胎盘成熟度的产妇１５例作为研究对象，其中合并妊高征１例，胎儿生长受限４例，羊水过少２例，死产１例，胎儿窘迫１例。患者年龄２２—３６岁，平均（２７±３．２）岁，分娩孕周３３—４１周，平均分娩孕周为（３７．４５±２．１６）周。随机选择同期分娩孕龄与研究对象一致的正常产妇１５例作为对照，年龄２３—３７岁，平均（２６．０３４－３．００），两组的年龄差异无显著性。２．１．２主要仪器和试剂２．１．２．１仪器设备ＡＴＬＨＤＩ５０００彩色多谱勒超声诊断仪（美国）；轮转式切片机（英国ＳＨＡＮＤＯＮ公司）；。２００Ｃ冰箱（青岛海尔）；４０×４５型电热恒温箱（上海跃进医疗仪器一厂）；微波炉；光学显微镜（日本ＯＬＹＰＵＳ公司）；ＮＩＫＯＮ－ＵＦＸ—ＤＸ型照相型显微镜（日本ＯＬＹＰＵＳ公司）；病理图象分析仪（Ｑ５００ＭＣＬｅｉｃａ德国第一军医大学病理教研室提供）；２．１．２．２试剂磷酸缓冲溶液（ＰＢＳ）（自行配制）３％过氧化氢（Ｈ２０２）自行配制５％ＢＳＡ封闭液（武汉博士德生物公司）生物素化山羊抗兔ＩｇＧ（武汉博士德生物公司）即用型ＳＡＢＣ免疫组化染色试剂盒（武汉博士德生物公司）抗原修复液Ｉ（ＳＡＢＣ试剂合附送武汉博士德生物公司）１４硕士学位论文ＤＡＢ显色液（武汉博士德生物公司）苏木素（ＳＩＧＭＡ广州威佳生物公司分装）乙醇（南方医科大学试剂中心）二甲苯（南方医科大学试剂中心）中性树脂（北京鼎国生物试剂公司）Ｏ．０１Ｍ枸橼酸盐缓冲液（自行配制）多聚赖氨酸（ＳＩＧＭＡ广州威佳生物公司分装）兔抗人ＨＰＬ多克隆抗体（美国Ｌａｂｖｉｓｉｏｎ公司）细胞凋亡检测试剂盒（武汉博士德生物公司）０．０１ＭＴＢＳ（自行配制）磷酸盐缓冲液ＮａＣｌ８ｇＫＣｌ０．２０９Ｎａ２ＨＰ０４．２Ｈ２０１．５６９ＫＨ２Ｐ０４０．２０９三蒸水１０００ｍｌＯ．０１Ｍ枸橼盐缓冲溶液枸橼酸钠３９枸橼酸０．４９三蒸水１０００ｍｌ４％甲醛４０％１０ｍｌＯ．１ＭＰＢＳ９０ｍｌ０．０１ＭＴＢＳ（ＰＨ７．５）ＮａＣｌ８．５９２．１．２．３试剂配制胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘ＨＰＬ的及胎盘细胞凋亡的关系Ｔｒｉｓ１．２９纯乙酸０．４５—０．５ｍｌ（调ＰＨ值）三蒸水２．１．３研究方法２．１．３．１胎盘成熟度分级：由专人专机进行复核。分级标准同第一部分２．１．３．２胎盘病理改变的检测胎盘标本收集：胎盘娩出后，迅速检查胎盘形态，测量胎盘重量，测量新生儿体重。将胎盘分为带、中间带、边缘带，在三个部位各取胎盘绒毛板至底板全层约２Ｘ２Ｘ０．２埋。切片预先用多聚赖氨酸预处理，采用轮转式切片机对蜡块进行连续切片，片厚０．４ｕｍ，捞组织片于载玻片上，置６００Ｃ烤干备用。ＨＥ染色操作步骤石蜡切片脱腊至水二甲苯Ｉ二甲苯１Ｉ二甲苯ＩⅡ无水乙醇Ｉ无水乙醇ＩＩ９５％乙醇８５％乙醇７５％乙醇自来水蒸馏水染色Ｈａｒｒｉｓ苏木素液５ｍｉｎ２．５分钟２—５分钟２—５分钟１分钟１分钟１分钟１分钟１分钟２分钟２分钟ｃ１０００ｍｌｍ３的组织１块，经４％的溶液固定，常规石蜡包硕士学位论文自来水洗ｌｍｉｎ１％盐酸酒精分化２０秒自来水洗ｌｍｉｎ１％的稀氨水反蓝３０秒自来水洗３０秒梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片２．１．３．３胎盘ＨＰＬ表达的免疫组化实验实验步骤：①切片常规脱蜡至水②蒸馏水新鲜配置的３％Ｈ２０２，室温下ｌＯ分钟灭活过氧化物酶。蒸馏水洗３次。③抗原修复：将切片浸入Ｏ．０１Ｍ枸橼酸盐缓冲液，微波炉加热至沸腾后断电，间隔１０分钟，反复２次，冷却后０．１Ｍ的ＰＢＳ洗涤３次。④在切片上滴加抗原修复液Ｉ，在室温下静置１０分钟，０．１ＭＰＢＳ洗涤３次；⑤滴加正常山羊血清封闭液，室温下２０分钟，甩去多余的液体，不洗。⑥滴加１：２５０稀释的兔抗人ＨＰＬ多克隆抗体，３７０ｃ孵育１小时，０．１ＭＰＢＳ洗涤２分钟×３次；⑦滴加生物素化山羊抗兔培Ｇ，３７。Ｃ孵育２０分钟，０．１ＭＰＢＳ洗涤２分钟Ｘ３次；⑧滴加试剂ＳＡＢＣ，３７。Ｃ孵育２０分钟，Ｏ．１ＭＰＢＳ洗涤２分钟×３次；⑨ＤＡＢ显色：取ｌｍｌ蒸馏水，加ＤＡＢ显色试剂合中Ａ、Ｂ、Ｃ试剂各１滴，混匀后加至切片，室温下显色５．３０分钟，蒸馏水洗涤。⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察。免疫组化实验的对照设定选择一已确定为阳性组织块（试剂合内带有）与待检片同时染色，作为阳性对照；以ＰＢＳ代替一抗进行染色，作为阴性对照。１７胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘ＨＰＬ的及胎盘细胞凋亡的关系选择阳性对照、阴性对照均取得满意预期结果的上述实验条件，实验组和对照组同批按实验步骤进行。２．１．３．４胎盘组织切片的原位细胞凋亡实验实验步骤：①石蜡切片脱蜡至水②室温下用３％的一Ｈ２０２甲醇封闭内源过氧化物酶１０分性钟，蒸馏水洗涤３分钟×３次③标本片加０．０１ＭＴＢＳＩ：２００新鲜稀释ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ３７０Ｃ消化１．１５分钟，ＴＢＳ洗２分钟×３次：④标本片加标记缓冲液（ＬａｂｅｌｉｎｇＢｕｆｆｅｒ），２０ｕｌ／片，以保持切片湿润。每张切片取ＴｄＴ和ＤＩＧ—ｄ—ＵＴＰ各ｌｕｌ，加入１８ｕｌ标记缓冲液，混匀，小心滴在切片上。置湿盒中３７０Ｃ标记２小时。⑤ＴＢＳ洗２分钟×３次；⑥加封闭液５０ｕ１／片，室温３０分钟，甩掉封闭液，不洗；⑦用封闭液１：１００稀释生物素化抗地高辛抗体，５０ｕｌ／片加置标本上，置湿盒中，３７。Ｃ反应３０分钟，ＴＢＳ洗２分钟×３次；⑧用ＴＢＳ１：１００稀释ＳＡＢＣ，混匀后加置切片上，，置湿盒中，３７。Ｃ反应３０分钟，ＴＢＳ洗５分钟×４次；⑨ＤＡＢ显色：取ｌｍｌ蒸馏水，加ＤＡＢ显色试剂合中Ａ、Ｂ、Ｃ试剂各１滴，混匀后加至切片，室温下显色５．３０分钟，蒸馏水洗涤。⑩苏木素轻度复染。ＴＢＳ洗，蒸馏水洗。脱水、透明，封片。显微镜观察。胎盘细胞凋亡原位检测的对照设定选择一已确定的阳性组织块（试剂合内带有）与待检片同时染色，作为阳性对照；以ＰＢＳ代替标记液进行染色，作为阴性对照。选择阳性对照和阴性对照都取得满意预期结果的上述实验条件，实验组和对照组同按实验步骤进行。２．１．４研究结果的观察和判定１８硕士学位论文２．１．４．１胎盘病理图象观察及定量分析于光学显微镜下观察，参照刘伯宁等设计的胎盘体视学研究方法【１８】，每例标本观察３张不同部位的ＨＥ染色切片，每张切片随机观察底板区、中间区和绒毛板区三个区域，每个区域观察２个互不重叠的４５０倍放大视野，计数游离绒毛总数，及含有合体滋养细胞结节的绒毛，并计算出含有合体滋养细胞结节的绒毛与绒毛总数之比；同法观察１８个低倍视野（１００倍），记数含有纤维蛋白沉积和纤维素样坏死绒毛病灶数；采用德国生产的Ｑ５００ＭＣＬｅｉｃａ图象分析仪测量胎盘不同部位（带、中间带和边缘带）和不同层次（绒毛板区、中间区及底板区）内绒毛、绒毛间隙、绒毛内血管的体积密度，所测单位经测微尺校正无误。２．１．４．３细胞凋亡的判断经ＴＵＮＥＬ染色，细胞核内出现棕红色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞。用１０００倍高倍镜下观察５～１０个不同视野，共观察１０００～１５００个细胞核，计数ＴＵＮＥＬ染色阳性的细胞数和细胞总数，并计算出细胞凋亡指数（Ａｐｏｐｔｏｔｉｃｌｎｄｅｘ，Ａ）。ＡＩ是以每１００个细胞中的阳性细胞数表示（％）。２．１．４．４ＨＰＬ在胎盘中的表达情况经用免疫组化染色后，用低倍镜和高倍镜观察，阳性组织镜下结果清晰，胞浆有棕黄色颗粒沉着，染色明显高于背景，胞核蓝染。观察胎盘不同部位（带、中间带和边缘带）和不同层次（绒毛板区、中间区及底板区）内绒毛染色强度，在Ｌｅｉｃａ图像分析以上打开Ｑ５００ＭＣ软件，随机选取５０个清晰的终绒毛，以绒毛中心为原点作一坐标，分别测量绒毛膜与横、纵轴四个交点的灰度值，每例共测试２００个终绒毛上皮采样点，在所测试的每个绒毛内取其背景灰度值作为对照，记录测量数据。重复３—４步骤，依次测量记录；按照申洪教授建立的阳性单位测算公式，计算每张切片免疫组化显色反应强度的阳性单位值（ＰＵ值）１４３。４５１。２．１．５数据处理所有数据均用ＳＰＳＳｌｌ．０软件包处理，体视学的结构参数表示为均数±标准１９胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘ＨＰＬ的及胎盘细胞凋亡的关系差，凋亡指数和ＨＰＬ的半定量分析结果表示为中位数和四分位范围，参数采配对ｔ检验，非参数采用Ｗｉｌｃｏｘｏｎ检验，当Ｐ＜０．０５时认为具有统计学意义。２．２结果２．２．１胎盘重量、新生儿出生体重的比较胎盘提前老化组的胎盘重量与正常对照组相比无显著差异（Ｐ＞Ｏ．０５），胎盘提前老化组新生儿体重显著小于对照组（Ｐ＜Ｏ．００１），见表２—２。表２－２两纰胎盘重量和新生儿出生体重的比较Ｔａｂ２－２Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｐｌａｃｅｎｔａｌｗｅｉｇｈｔａｎｄｎｅｗｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ【Ｍｅｄｉａｎ（ｉｎｔｅｒｑｕａｒｔｉｌｅｒａｎｇｅ）】“Ｐ＜０．００１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２．