６８ 中国兽医杂志２０１０年（第４６卷）第７期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 盐酸沃尼妙林预混剂在猪体内的药代 动力学和生物等效性 杨 芳 ，李金明 ，岳永波 ，曹兴元 （１．河北远征药业有限公司，河北石家庄０５００４１；２．中国农业大学动物医学院，北京海淀１００１９３） 中图分类号：￥８５９．７ 文献标识码：Ｂ 盐酸沃尼妙林（ｖａｌｎｅｍｕｌｉｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）是新 一代截短侧耳素（Ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ）半合成动物专用抗 生素，与泰妙菌素同属于二萜烯类。国外主要用于 防治猪、羊、牛及家禽的支原体病和革兰阳性菌感 染，具有抗菌谱广、抗菌活性强、药动学特征优良、残 留低、使用安全等特点口 。Ｋａｒｌｓｓｏｎ Ｍ报道，猪痢 疾密螺旋体及对结肠菌毛样螺旋体已对泰妙菌素产 生耐药性，而对沃尼妙林依然敏感＿２］。沃尼妙林 是１９８４年首先由Ｓａｎｄｏｚ公司的Ｂｅｒｎｅｒ Ｈ等利用 Ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ为原料合成的＿＿３ｊ，其后Ｎｏｖａｒｔｉｓ公司 将其做成预混剂，商品名为Ｅｃｏｎｏｒ＠，现已在多个 国家上市 ］。本品在国内尚未上市使用。本文通 过对进口的盐酸沃尼妙林预混剂（１０ ）和自行研 制的盐酸沃尼妙林预混剂（１０ ）在猪体内的药代 动力学和生物等效性研究，为ｆ临床合理使用自行 研制的盐酸沃尼妙林预混剂（１０ ）提供理论 依据。 ｌ试验材料 １．１药品与试剂盐酸沃尼妙林标准品，１０ ｍｇ规 格，由Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ提供，编号为ＢＰ９０７ －Ｆ６７０２９；受试药品，盐酸沃尼妙林预混剂，１０ ， 自行研制。参比药品，盐酸沃尼妙林预混剂， １０．０％，进口。水，色谱纯，Ｍｉｌｌｉ—Ｑ过滤；乙腈、甲 醇，Ｄｉｋｍａ公司；磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸 （８５ ），分析纯，北京化学试剂公司。 １．２仪器设备高效液相色谱仪，美国Ｗａｔｅｒｓ公 司；调速多用振荡器，ＨＹ一４型，常州同华电器有限 公司；离心机，ＬＤ４—２Ａ，北京医用离心机厂；旋涡混 合仪，ＷＨ一１型，上海沪西分析仪器厂。３Ｐ９７药代 动力学程序软件，中国药理学会数学专业委员会 编制。 １．３试验动物健康的长白一大约克杂交猪１Ｏ头， 体重１６ ｋｇ￣２Ｏ ｋｇ，给药前饲喂２周，以适应环境。 收稿日期：２００９—０４—１５ 作者简介：杨芳（１９７１一），女，高级工程师，硕士，从事动物药品研 发，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｆａｎｇＯ０７２００１＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ＣＹｌ 通讯作者：曹兴元，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｘｙ＠ｃａｕ．