２．２胎盘病理改变两组胎盘的绒毛均以成熟中间绒毛为主，分枝细小，密集。胎盘提前老化组中有１０例患者的胎盘有明显病理改变，发生率为５０％，其中２例为广泛绒毛纤维素样坏死，其他胎盘的病理改变主要为绒毛间隙和基底膜钙化及纤维化，绒毛纤维素样坏死，细胞滋养细胞增生，合体结节增加，而对照组只有４例发生明显的病理改变，占１６．７％，两组比较，差异具有显著性（Ｘ２＝３．９５６Ｐ＝０．０４７）。见图２—１Ａ、２—１Ｂ、２—１ｃ、２—１Ｄ、２一ｌＥ、２一ｌＦ、２—１Ｇ。１８个高倍视野中含合体结节的绒毛与绒毛数的比值，胎盘提前老化组显著高于对照组（尸＜ｎ０／）。１８个低倍视野中绒毛间质纤维蛋白沉着及绒毛纤维素样坏死灶在胎盘提前老化组中显著高于对照组（Ｐ＜口卿，见表２－２。硕士学位论文表２－３两组胎盘病理改变的比较１铀２－３Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｉｎｐｌａ∞ｎｈｓｂＨｗ钟ｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ＊Ｄａｔｅａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｓｍｅａｎ±ＳＤａｎｄｔｏｗｓａｍｐｌｅＺｔｅｓｔｉｓａｐｐｌｌｅｄ．＃Ｄａｔｅａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｓｍｅｄｉａｎ（ｉｎｔｅｒｑｕａｒｔｉｌｅｒａｎｇｅ）ａｎｄＷｉｌｃｏｘｏｎｔｅｓｔｉｓａｐｐｌｉｅｄ２．２．３计算机胎盘组织计量和图象分析计算机图象分析测定结果显示：胎盘提前老化组绒毛间隙的体积密度显著低于对照组（Ｐ＜Ｏ．００１），胎盘提前老化组终末绒毛内毛细血管的体积密度显著小于正常对照组ｆＰ＜０．０１），而终末绒毛的体积密度与正常对照组相比无显著差异（Ｐ＞０．０５）。见表２－４。表２－４计算机图象分析的参数的体积密度比较Ｔａｂ２·４Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｖｏｌｕｍｅｄｅｎｓｉｔｙｏｆｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｔｗｏｇｒ呷ｐｓ（Ｍ髑Ⅱ士ＳＤ）组别例数绒毛间隙的体积密度绒毛的体积密度绒毛血管体积密度研究组１５３８．９８±６．３９”对照组１５５５．４１士６．９５＋。Ｐ＜０．００１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２．２．４两组产妇胎盘内ＨＰＬ的表达情况本实验显示，胎盘泌乳素主要表达在绒毛的合体滋养细胞，计算机图文分析显示，胎盘提前老化组染色强度与对照组相比，无显著性差异（Ｐ＞Ｄ＿∞ｊ，见表２—２。２．２．５两组产妇胎盘滋养细胞凋亡情况经ＨＥ染色光镜下观察，可见在绒毛滋养层及绒毛间质中有散在凋亡细胞，凋亡细胞核固缩呈兰黑色，凋亡主要是滋养细胞，少数是绒毛间质细胞，ＴＵＮＥＬ胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘ＨＰＬ的及胎盘细胞凋亡的关系染色可见凋亡细胞核染成棕黄色颗粒，染色质固缩，聚集在核膜周围的一侧，并呈新月状或斑块状，胞浆浓缩，凋亡细胞周围常有纤维蛋白沉积和钙化，见图２－２Ａ，２－２Ｂ。提前老化组胎盘内凋亡指数显著高于对照组（Ｐ＜０．００１），见表２．４。表２－５两组孕妇胎盘ＨＰＬ的表达及滋养细胞凋亡情况的比较Ｔａｂ２．５ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＥｊｉｎｍｏｔｈｅｒｂｌｏｏｄａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＰＬａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｅｘｉｎｐｌａｃｅｎｔａｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓ【ｍｅｄｉａｎ（ｉｎｔｅｒｑｕａｒｔｉｌｅｒａｎｇｅ）】＋’Ｐ＜０．００１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２．３讨论２．３．１提前老化胎盘的病理改变及其意义胎盘病变造成胎盘功能改变常与胎盘局部缺血缺氧有关。Ｆｏｘ“”等认为，胎盘在缺血缺氧的情况下，可出现合体细胞局灶性坏死，临近部位细胞滋养细胞增生修复，血管增生，胎盘的这种对缺氧的反应，可使胎盘实质增加，在一定程度上对胎盘功能损害耿到代偿的作用，但这种反应同时也可使的基底膜增厚，使母胎之间物质交换效益下降，加重绒毛缺氧，最终导致胎盘功能减退。严重缺氧可直接造成绒毛坏死和纤维化，造成胎盘功能急剧下降。本研究显示，提前老化组和正常对照组的胎盘绒毛均以成熟中间绒毛为主，两组的终末绒毛体积无显著差异，说明两组绒毛的分化和发育正常。但提前老化组胎盘５０％出现了病理改变，而对照组只有１６．７％出现了改变，两者比较，差异具有显著性（ｘ２＝３．９５６Ｐ：Ｏ．０４７），并且提前老化组胎盘病理改变程度明显重于正常对照组，由此可见，胎盘提前老化胎盘发生了病理损害。胎盘提前老化组绒毛间隙和基底膜纤维蛋白沉积和绒毛纤维蛋白样坏死病硕士学位论文灶、含合体结节绒毛的比例显著高于正常对照组，提示提前老化组的胎盘发生了缺血缺氧性损害。绒毛缺血缺氧不仅可造成绒毛滋养细胞受损，而且可以损伤血管内皮细胞，血管内皮细胞受损可导致一系列血管活性物质产生失调，从而导致一系列病情轻重不一的妊娠并发症如妊高征、ＦＧＲ等的发生，这可能是胎盘提前钙化造成妊娠结局不良的主要原因。但胎盘钙化是造成胎盘缺氧的原因还是结果尚不清楚。胎盘的大体形态测量显示超声提前钙化组胎盘重量与正常对照组相比无显著差异（Ｐ＞０．０５），这可能与细胞滋养细胞增生产生的自身代偿有关。２．３．２提前老化胎盘的功能结构改变与围生期发病率的关系绒毛间隙和绒毛血管是母胎之间进行气体和物质交换的场所。绒毛间隙是一种没有内皮的复杂的立体网状管腔系统，滋养层细胞构成了它的管壁，母血在其中循环。母体血液在母体动脉压推动下以每分钟５００ｍｌ的流速流入绒毛间隙，在绒毛的外层微绒毛处与绒毛血管内的胎儿血液进行物质交换后，通过基板的静脉窦返回。绒毛间隙和绒毛血管的改变，可影响母胎之间的物质交换，导致围生期发病率增加。绒毛间隙内纤维素沉积可导致流经绒毛间隙的母体血液减少，母胎血液交换的弥散距离加大，交换效益降低。绒毛血管减少可导致胎儿进行气体交换的血液减少。本研究采用系统取材，随机抽样的原则，用图象分析仪对提前老化胎盘及正常足月胎盘底板区、中间区及绒毛板区的绒毛的多项生理参数进行测试，结果显示：胎盘提前老化组胎盘的绒毛间隙体积密度及绒毛血管的体积密度显著小于对照组，两组胎盘的绒毛体积密度无显著差异（Ｐ＞０．０５）提示胎盘提前老化组胎盘功能组织结构受到损害，有效功能组织结构减少，使胎盘的气体交换及物质运输的能力明显降低，造成围生期发病率显著增加。２．３．３胎盘提前老化和胎盘功能的关系ｔｔＰＬ是胎盘合体滋养细胞合成分泌的一种单链多肽激素，具有多种生理功能，胎盘提前老化与胎盘病理改变、胎盘ＨＰＬ的及胎盘细胞凋亡的关系是通过母体促进胎儿生长发育的重要“代谢调节因子”。本研究显示，两组胎盘ＨＰＬ的免疫组化显色定量无显著性差异（Ｐ＞０．０５），考虑其原因为：１）本研究样本量偏小，可能不足以反应两者之间的差异；２）提前老化胎盘的ＨＰＬ无明显下降可能是胎盘对缺血缺氧性损害发生的一种保护胎儿的代偿性反应的结果，从提前老化胎盘的ＨＰＬ免疫组化的切片也观察到绒毛染色深浅不一，有明显的淡染区。崔世红“４１等曾报道子痫前期孕妇的母体血清ＨＰＬ浓度无显著差异，与我们的结果相似。但要证实这种推测尚需要更大样本的资料。２．３．４胎盘提前老化和细胞凋亡的关系胎盘的生长发育是一个动态过程，为了更好地适应胎儿发育的需要，胎盘通过蜕膜细胞和滋养细胞的凋亡不断地进行组织结构的改进，对实现妊娠期胎盘功能的完善具有十分重要的意义，但是非生理性细胞凋亡增加，必然引起胎盘发育和功能障碍，最终发生胎盘功能不全，导致临床上常见到的ＦＧＲ、胎儿窘迫、死胎，死产等妊娠并发症的发生。己有研究显示，细胞凋亡是生理和病理钙化的基本机制之一，细胞凋亡时发生钙磷平衡失调，使细胞膜的降解产物成为钙化的孵化地，凋亡细胞释放的凋亡小体成为钙化的核心“…１。胎盘的细胞凋亡常发生于胎盘的纤维沉着处“”。胎盘提前钙化是胎盘提前老化的主要表现。本研究显示，胎盘提前老化组细胞凋亡指数显著高于正常对照组（Ｐ＜Ｏ．０１），提示细胞过度凋亡是胎盘提前老化的发病机制之一。但引起细胞凋亡的始动因素尚不清楚。ＴＵＮＥＬ染色显示，胎盘中的凋亡细胞以合体滋养细胞为主。合体滋养细胞是胎盘的主要功能细胞，定位在胎盘绒毛的表层，是母胎物质交换的主要部位，能够通过细胞形态的改变调节母胎之间的分子交换，其凋亡增加一方面可造成合体滋养细胞不连续处增加，促进母胎之间物质交换，另一方面，也将影响胎盘的分泌功能。硕士学位论文第三章前列环素对体外培养滋养细胞细胞凋亡及分化的影响胎盘发挥正常功能依赖于细胞滋养细胞融合形成合体滋养细胞，合体滋养细胞直接与母血接触，调节母胎之间营养物质和气体交换。妊娠并发症ＦＧＲ、先兆子痫均与母体血液循环中ＰＧｌ２／ＴＸＡ２的比值下降，主要是ＰＧｌ２水平降低有关。最近的研究显示，前列腺素不仅能调节血管的反应性，而且能调节多种细胞的增殖、分化和凋亡。血栓素可促进体外培养滋养细胞的凋亡，抑制其分化。前列环素对多种细胞有保护作用，但其对滋养细胞的影响尚不清楚。胎盘提前老化的超声征象与ＦＧＲ、先兆子痫有关。本研究第二部分显示胎盘提前老化的超声征象与胎盘滋养细胞凋亡增加有关，因此，我们推测，前列环素的降低可能通过影响滋养细胞的分化和凋亡在这种提前老化现象中发挥了重要作用。为了证实这种推测，本部分研究检测了前列腺素ＰＧｌ２对体外培养滋养细胞的ＨＰＬ的分泌和细胞凋亡的影响。３．１材料和方法３．１．１材料３．１．１．１主要试剂ＮａＨＣ０３、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰ０４．１２Ｉ－１２０、ＫＨ２Ｐ０４、ＮａＨ２Ｐ０４．２Ｈ２０、乙醇、双氧水、Ｔｒ／ｓ碱、３４．４０％的甲醛，多聚甲醛均为国产分析纯，由第一军医大学试剂中心提供。鼠抗人Ｃｙｔｏｋｅｒｔｉｎ７单克隆抗体（北京中杉金桥公司）；即用型ＳＡＢＣ免疫组化染色试剂盒（购自博士德公司）：原位细胞凋亡检测试剂盒（购于武汉博士德公司１；碘化已锭（ＩＰ）（北京鼎国公司）；细胞培养试剂：ＤＭＥＭ培养基（Ｇｉｂｃｏ公司），胎牛血清（杭州四季清公司）；胰蛋白酶（吉诺公司）；ＤＮａｓｅＩ（ＴａＫａＲａ大连公司）：苏木素染液（Ｍａｙｏｒ液）（Ｓｉｇｍａ公司）；ＨＰＬ放射免疫试剂盒（天前列环素对体外培养滋养细胞细胞凋亡及分化的影响滓协和医药公司）；前列环素（Ｉｌｏｐｒｏｓｔ）（美国Ｃａｙｍａｎ公司）。主要试剂的配制ＤＭＥＭ培养基的配制：取ＤＭＥＭ于粉培养基一袋（配１Ｌ），加７００ｍｌ新鲜三蒸水溶解，磁力搅拌４小时，再加另外溶解配制的ＮａＨＣ０３２．７５９，加三蒸水定容至１０００ｍｌ，于４０Ｃ冰箱中静置３小时，／ＪＨ，，ｋｌｍｌ含青链霉素各１０万的青链霉素液ｌｍｌ，以一次性过滤器除菌，分装成１００ｍｌ／瓶，一２００Ｃ冰箱储存，分别抽取过滤初期、中期、晚期过滤后的培养基４ｍｌ，于３７０Ｃ、５％Ｃ０２培养箱中培养７—１０天，观察有无细菌生长。胎牛血清的灭活：解冻冰冻的胎牛血清，调整恒温水浴温度恒定于５６０Ｃ，取与胎牛血清同样大小的空瓶，其中加入与胎牛血清体积相同温度相同的水，将两瓶同时置于水浴箱中，待对照瓶升至５６０Ｃ，定时３０分钟灭活。灭活３０分钟后的胎牛血清抽做无菌试验，并分装成５ｍ瓶，于一２００Ｃ冰箱中冻存备用。青链霉素液的配制，取１０ｍｌ三蒸水溶解１００万单位的硫酸链霉素，再用８ｍｌ链霉素溶液溶解８０万单位青霉素粉，配成１０万单位／ｍｌ的青链霉素母液。Ｄ—Ｈａｎｋｓ液的配制：取ＮａＣｌ８．ＯＯｇ、ＫＣｌ０．４．ｇ、ＮａＨＣ０３０．３５９、Ｎａ２ＨＰ０４．１２Ｈ２０Ｏ．１２０６９、ＫＨ２Ｐ０４０．０６９，加三蒸水配成１Ｌ，过滤除菌，分装成２５０ｍＹ瓶，－４０Ｃ冰箱储存。ＰＢＳ液的配制：取ＮａＣｌ８．０（０、ＫＣｌＯ．２９、Ｎａ２ＨＰ０４．２Ｈ２０１．５６ｇ，ＫＨ２Ｐ０４０．２０９、ＮａＨＣ０３．０．３５ｇ，加三蒸水配成１Ｌ，过滤除菌，分装成２５０ｍｌ／瓶，．４０Ｃ冰箱储存。０．１ＭＴＢＳ的配制：１Ｌ三蒸水中加入ＮａＣｌ８．５９，Ｔｒｉｓ１．２９、纯乙酸０．４５—０．５ｍｌ调节ＰＨ值至７．５。３．１．１．３主要仪器电子天平（ＦＡｌ００４上海精科）Ｃ０２培养箱（德国ｎｅｒａｅｕｓＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）；倒置显微镜ＩＭＴ－２（同本ＯＬＭＰＵＳ）硕士学位论文超净工作台（苏州净化仪器公司）低速离心机（ＬＤ４．２，北京医用离心机厂）血细胞计数器（上海市求精生化试剂仪器公司）流式细胞仪（第一军医大学中心实验室提供）Ｙ计数器（上海核福仪器公司）高速台式离心机（上海安亭仪器公司）低速离心机（北京医用离心机厂）冰箱（海尔）离心管一次性２５ＣＭ２培养瓶（Ｃｏｍｉｎｇ公司）正常足月剖宫产胎盘组织，由南方医科大学南方医院妇产科提供。胎盘娩出后立即取材，剪去蜕膜层和绒毛板，取中间层胎盘组织约６０９，在的血管，将剪下的组织转移到青霉素瓶中，细剪３０分钟，将胎盘组织剪成ｌｍｍ３Ｉ消化１小时，至云雾样组织消散，静置后有组织沉淀，加将预消化后的组织及液体经２００目金属筛过滤，去除滤液，取组织匀浆，３．１．１．４实验标本３．１．２方法３．１．２．１原代滋养细胞培养无菌条件下置冰浴ＤＭＥＭ液中送回实验室。将胎盘组织转移到５０ｍｌ的白蛋白瓶中，粗剪几下，以Ｄ—Ｈａｎｋｓ液冲洗４．６次，吸管吸去洗液。在小培养皿中加ＤＭＥＭ液，将胎盘组织置培养皿中，用眼科剪剪下细小绒毛，去除中轴的绒毛碎片。用吸管将剪碎的胎盘组织转移到５０ｍｌ离心管中，加Ｄ．Ｈａｎｋｓ液３０ｍｌ，静置３０分钟，去除上层液体。５００×ｇ离心５分钟…吸去上清，加入０．１２５％的胰蛋白酶１５ｍｌ，３７０Ｃ水浴消化３０分钟，至组织呈云雾样漂散在液体中，加等量０．４ｍｇ／ｍｌ的ＤＮａｓｅ入ＤＭＥＭ终止消化。前列环素对体外培养滋养细胞细胞凋亡及分化的影响分别接种在置有玻片的１２孔培养板和２５ｃｍ２培养瓶中。每次接种１０瓶和１块板。接种前用完全培养基湿润培养瓶及玻片，吸出多余的培养基，将ｌｍｌ组织匀浆均匀铺于瓶底，轻轻翻转培养瓶使细胞面朝上，从瓶侧面加入２ｍｌ完全培养基。培养板内则每孔加Ｏ．３ｍｌ组织匀浆，不加培养基。置３７０Ｃ、５％Ｃ０２培养箱中培养，２４小时后缓慢翻转培养瓶，培养板内加含２０％胎牛血清ＤＭＥＭ，０．５ｍｌ／孔。培养第３日见有圆形和三角型的细胞爬出。培养第４日首次换液，之后每１．２日换液１次，培养６．７天细胞可爬满瓶底。３．１．２．２．原代胎盘滋养细胞的鉴定从培养板中取出１．２块玻片，ＰＢＳ漂洗去残留组织块，加入４％的甲醛室温下固定２０分钟，蒸馏水洗涤３次；蒸馏水配制的３％的Ｈ２０２，室温下浸泡３０分钟，去除内源性过氧化物酶，蒸馏水漂洗３次，每次５分钟；滴加正常山羊封闭液，室温下放置２０分钟，去除多余液体；滴加鼠抗人Ｃｙｔｏｋｅｒｔｉｎ７单克隆抗体，置湿盒中，３７０Ｃ孵育１小时，ＰＢＳ洗２分钟×３次；滴加生物素化山羊抗小鼠ＩｇＧ，３７０Ｃ２０分钟，ＰＢＳ洗２分钟×３次；滴加试剂ＳＡＢＣ，３７０Ｃ２０分钟，ＰＢＳ洗２分钟×３次。室温下ＤＡＢ显色５．３０分钟，镜下控制反应时间。苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。３．１．２．３细胞的处理原代培养第６天始给予前列腺素刺激培养，分为４组。分别为：空白对照组及３个浓度的ＰＧｌ２组。培养基中所含有的ＰＧｌ２的浓度分别是０ｕＭ／Ｌ、１ｕＭ／Ｌ、３ｕＭ／Ｌ、１０ｕＭ／Ｌ，每２４小时更换培养液１次，收集培养液，储存在－－２００Ｃ冰箱保存待检。４８小时后收集细胞行流式细胞仪检测细胞凋亡。培养板细胞进行ＴＵＮＥＬ染色。３．１．２．３．１倒置显微镜下观察细胞形态加入处理因素后，每日在倒置显微镜下观察细胞形态的变化，并摄像记录。３．１．２．３．２台盼兰染色及细胞记数加入处理因素４８小时后，去除培养液，Ｄ—Ｈａｎｋｓ液洗涤细胞３次，以０．２５％硕士学位论文的胰蛋白酶消化，见细胞变圆，细胞间隙变大即进行吹打，使细胞自瓶壁脱落，加入完全培养基，使胰酶失活，５００．１０００转／分离心１０分钟，用ＤＭＥＭ重悬细胞，用Ｏ．４％台盼蓝染色，在血球计数仪上计数活细胞数及细胞总数。活细胞晶莹透明，死细胞染成兰色，细胞活力表示为活细胞数／细胞总数之比。３．１．２．３．３流式细胞仪检测细胞凋亡将消化后的细胞离心去ＰＢＳ，加入冰预冷的７０％的乙醇固定，４０Ｃ，１—２４小时；离心弃去固定液，３ｍｌＰＢＳ重悬５分钟；２００目筛网过滤１次，５００—１０００ｒ／ｍｉｎ离心５分钟，弃ＰＢＳ；用ｌｍｌＰＩ染液，４０ｃ避光３０分钟；流式细胞仪检测：用氩离子激发荧光，激发光波长为４８８ｎｍ，发射光波波长６３０ｎｍ，产生红色荧光，分析ＰＩ荧光强度的直方图。３．１．２．３．４培养液中ＨＰＬ放射免疫测按试剂盒说明，取样本及标准品各５０ｕ１分别加入测量管中，依次加入１２讣ＨＰＬ、ＨＰＬ抗体，３７０Ｃ水浴３０分钟，加入分离液，２５００９低温离心５分钟，去上清，沉淀物上机记数。ｙ记数仪由南方医院核医学科提供。用ＳＰＳＳ统计软件包处理标准品数据，得出计算样本的回归方程。（四）统计学处理数据以ＳＰＳＳｌｌ．０软件处理，表示为均数±标准差（ｎ＝４）并进行方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。３．１结果胎盘组织原代培养第三天，有细胞从周围组织爬出，初为类圆形，４—５天大量繁殖，核圆形，较大，并逐渐伸展为三角形或梭形，胞浆内含有丰富颗粒（图３．１Ａ、３．１Ｂ、３－１Ｃ、）。培养７天后，合体滋养细胞增多并互相融合，培养８天后见部分细胞体积缩小，核固缩。培养纯度用角蛋白７（ｃ＆７）免疫组化染色鉴定，结果阳性染色细胞占９５％以上，表明培养细胞纯度超过９５％，可用于实验（见图３．２）。本实验所用细胞为原代培养第６天的细胞。前列环素对体外培养滋养细胞细胞凋亡及分化的影响３．３．１ＰＧｌ２刺激培养后细胞活力和细胞凋亡倒置显微镜下观察，ＰＧｌ２培养组细胞融合增多，呈片状增长（见附图３—３Ａ，，３—３Ｂ）。台盼兰染色观察，在不同浓度ＰＧｌ２中培养４８小时后，各组滋养细胞活力具有显著差异性（Ｐ＜Ｏ．００１），随浓度增加，细胞活力增加，见图３－４。细胞活力１１ｉ．ｉｌｌ—ＰＧｌ２浓度表３－４不同浓度ＰＧｌ２对体外培养滋养细胞活力的影响Ｂ９３·３．ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｔｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＰＧｌ２∞ｌｌｖｉｌ唧ａｅｓｓｏｆｈａｍａｎｔｒｏｐｈｏｈｌａｓｌｓ通过流式细胞仪计数来检测滋养细胞凋亡指数，对凋亡细胞进行定量。在ＤＮＡ直方图上，凋亡细胞峰（亚Ｇ１峰）出现在二倍体峰（Ｇ１峰）的左侧。将亚Ｇ１峰面积转换为细胞凋亡指数。与空白对照组相比，在３ｕＭｌ／Ｌ和１０ｕＭ／ＬＰＧｌ２中培养４８小时后滋养细胞凋亡指数显著降ｆＬ￡［（３０．６３±１．０５）、（２６．８４±１．６６）ＶＳ（３２．９０４－１．７３），Ｐ＜０．００１］；在ｌｕＭ／ＬＰＧｌ２中培养４８小时后，滋养细胞凋亡指数与对照组比较，差异无显著性［（３１．９８±１．２０）ｖｓ（３２．９０＋１．７３），Ｐ＞０．０５】。图３．５显示了４次实验中４个典型的流式细胞仪检测结果。Ｃｊ叫亡善ｏｏｏ００ｌ０２４Ｐｔｐ５∞对照组（３－５Ｃ）３ｕＭ／ＬＰＧｌ２硕士学位论文一嗣浚～够越器懈孓端。蚺疆噌Ｈ■～｝－鞠０－５ｎ）ｌｕＭ／ＬＰＣｄ２（３－５Ｄ）１０ｕＭ／ＬＰＧｌ２图３－５流式细胞仪分析不同浓度ＰＧｌ２对外培养滋养细胞凋亡指数的影响Ｆｉ９３—５ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＰＧｌ２ｗｅｒｅａｄｄｅｄａｆｔｅｒｔｒｏｐｈｏｈｌａｓｔｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ６ｄａｙｓ－Ｄａｔａｓｈｏｗｎａｒｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｏｆｆｏｕｒｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｄｕｐｌｉｃａｔｅ．通过ＴＵＮＥＬ染色对凋亡细胞断裂ＤＮＡ进行原位标记，显示凋亡细胞的形态。不同浓度ＰＧｌ２刺激培养后滋养细胞凋亡如图３—３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ显示，凋亡细胞形态皱缩，体积缩小，细胞核固缩，被染成棕褐色。ＰＧｌ２刺激培养组滋养细胞凋亡数明显小于对照组，且随ＰＧｌ２浓度增加，凋亡细胞减少。ｆ３．３Ａ）对照组（３—３Ｂ）ｌｕＭ／ＬＰＧｌ２（３—３Ｃ）３ｕＭ／ＬＰＧｌ２（３－３Ｄ）ｌＯｕＭ／ＬＰＧｌ２图３－３ＴＵＮＥＬ染色分析不同浓度ＰＧＩｔ对原代培养滋养细胞凋亡的影响Ｆｉ９３－３ＴＵＮＥＬａｎａｔｙｓｉｓｏｆｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｃａｎｔａｔｉｏｎｓｏｆＰＧｌ２ＯＨｔｒｏｐｈｂｌａｓｔｉｃａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｃａｎｔａｔｉｏｎＰＧｌ２ｗｅｒｅａｄｄｅｄａｆｔｅｒｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｆｏｕ６ｄａｙｓ．Ｄａｔａｓｈｏｗｎａｒｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｏｆｆｏｕｒｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｄｕｐｌｉｃａｔｅａｎｄａｒｒｏｗｓｉｎｄｉｃａｔｅａｐｏｐｔｏｆｉｃｃｅｌｌｓ３１前列环素对体外培养滋养细胞细胞凋亡及分化的影响３．３．２ＰＧｌ２对滋养细胞分泌功能的影响本实验表明，胎盘滋养细胞在不同前列腺素的刺激培养下，ＨＰＬ的分泌呈现不同水平。与对照组相比，ＰＧｌ２能显著促进滋养细胞释放ＨＰＬ，并且呈浓度依赖关系，在１０ｕＭ浓度时作用最强。见图表３—４，３—５。图３－４不同剂量ＰＧｌ２对滋养细胞ＨＰＬ分泌功能的影响Ｔａｂ．３－４ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｃｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＰＧｌ２ｏｎＨＰＬｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙｔｒｏｐｈｌａｓｔｓ·Ｐ＜Ｏ，０５ｖｓ０ｕＭ／Ｌ组（对照组）＃Ｐ＜０．００１ｖｓＯｕＭ／Ｌ图３—５不同浓度的ＰＧｌ２对原代培养足月滋养细胞ＨＰＬ分泌水平的影响Ｆｉ９３－５ｌｅｖｅｌｏｆｈＣＧｉｎｍｅｄｉｕｍｆｒｏｍｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｖｅｈｉｃｌｅ（ｃｏｎｔｒ０１）ｏｒｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＰＧｌ２．硕士学位论文３．３讨论前列环素是迄今为止发现的能在所有血管组织中都能检测到的一种花生四烯酸产物，具有强烈的舒张血管作用，同时也是最强的血小板聚集抑制物，不但能抑制血小板聚集，而且能使聚集的血小板分散。近来的研究显示，前列环素似乎还有细胞保护的作用，它不仅能保护细胞免于坏死，而且能发挥抗凋亡的作用｛３５３２１。Ｒｏｂｅｒｔ０１３３Ｊ等报道前列环素能通过调节细胞内腺苷水平的精确平衡而阻止一氧化氮介导的巨核细胞的凋亡，Ｎ．ＳｈａｎｅＣｕｔｌｅｒ［３４】报道能产生大量ＰＧｌ２的结肠癌细胞株与不能产生ＰＧｌ２的结肠癌细胞株ＨＣＡ－７共培养，能显著抑制丁酸盐诱导的ＨＣＡ一７细胞的凋亡。但前列环素对胎盘滋养细胞的作用尚不清楚。通过使用前列环素稳定的模拟物伊洛前列腺素（Ｉｌｏｐｒｏｓｔ）刺激原代培养第６天的足月胎盘的滋养细胞，我们发现，培养４８小时后，滋养细胞融合增加，流氏细胞仪检测显示其细胞凋亡指数显著小于空白对照组，ＴＵＮＥＬ染色也显示阳性细胞核减少。提示外源性前列环素能够抑制体外培养的滋养细胞的凋亡。本实验还显示，伊洛前列腺素刺激培养后２４小时和４８小时后，滋养细胞分泌的ＨＰＬ显著高于对照组，提示前列环素能促进体外培养滋养细胞的融合，促进其生化功能。滋养细胞分化和凋亡的的机制目前尚不是很清楚。可能与生长因子、细胞因子、ＨＣＧ等有关。近来的研究显示前列腺素作为信号分子，能调节多种细胞的增生、分化和凋亡，前列腺素ＴＸＡ２能抑制体外培养滋养细胞的分化，促进其细胞凋亡。前列腺素是一巨大的花生四烯酸产物家族，各种成分的作用相互联系、相互制约，通过不同代谢酶及受体的表达，形成一个复杂而又精细的调节网络。已有大量研究证实，胎盘功能不全常与环氧化酶和前列腺素合成酶的表达异常相关，在先兆子痫、ＦＧＲ等妊娠并发症出现临床症状前２月，就可在孕妇体内检测到血栓素和前列环素水平失调，主要是前列环素下降。虽然阿司匹林在妊高征预防已显示有利作用，这种作用可能归结于对环氧化酶的不可逆抑制。但仍有相当一部份此类妊娠并发症阿司匹林预防无效【５１】。本试验显示了前列环素对足月滋养细胞具有保护作用，结合其扩血管效应和抗血小板聚集作用，前列环素制剂在产科应用有着良好的前景。但其安全性及给药方法及剂量尚有待于进一步研究。附图与说明图２－１Ａ提前老化胎盘的病理改变一一绒毛间隙纤维素沉着（ＨＥ，×１００）Ｆｉｇ２—１ＡＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｇｉｎｇｃｈａｎｇｅ图２－１Ｂ提前老化胎盘的病理改变～绒毛问隙变窄、细胞滋养细胞增生、ｉｎａ合体结节增加（ＨＥ，×１００）Ｆｉｇ２·１ＢｐｒｅｍａｔｕｒｅＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓａｇｍｇｐｌａｃｅｎｔａ：ｉｎａｐｒｅｍａｔｕｒｅｐｅｒｖｉｌｌｏｕｓｐｌａｃｅｎｔａ：ｍａｓｓｉｖｅｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｓｅｃｏｓｉｎ．ＯｒｉｇｉｎａｌｆｉｂｒｉｎａｎｄｎａｌＴＯＵ（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｉｎｔｅｒｖｉｌｌｏｕｓｓｐａｃｅ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｖｉｌｌｏｕｓｃｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓａｎｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｖｉｌｌｏｕｓｓｙｎｃｙｔｉａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎＸｌＯＯ）ｋｎｏｔｓ．（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｃｏｓｉｎ．Ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×１００）图２－１Ｃ提前老化的胎盘的病理改变…－胎盘梗死（ＨＥ，×１００）Ｆｉｇ２·１ＣＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｇｉｎｇｃｈａｎｇｅｉｎａ图２－１Ｄ提前老化胎盘的病理改变…一绒毛间质纤维增生Ｆｉ９２—１ＤＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｉｎｓｐｒｅｍａｔｕｒｅｉｎｆａｒｃｔｓＯｒｉｇｉｎａｌｐｌａｃｅｎｔａ：ｍａｓｓｉｖｅｅｃｏｓｉｎ．ｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａ：ｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎａｎｄｖｉｌｌｏｕｓｓｔｒｏｍａｍｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎＸ１００）ｍｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｅｃｏｓｉｎ．ＯｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎＸ１００、矮士学位论炙图２．１Ｅ对照组胎盘的组织结构（ＨＥ×圈２．１Ｆ掇前老化胎盘的病珊改变…合４５０）体结节增加（髓×４５０）Ｆｉ９２－１ＥＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎａＦｉ９２－１ＦＰａｔｈｏｌｉｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｉｎｐｌａｃｅｎｔａｆｒｏｍａｃｏｎｔｒｏｌ：ｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｓ：ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｖａｓｃｕｌｏ＊ｓｙｎｃｙｔｉａｌｍｅｍｂｅｒａｎｄｖｉｌｌｏｕｓｓｙｎｃｙｔｉａｌｋｎｏｔｓ（ＨｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｃａｐｉＵａｒｉｅｓ（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｃｏｓｉｎ，ｅｃｏｓｉｎ．Ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×４５∞Ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｅｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×４５ｍ匿２－１Ｇ对照组骀焘貔免镜馕嚣甏２－２Ａ攘羲老德胎盘蠹磷亡缅魏懿（ＨＥ．×１００）ＴＵＮＥＬ染色（原放大倍数×４５０）Ｆｉ９２—１ＧＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎＦｉｇ２－３ＡＴＵＮＥＬｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｌａｃｅｎｔａｆｒｏｍａｃｏｎｔｒｏｌ：ｈｉｇｈｌｙｕｎｃｌｅｉｉｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａｃａｐｉｌｌａｆｉｅｄａｎｄｓｍａｌｌｅｒｔｅｒｍｉｒｔａｌｖｉｉｌｉ（ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×４５０））（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｃｏｓｉｎ。Ｏ堍ｉｎａｌｍａａ，ｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×１０ｍ附图与说明图２－２Ｂ提前老化胎盘内凋亡细胞的ＴＵＮＥＬ染色（原放大倍数ｘ１０００）Ｆｉｇ２－２ＢＴＵＮＥＬｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒａｐｏｐｔｏｔｉｃｕｎｃｌｅｉｉｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａ（Ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×１０００））图２－３Ａ提前老化胎盘的ＨＰＬ的免疫组亿染色Ｆｉｇ２－３ＡＩｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＨＰＬｉｎｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａ（ｏｄｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×４５０）１图２－２Ｃ对照组胎盘内凋亡细胞的ＴＵＮＥＬ染色（原放大倍数×１０００）Ｆｉｇ２－２ＣＴＵＮＥＬｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒａｐｏｐｔｏｔｉｃｕｎｃｌｅｉ（ｍｏｗ）ｉｎｐｌａｃｅｎｔａｆｒｏｍａｃｏｎｔｒ０１．（ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×１０００））图２－３Ｂ对照组胎盘内的ＨＰＬ免疫组化染色Ｆｉｇ２－３ＢＩｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＨＰＬｉｎｐｌａｃｅｎｔａｆｒｏｍａｃｏｎｔｒｏｌ（ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×４５０硕士学位论文图３－１Ａ原代培养第４天的滋养细胞（原放大倍数×６６）Ｆｉｇ３－１ＡＰｒｉｍａｒｙｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ４ｄａｙｓ．（０ｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×３３）图３．１Ｃ原代培养第６天的滋养细胞Ｆｉ９３－１ＣＰｒｉｍａｒｙｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ４ｄａｙｓ．（ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×３３）３７图３－１Ｂ原代培养第６天的滋养细胞Ｆｉ９３—１ＢＰｒｉｍａｒｙｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ４ｄａｙｓ．（ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×６６、图３－２Ａ培养滋养细胞的ＣＫ７免疫组化鉴定（原放大倍数×１００）Ｆｉ９３—２ＢＩｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｄｅｌｉｔ试ｃａｔｉｏｎｆｏｒｃｕｌｔｕｒｅｄｔｈｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｗｉｔｈｍｏｎｌｃｌｏｎａｌａｎｔｉｉｂｏｄｉｅｓｔｏＣＫ７ｒＯｒｉｇｉｎａｌｍａｍａｉｆｉｃａｔｉｏｎ×１００、附图与说明图３－３Ａ倒置显微镜下ＰＧｈ（１０ｕＭ）４８小时后的滋养细胞的形态ｆ原放大倍数×１００）Ｆｉｇ３－３ＡＴｈｅｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｔｈｅｐｉｃｔｕｒｅｏｆｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ４８ｈｉｎｆｏｒｍｅｄｂｙ４８ｈｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆＰＧＩｚ（１０ｕＭ）．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｙｎｃｙｔｉａｈａｖｅｉｎｔｅｒｍｉｘｅｄｗｉｔｈｃｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓ．（Ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×６６）图３－３Ａ倒置显微镜下缺乏ＰＧｈ处理的对照组的滋养细胞的图片（原放大倍数×６６）Ｆｉｇ３－３ＢＴｈｅｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｐｉｃｔｕｒｅｏｆｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ４８ｈｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｆＰＧｌ２Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｔｅｄｃｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｄｏｍｉｎａｔｅ．（ｏｒｉｇｉｎａｌｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ×６６１３８硕士学位论文全文小结胎盘的正常发育是妊娠得以维持和胎儿赖以生存的保证。胎盘的发育受到严格的时间和空间的，并受母胎双方的影响。胎盘发育的任何阶段和任何环节发生异常，都必将对妊娠产生不利影响。