ｅｄｕ．ｅｎ 文章编号：０５２９—６００５（２０１０）０７－００６８—０２ １．４溶液配制 盐酸沃尼妙林标准贮备液：准确称 取１０．０ ｍｇ盐酸沃尼妙林标准品于１０ ｍＬ棕色容 量瓶中，用乙腈溶解并定容。密封，用铝箔包住，４℃ 避光保存。 磷酸缓冲液（ｐＨ ２．５）：准确称取８．ｏ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４ 和３．０ ｇ Ｋ：ＨＰＯ ，加水溶解并定容至１ ０００ ｍＬ，用 磷酸调ｐＨ至２．５。 流动相：分别量取５００ ｍＬ磷酸缓冲液，４００ ｍＬ 乙腈，２００ ｍＬ甲醇，混合后加１００ ｍＬ纯水，０．２ ｍ 滤膜过滤。配制前各组分要真空脱气，配制后不能 再脱气。使用时密封，以防止流动相中有机溶剂 挥发。 ２试验方法 ２．１色谱条件 色谱柱：ＳＹＭＭＥＴＲＹ－Ｃ１８—５ ｍ～ ２５０×４．６ ｍｍ；ＳＰＥ小柱，Ｄｉｋｍａ公司；检测器：光二 极管阵列检测器（ＰＤＡ）；检测波长：２１０ ｎｍ；流动 相：磷酸缓冲液：乙腈：甲醇：水一５００：４００： ２００：１００；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；进样体 积：１００ Ｌ。 ２．２标准曲线绘制 用流动相将盐酸沃尼妙林的 标准贮备液稀释成０．１ ｇ・ｍＬ－。、０．２ ｇ・ｍＬ一、 １／－￣ｇ・ｍＬ 、２ ｇ・ｍＬ～ 、５ ｐ－ｇ・ｍＬ一 、１Ｏ ｇ・ ｍＬ 和５０ ｇｇ・ｍＬ 的标准工作溶液，各取１００ Ｌ进ＨＰＬＣ分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐 标绘制标准曲线。 ２．３ 给药和采集本试验采用双处理、两周期随机 交叉试验设计，将ｌ０头猪随机分成两组，每组５头， 给药前禁食ｌ２ ｈ，并称量体重。第一组第ｌ周期给 予自行研制的盐酸沃尼妙林预混剂（１０ ），第２周 期给予进口的盐酸沃尼妙林预混剂（１Ｏ ）；第二组 第１周期给予进口的盐酸沃尼妙林预混剂（１０％）， 第２周期给予自行研制的盐酸沃尼妙林预混剂 （１０ ）。以２Ｏ ｍｇ・ｋｇ 体重剂量经胃管一次性给 予盐酸沃尼妙林预混剂（１０．０ ）。药物用水冲服， 再以适量的水冲洗胃管，确保给药量精确。两个周 期之间间隔２周。 口服给药后分别在Ｑ．０８、０．２５、０．５、１、２、３、４、 ６、８、ｌ０、１２ ｈ和２４ ｈ于前腔静脉采血１０ ｍＬ，置于 聚丙烯离心管中，３ ８００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，吸取上 层血清放在聚丙烯管中，密封，避光，一２０℃保存 待用。 ２．４ 血清样品处理与测定 用５ ｍＬ甲醇活化 ＳＰＥ柱（ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔｅ ３００ ｍｇ／６ ｍＬ），再用５ ｍＬ水平 衡ＳＰＥ小柱。精确量取血清样品２ ｍＬ，加入２ ｍＬ 甲醇，涡旋１ ｍｉｎ后３ ８００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，上清 液转入另一干净试管，氮气吹去甲醇（溶液体积小于 ２ ｍＬ），水相溶液留待净化。