本研究通过分析胎盘提前老化的与妊娠结局的关系，对具有该类孕妇的胎盘功能和胎盘病理改变进行研究，监测脐血流和母血Ｅ３浓度的变化，对其病理改变和功能结构进行定量分析，采用免疫组化的方法检测胎盘内胎盘泌乳素的表达情况，采用ＴＵＮＥＬ染色分析其胎盘内细胞凋亡情况。并根据ＦＧＲ、先兆子痫等妊娠并发症等具有前列腺素水平失调，尤其是前列环素失调等特点，研究了前列环素对体外培养足月滋养细胞分化和凋亡的影响，以探讨前列环素降低在胎盘提前老化发病机制中的作用。通过对以上实验结果进行统计分析，得出如下结论：１．胎盘提前老化的超声征象与不良妊娠结局相关，应在妊娠晚期加强监护２．提前老化胎盘功能组织结构受损，有效功能组织结构减少，导致脐血流减少，是造成其围生期发病率显著增加的病理基础。３．提前老化胎盘分泌Ｅ３和ＨＰＬ的功能无明显改变，说明提前老化胎盘仍有很强的代偿能力。５．胎盘内细胞凋亡增加是胎盘提前老化的发病机制之一。ＰＧＩ。能抑制体外培养滋养细胞的凋亡，在形态和功能上促进其分化，对滋养细胞有保护作用。参考文献参考文献１ＦｏｘＨ．．Ａｇｉｎｇｏｆｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａ．ＡｒｃｈＤｉｓＣｈｉｌｄＦｅｔａｌＮｅｏｎａｔａｌＥｄ．１９９７；７７：Ｆ１７１－Ｆ１７５２ＶｏｒｈｅｒｒＨ．Ｐｌａｃｅｎｔａｌｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｔｏｐｏｓｔｔｅｒｍｐｒｅｇｎａｎｃｙａｎｄｆｅｔａｌｐｏｓｔｍａｔｕｒｉｔｙ：ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｆｅｔｏｐｌａｃｅｎｔａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐｏｓｔｔｅｒｍｇｒａｖｉｄａ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ１９７５；１２３：６７—１０３２３ＶｉｎｃｅｎｔＲＡ，ＨｕａｎｇＰＣ，ＰａｒｍｌｅｙＴＨ．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒ４ＲｏｓｓｏＥＰｌａｅｎｔａａｓａｎａｇｅｉｎｇｏｒｇａｎ．ＣｕｒｒＣｏｎｃｅｐｔＮｕｔｒ１９７６；４：２３—４１．５ＫａｕｆｍａｎｎＥＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｌｖｉｌｌｏｕｓｔｒｅｅ．ＢｉｂｌＡｎａｔ１９８２；２２：２１）－３９６郎景和主译．威廉姆斯产科学．第２０版．世界图书出版公司．２００１年４月：９７．１２６７ＢａｅｚａＶａｌｅｎｚｕｅｌａＡＧａｒｃｉａＭｅｎｄｅｚＡ．Ｐｒｅｍａｔｕｒｅａｇｉｎｇｏｆｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａ．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｄｉａｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．ＧｉｎｅｃｏｌＯｂｓｔｅｔＭｅｘ．１９９５．６３：２８７—２９２８．ＱｉｎｌａｎＲＷ，Ｃ＇ｒｕｚＡＣ，ＢｕｈｉＷＣ，ｅｔａ１．ＣｈａｎｇｅｉｎｐｌａｃｅｎｔａｌｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｐｐＩＩ．ＰａｔｈｏｌｏｇｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＧｒａｄｅＩｌｌＰｌａｃｅｎｔａｌｃｈａｎｇｅｓ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃ０１，１９８２，１４４：４７１—４７３９ＣｈｉｔｌａｎｇｅＳＭ，ＨａｚａｒｉＫＴ，ＪｏｓｈｉＪＶ，ｅｔａ１．ＵｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｉｃａｌｌｙｏｂｓｅｒｖｅｄｐｒｅｔｅｒｍｇｒａｄｅＩＩＩｐｌａｃｅｎｔａａｎｄｐｅｒｉｎａｔａｌｏｕｔｃｏｍｅ［Ｊ］．ＩｎｔＪＧｙｎａｅｃｏｌＯｂｓｔｅｔ，１９９０，３１（４）：３２５—３２８．１０ＭｃＫｅｎｎａＤ，ＴｈａｒｍａｒａｔｎａｍＳ，ＭａｈｓｕｄＳ，ｅｔａ１．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｐｌａｃｅｎｔａｌｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎａｔ３６ｗｅｅｋｓ’ｇｅｓｔａｔｉｏｎ：ｍａｔｅｒｎａｌａｎｄｆｅｔａｌｏｕｔｃｏｍｅｓ．ＡｃｔａＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌＳｃａｎｄ［Ｊ］，２００５，８４（１）：７—１０．１１Ｇｒａｎｎｕｍ，ｐ．ａ．ｔ，Ｂｅｒｋｏｗｉｔｚ，Ｒ．Ｌ，ａｎｄｈｏｂｂｉｎｓ，Ｊ．Ｃ：Ｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｍａｔｕｒｉｎｇｐｌａｃｅｎｔａａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｆｅｔａｌｐｕｌｍｏｎｉｃｍａｔｕｒｉｔｙ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，１９７９，１３３：９１５－９１８．１２ＦｉｓｈｅｒＣＣ，ＧａｒｒｅｔｔＷ，ＫｏｓｓｏｆｆＧ，Ｐｌａｃｅｎｔａｌａｇｉｎｇｍｏｎｉｔｏｒｅｄｂｕｇｒａｙｓｃａｌｅｅｃｈｏｇｒａｐｈｙ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏ，１９７６，１２４：４８３，１３ＣａｒｒｏｌｌＢ；Ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒｕａｐｈｉｃｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａｉｎｖｉｔｒｏ．ＧｙｎｅｃｏｌＯｂｓｔｅｔ，１９８０，１１：２５６１４．ＦｉｓｈｅｒＣＣ，Ｇａｒｒｅｔｔｗ；ＫｏｓｓｏｆｆＧＰｌａｃｅｎｔａｌａｇｉｎｇｍｏｎｉｔｏｒｅｄｂｕｇｒａｙｓｃａｌｅｅｃｈｏｇｒａｐｈｙ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏ，１９７６，１２４：４８３，１５．ＣａｒｒｏｌｌＢ；Ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒｕａｐｈｉｃｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｐｌａｃｅｎｔａｉｎｖｉｔｒｏ．ＧｙｎｅｃｏｌＯｂｓｔｅｔ，１９８０，１１：２５１６ＰａｔｔｅｒｓｏｎＲＭ，ＨａｙａｓｈｉＲＨ，ＣａｖａｚｏｎｓＤ，ｅｔａ１．Ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｉｃａｌｌｙｏｂｓｅｒｖｅｄｅａｒｌｙｐｌａｃｅｎｔａｌｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｐｅｒｉｎａｔａｌｏｕｔｃｏｍｅ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，１９８３，１４７：７７３—７７７１７耿丽红，蔡霞，王冬梅等．妊高征胎盘中ＶＥＧＦ的表达和滋养细胞分泌功能的关系．医科大学学报，２００３，２６（５）：４６７．４６９１８陶雯琪，刘伯宁．胎儿生长迟缓孕妇胎盘绒毛体视学研究．中华妇产科．１９９５，３０（６）：３２６—３２９．１９ＳｍｉｔｈＳＣ，ＢａｋｅｒＰＮ，ＳｙｍｏｎｄｓＥＭ．ｅｔａｌＩｎｃｒｅａｓｅ．ｐｌａｃｅｎｔａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎ硕士学位论文ｐｌａｃｅｎｔａｌ：ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｉｎｔｒａｎｔｅｆｉｎｅｇｒｏｗｔｈｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，１９９７，１７７（１）：３９５，４０１２０ｌｌａｉｒｅＡＤ，ＢａＵｅｎｇｅｒＫＡ，ＷｅｌｌｓＳＲ，ｅｔａ１．Ｐｌａｃｅｎｔａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ。ＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ。２０００，９６：２７ｌ也筠２１ＡｘｔＲ，ＫｏｒｄｉｎａＡＣ，ＭｅｙｂｅｒｇＲ．ｅｔａ１．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｍｉｃｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｐｌａｃｅｎｔａｆｒｏｎｍｏｒｌｎａｌｓｎａｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅｇｒｏｗｈ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ．ＣｋｕｂＥｘｐＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，１９９６，８７：３８０—３２２ＩｓｈｉｈａｒａＮ，Ｍａｔｓｕｏｈ，ＭｕｒａｋｏｓｈｉＨ．ｅｔａ１．ｃｈａｎｇｅｉｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄＢｃｌ－２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｙｔｏｔｍｐｈｏｂｌａｓｔｓａｎｄｓｙｎｃｙｔｉｏｐｈｏ２３ＬｅｖｙＲ，ＳｍｉｔｈＳＤ，ＣｈａｎｄｌｅＫｅｔａ１．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｃｕｌｔｕｒｅｄｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓｉｓｅｎｈａｎｃｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａａｎｄｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄｂｙｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌｅｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，２联）ｏ，２７酲５）：（》８２一Ｃ９８８２４ＯｓｈｉｍａＭ，Ｄｉｎｃｈｕｋ雎，ＫａｒｇｍａｎＳＬ，ＯｓｈｉｍａＨ，ＨａｎｃｏｃｋＢ，ＫｗｏｎｇＥ，ＴｒｚａｓｋｏｓｊＭ．ＥｖａｎｓＪＦ，ＴａｋｅｔｏＭＭ１９９６ＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｌｙｐｏｓｉｓｉｎＡＰＣＡｖ”ｋｎｏｃｋｏｕｔｍｉｃｅｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ２（Ｃｏｘ－２）。Ｃｅｌｌ８７：８０３－－８０９２５ＰｒｅｓｃｏｔＳＭ，ＷｈｉｒｅＲＬ１９９６ＳｅＩｆｐｒｏｍｏｔｉｏｎ？ＩｎｔｉｍａｔｅｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎＡＰＣａｎｄｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＨｓｙｎｔｈａｓｅ－２．（》ｌｌ８７：７８３—穆６２６ＮｅｌｓｏｎＤＭ：ＪｏｈｎｓｏｎＲＤ，ＳｍｉｔｈＳ静，ｅｔａ１．Ｈｙｐｏｘｉａｌｉｍｉｔｓｄｉｆｉｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＨｓｙｎｔｈａｓｅ２ｉｎｃｕｌｔｕｒｅｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｆｒｏｍｔｅｒｍｈｕｎａｎｐｌａｃｅｎｔａ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，１９９９，１８０：８受；一９０２２７ＪｏｈｎｓｏｎＲＤ，ＳａｄｏｖｓｋｙＹ，ＧｒａｈａｍＣ．ＴｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｌｌｄＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＰｍｓｔａ越ａｎｄｉｎＨＳｙｎｔｈａｓｅ一２ＩｓＥｎｈａｎｃｅｄｉｎＴ】－ｏｐｈｏｂｌａｓｔｆｒｏｍＷｏｍｅｎｗｉｔｌｌＰｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ．髓ｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣ１ｉｎｉｃａｌＥ珏翻ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｔａｂｏｔｉｓｍ。１９９７，８２（９）：３０５９—３０６２２８ＷｏｏｄｗｏｒｔｈＳＨ，ＬｉＸＬｅｉＺＭ，ｅｉａｌ。１９舛Ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｅｎｚｙｍｅ￥ｉｎｐｌ糕ｎｔａｌａｎｄｄｅｃｉｄｕａｌｔｉｓｓｕｅｓｆｒｏｍｐｒｅｅｃｌａｍｐｔｉｃｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ：Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｍｓｓｉｏｎｏｆｔｈｉｎｍｂｏｘａｎｅ－Ａ。ｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅ．１Ｃ１ｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ．７８：１２２５－１２３１．２９Ｙｕｓｕｆ墨ＳｍｉｔｈＳＤ，Ｌｅｖｙ怒ｅｔａＬＴｈｒｏｍｂｏｘａｎｅＡ２ＬｉｍｉｔｓＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄＥｎｈａｎｃｅｓＡｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＣｕｌｔｕｒｅｄＨｕｍａｎＴｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓ．ＰｅｄｉａｔｒｉｃＲｅｓｅａｒｃｈ，２００１．５０：２∞一２０９３０ＭｉｌｌｓＪｋＤｅｒＳｉｍｏｎｉａｎＲ，Ｒａｙｍｏｎｄ＆ｅｔａ１．Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎａｎｄｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅｃｈａｎｇｅｓｐｒｅｄａｔｉｎｇｃｌｉｎｉｃａｌｏｎｓｅｔｏｆｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ．ＪＡＭＡ，１９９９．２８２：３５融３６２３ｌＨａｖａｒｒａ谶，Ｌａｒａ—ＧｏｎｚｉａｌｅｋＧｏｎｚａｌｅａ．ＧｌｅａｓｏｎＡ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｓｔａｃｙｅｌｉｎ／ｔｈｒｏｍｂＯｘａｎｅｃｈａｎｇｅｉｎｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓｔｈａｔａｒｅｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄｂｙｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ．ＡｍＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ。２缓玲．１８８：９８６。９９２３２ＧａｂｒｉｅｌＰｏｚｎｅｒＲ，ＮｅｇｒｏｔｔｏＳ，Ｄ＇Ａｔｒｉ腿ｅｔａ１．Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｐｒｅｖｅｎｔｓｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００５Ｍａｒ２１；４１参考文献３３ＹｊｎｏＴ，ｌｔｏｈＹ＇Ｋｕｂｏｔａｔｅｔａ１．ＡＰｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎＡｎａｌｏｇＰｒｅｖｅｎｔｓＲａｄｉｏｃｏｎｔｒａｓｔＮｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｖｉａＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＣｙｃＨｃＡＭＰＲｅｓｐｏｎｓｅＥ１ｅｍｅｎｔＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ．ＡｍｊＰａｔｈｏｌ，∞０５，Ｍａｙ；１６６：１３３３，１３４２。３４ＣｕｒｌｅｒＮＳ．Ｇｒａｖｅｓ。Ｄｅａｌ＆ＬａＦｌｃｕｒＢＪ，ｅｔａ１．Ｓｔｒｏｍａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｃｏｎｆｅｒｓａｌｌａｎｆｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｅｆｆｅｃｔｔｏｃｏｌｏｎｉｃｅｐｉｔｈｅｌ蕊ｃｅｌｌｓ。ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００３．１５；６３（８）：１７４８－５１３５Ｙａｎｏ写Ｉｔｏｈ￥Ｋｕｂｏ坛嚣娃矗Ａｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎａｎａｌｏｇｂｅｒａｐｒｏｓｔｓｏｄｉｕ搬搿ｔｅｎｕａｔｅｓｒａｄｉｏｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉａ—ｉｎｄｕｃｅｄＬＩ￡．