将样品过柱，自然流 ，用５ ｍＬ ５Ｏ 甲醇水洗涤，５ ｍＬ纯甲醇洗脱，氮 气吹干，１ ｍＬ流动相复溶，过０．２ ｍ或０．４５ ｍ 滤膜，上机分析。血清中沃尼妙林的浓度可用下列 公式来计算： 、， Ａ×Ｃｓ×Ｖ 天一 式中：Ｘ：血清中沃尼妙林的含量（ ｇ・ｍＬ ）； Ａ：血清中沃尼妙林的峰面积；Ａｓ：标准工作液中沃 尼妙林的峰面积：Ｃｓ：标准工作液中沃尼妙林的浓 度（Ｆｇ・ｍＬ ）；Ｖ：（溶解残余物所得溶液的体积 （ｍＩ ）；Ｗ：样品的体积（ｍＬ））。 ２．５数据处理药时数据采用中国药理学会数学 专业委员会编制的３Ｐ９７药代动力学程序软件在微 机上进行曲线拟合，采用Ｍａｒｑｕａｒｄｔ法对１、２、３房 室分别以权重１、１／Ｃ、１／Ｃ ３种情况进行计算。 ＡＩＣ（Ａｋａｉｋｅ Ｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ）值愈小，则拟 合愈好。同时计算生物等效性。 ３ 结果 ３．１标准曲线在浓度为０．１０ Ｆｇ・ｍＩ ～５Ｏ ｇ・ ｍＬ 范围内沃尼妙林峰面积与浓度呈线性相关，其 回归方程为：Ｙ一６５．６Ｘ＋２５８００，相关系数ｒ一 ０．９９９６，若分析样品的浓度不在这个线性范围内，则 将分析物浓缩或稀释。 ３．２ 定量限和检测限 取空白的血清样品，１Ｏ个 平行，按上述样品前处理的方法处理，测得基线噪音 值，根据１ｏ个空白样品的基线噪音值求其平均值， 按信噪比Ｓ／Ｎ一３为检测限，求得检测限为０．０５ Ｆｇ・ｍＬ ，以Ｓ／Ｎ＝６为定量限，求得定量限为 ０．１Ｏ／￣ｇ・ｍＬ ，同时对ｏ．１Ｏ ｇ・ｍＬ 进行了添加 回收试验，回收率≥８Ｏ ，符合残留分析的准确度和 精密度的要求。 ３．３ 回收率及精密度 分别取空白血清２．ｏ ｍＩ 添加一定体积的标准添加溶液（用乙腈稀释盐酸沃 尼妙林标准贮备溶液配制而成），使血清中沃尼妙林 的浓度为０．１０ ｇ・ｍＬ、１．０ ｇ・ｍＬ 和５．０ Ｆｇ・ ｍＬ。按上述样品前处理方法分别处理后ＨＰＬＣ 测定，一日内每个浓度取５个平行样品，分别测定， 平均回收率范围在８２．９ ～９１．５ 之间，日内变异 系数范围在５．１％～１１．２ 之间。每个浓度隔日重 中国兽医杂志２０１０年（第４６卷）第７期 ６９ 复测定５次，平均回收率范围在８６．９ ～９６．５ 之 间，日间变异系数范围在５．１ ～９．６ 之间。可见 回收率高，重复性好。沃尼妙林的色谱峰峰形尖锐 且对称，样品中杂质分离良好，无明显干扰峰。 ３．４血药浓度及药代动力学参数 猪口服盐酸沃 尼妙林预混剂２Ｏ ｍｇ・ｋｇ一 后，分别在不同时间采 血，样品经前处理后ＨＰＬＣ检测，口服后血清样品 在２４ ｈ后血药浓度低于检测限。药一时曲线见图１， 对药一时曲线下面积（ＡＵＣ）进行生物等效性分析 （双单侧￡检验），受试品ＡＵＣ ９０ 置信区间在参比 品ＡＵＣ ８６．８ ～１０５．５ 的范围内，主要药代动力 学参数见表１。口服给药的药一时数据符合有吸收 的二室开放模型。 ３ 墨 饕 鲁 图１猪口服盐酸沃尼妙林预混剂后的药一时曲线 表ｌ猪口服２０ ｍｇ・ｋｇ 体重盐酸沃尼妙林 预混剂药代动力学主要参数 ４讨论 本试验采用高效液相色谱法测定血浆中沃尼妙 林的浓度，回收率高，重复性好；沃尼妙林的色谱峰 峰形尖锐且对称，样品中杂质分离良好，无明显干扰 峰。通过对自行研制的盐酸沃尼妙林预混剂（１０ ） 进行了猪体内药代动力学生物等效性研究。