ＰＫｌｃｅｌｌｓｉｎｊｕｒｙ．嵇ｄｎｅｙＩｎｔ．２００４，６５ｒ５１：１６５４．６３。３６杨锈强主编＋，Ｌ科攀＋筵６版。人蔑受生出舨毂：９４－９５３７承杰主编．妇产科攀．第６敝，人民卫生出版被３８刘镶，常才。，１２９６例正常胎盘超声分级与孕周的关系。中国影像学披术２０００，１６（１２）：１０９２－４。３９ＫａｓｚｎｉｃａＪＭ，ＰｅｔｃｕＥＢ．Ｐｌａｃｅｎｔａｌｃａｌｃｉｕｍｐｕｍｐ：ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｂａｓｅｄｅｖｉｄｅｎｃｅ．Ｐｅ献ａｔｒＰａｔｈｏｌＭｏｌＭｅｄ［Ｊ］。２００３；２２（３）：２２３．７钧ＰｉｅｒｃｅＢＴ，ＭａｒｔｉｎＬＳ．ＨｕｍｅＲＦ，ｅｔａｌ。Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｔｅｎｔｏｆｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃｖｉｌｌｏｕｓｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｓｔｉｌｌｂｉｒｔｈｉｎａｎｅｕｐｌｏｉｄａｎｄｅｕｐｌｏｉｄｆｅｔｕｓｅｓ［Ｊ］。ＪＳｏｃＧｙｎｅｃｏｌＩｎｖｅｓｔｉｇ，２嗽：９缁）：２９０—３．４１李玮景，王自能，黄以萍．妊擞４０鼹膀伴胎儿过熟综合征胎盘超微结构电镜观察撒南大学学报。自然科学与医学版，１９９９，２０（２）：６碡２ＳａｕＡ．ＳｅｅｄＥＬａｎｇｆｏｒｄ飘Ｉｎｔｒａｏｂｓｅｒｖｅｒａｎｄｉｎｔｅｒｏｂｓｅｒｖｅｒｖａｒｉａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｓｏｎｏｇｒａｐｈｉｃｇｒａｄｉｎｇｏｆｐｌａｃｅｎｔａｌｍａｔｕｒｉｔｙ．ＵｌｔｒａｓｏｕｎｄＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ［Ｊ］，２０４，２３（４）：３７４＊７。４３申滚、醅药丹浇疫缀织纯学染色豹怒蠢方法研究国．生钧缀学工程学杂惑．】９９３；１０（４）：２８１．２８４霹４孛淤：受疫缀强染色定量方法研究ｇ秘缀臌与分子免疫学焱悫（擎竞隆挠豁通讯）．１９９４；１０∽：３３—３５４５申洪：免疫缎织化学染色定缀方法研究（ＩＩｌｌ中国组织化学与细胞化学杂志１９９５；４（１）：８９－９２４６ＴｅａｓｄａｌｅＥＨｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｉｎｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｅｖｅｒｅｉｎｔｒａｎｔｅｒｉｎｅｇｒｏｗｔｈｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ。ｐｌａｃｅｎｔａ，１９８７，髫秘：１１９４７雀擞红，封全灵，杨绱敏等斑娠高趣蕊综台籁患者撷－清入胎盘箍乳索测定与胎擞病理检奄．郑州大学学报．２０００，３７（６）：８３３４８ＫｉｍＫＭ。Ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ。ＳｃａｎｎｉｎｇＭｉｅｒｏｓｃ，１９９５，９（４）Ｉ：１１３７．７５；４９ＰｒｏｕｄｆｏｏｔＤ，ＳｋｅｐｐｅｒＪ，ＨｅｇｙｉＬｅｔａ１．ＡｐｏｒＩｔｏｓｉｓＲｅｇｕｌａｔｅｓＨｕｍａｎＶａｓｃｕｌａｒＣａｌｃｉｆｉｃａｆｉｏｎｔｎＶｉｔｒｏ，ＣｉｒｃｕｌａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ，２０００’８７：１０５５。５０ＮｅｌｓｏｎＤＭ＋Ａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｈａｎｇｅｏｃｃｕｒｉｎｓｙｎｃｙｔｉｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｏｆｈｕｍａｎｐｌａｃｅｎｔａｖｉｌｌｉｗｈｅｒｅｆｉｂｒｉｎｔｙｐｅｆｉｂｒｉｎｏｌｄｉｓｄｅｐｏｓｉｔｅｄａｔｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｉｔｉｅｓｉｎｔｈｅｖｉｌｌ４２硕士学位论文ＯＵＳｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ．Ｐｌａｃｅｎｔａ，１９９６，１７（７）：３８７—３８９５１ＶａｉｎｉｏＭ，ＲｉｕｔｔａＡ，ＫｏｉｖｉｓｔｏＡＭ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ，ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅＡａｎｄｔｈｅｅｆｆｅａｏｆｌｏｗ—ｄｏｓｅＡＳＡｉｎｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓａｔｈｉ曲ｒｉｓｋｆｏｒｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．ＡｃｔａＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌＳｃａｎｄ，２００４，８３（１２）：１１１９—１１２３英文缩写ＦＣＳＤＭＥＭＣＫ７ＤＡＢＴｄＴ酶ＰＢＳＥＬＡＩＳＡⅡ】ＮＥＬＰＧｌ２ＴＸＡ２ＦＧＲＥ３附录附录中英文缩写略词对照表（ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓ）英文全称中文全称ｆｅｔａｌｃａｌｆｓｅｌ＇ｕｍ胎牛血清Ｄｕｌｂｅｃｅｏｍｏｄｉｆｉｅｄｅａｇｌｅ’Ｓｍｅｄｉｕｍ杜氏改良培养基ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ７细胞角蛋白７ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ二氨基联苯胺ＴｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌＴｒａｎｓｆｅｒａｓｅ末端脱氧核糖核酸转移ｐｂｏｓｐｈａｓｅｂｕｆｆｅｒｓａｌｉｎｅ磷酸盐缓冲液ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｄｅｎｔａｓｓａｙ酶联免疫吸附试验ｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ．ｍｅｄｉａｔｅｄ末断脱氧核糖转移酶介Ｄｕｔｐｎｉｃｋ．ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｓｔａｉｎｉｎｇ导细胞凋亡检测Ｐｒｏｔａｃｙｃｌｉｎ前列环素Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ血栓素ＡＦｅｔａｌｇｒｏｗｔｈｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ胎儿生长受限ｅｓｔｆｉｏｌ雌三醇硕士学位论文成果发表论文情况１．张莉英，余艳红，胡茂兰．胎盘提前老化的超声征象与妊娠结局的关系（附３０例临床分析）．第一军医大学学报，２００５：２５‘（３）：３１８．３２０２．张莉英，余艳红，胡茂兰，等．胎盘成熟度分级与脐血流及妊娠结局的关系．实用妇产科杂志，２００５；５致谢致谢衷心感谢我的导师余艳红教授三年来在学业和生活上对我无微不至的关怀和教导，她渊博的知识、敏锐的洞察力、严谨的科学态度，不解努力的的敬业精神和高尚的做人原则，是我终生学习的榜样。本课题的设计、实施及论文的书写都是在导师的悉心指导下完成的，浸透了导师的－Ｄ血。正是导师的耐心教诲、严格要求和不断鼓励，才使我能够最终完成课题。感谢南方医院妇产科超声室的胡茂兰教授、陈翠华老师、孙秀云老师在实验对象的超声诊断方面的严格把关，感谢妇产科刘国炳副主任、钟梅教授、全松副教授、苏桂栋主治医生在临床工作给予的指导和帮助。感谢妇产科全体人员对我课题给予的各种帮助和协作。感谢生物教研室的全体老师为实验的进行提供的各种支持和无私帮助。感谢生物教研室程宝鸾教授、病理教研室的申洪教授、妇产科庞战军博士在实验实施过程给予的热心指导和帮助，感谢一起做实验的谭秋岳同学、李树清博士在实验中给予的勉励和支持。感谢师妹周俊、万淑梅、黄莺莺等在实验取材等方面给予的支持和帮助。感谢研究生队领导三年来对我的教育、关心和爱护。最后还要特别感谢我的父母、丈夫和儿子，他们是我最坚强的后盾，是他们理解、支持和鼓励，使我顺利完成了学业。硕士学位论文南方医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属南方医科大学。本人承诺承担本声明的法律效果。储鹳：删久醐：删年６月，，日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南方医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）：１、保密口，在一年解密后适用本授权书。２、不保密口。作者签名：冉夕日期：ｚ砑年‘月ｆｊ日导师签名：；不可铺夕屯乙／日期：柳年ｆ月ｆ岁日４＂７