研究采 用双周期、随机分组、自身交叉试验设计。猪口服 ２０ ｍｇ・ｋｇ 体重盐酸沃尼妙林后，药一时数据符合 二室开放模型，受试组消除半衰期为２．８５ ｈ，达峰 时间为３．４５ ｈ，达峰浓度为１。６Ｏ ｇ・ｍＬ，药时曲 线下面积为１４．４２ Ｆｇ・ｈ・ｍＬ；参比组消除半衰期 ７０ 中国兽医杂志２０１０年（第４６卷）第７期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 盐酸林可霉素和硫酸庆大霉素对猪链球菌 体外联合抗茵试验 徐 刚，李晓云，王 敏，李艳华 （东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨１５００３０） 中图分类号：￥８５９．７ 文献标识码：Ｂ 文章编号：０５２９ ６００５（２０１０）０７—００７０—０３ 猪链球菌（Ｓ￡ｒｅ户￡０ｆ０ｃｃ“ｓ ｓｕｉｓ）是一种危害现代 养猪场分离的猪链球菌２６株。质控菌株为金黄色 养猪业的重要病原，抗菌药在预防和治疗猪链球菌 葡萄球菌ＡＴＣＣ２９２１３购自中国兽药监察所。 病中起着重要的作用。 培养基：脑心浸液医品（ＢＨＩＡ）培养基，脑心浸 盐酸林可霉素对常见的需氧革兰阳性菌有较强 液（ＢＨＩ）液体培养基，购自北京陆桥生物技术有限 的抗菌活性，亦可作为青霉素过敏患畜的替代药物， 责任公司。 在抗菌药物分类上属于第３类快效抑菌剂；硫酸庆 盐酸林可霉素：南阳普康药业有限公司，批号 大霉素为氨基糖苷类抗生素，对各种革兰阳性、阴性 ２００８１００１１１１；硫酸庆大霉素：烟台只楚药业有限公 细菌都有良好的抗菌作用，在抗菌药物分类上属于 司，批号０９０２ｌ０６２。抗菌药用双蒸水配制成５ｌ２０ 第２类静止期杀菌剂。理论上，第３类与第２类合 ／＊ｇ／ｍＬ的贮存液，分装于１．５ ｍＬ的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管， 用可获得相加或协同作用，两药均作用于细菌核糖 置一２０℃冰箱贮存备用。 体，抑制细菌蛋白质的合成，并间接导致细菌细胞 １．２ 方法 膜、细胞壁的缺损。两药联用可快速抑制细菌蛋白 １．２．１ 最低抑菌浓度（ＭＩＣ）测定 采用微量肉汤 质合成全过程而杀菌。Ｂｏｚｈｋｏｖａ Ｇ等ｌ＿１］（２００１）报 稀释法，分别测定了盐酸林可霉素和硫酸庆大霉素 道，盐酸林可霉素和硫酸庆大霉素体外联合应用对 对２６株猪链球菌的ＭＩＣ值。 部分金黄色葡萄球菌、无乳链球菌具有协同作用，但 （１）将猪链球菌分离株接种于含５ 牛血清的 其是否对猪链球菌具有协同作用还未见报道。 脑心浸液培养管中，３７℃孵育过夜。调整菌液浊度 本试验通过联合药敏试验和两者联用的体外药 ０．５麦氏单位即１．５×１０ ＣＦＵ／ｍＩ ，然后将菌液作 效动力学试验，测定盐酸林可霉素和硫酸庆大霉素 １：１ ０００倍稀释。（２）取无菌９６孔微孑Ｌ板，加人上 体外单用及联合应用对猪链球菌分离株的抗菌作 述菌稀释液，每排除第１孔加１８０／＊Ｌ外，２～１２孑Ｌ 用，为临床合理用药提供依据。 均加１００ Ｌ。继之于第１孔加入抗生素原液２Ｏ Ｌ １材料与方法 （５ １２０／￣ｇ／ｍＩ ），充分混合后吸出１００ Ｌ加入第２ １．１ 材料 菌株：２００４年～２００６年从东北三省各 孔巾，同法系列二倍稀释至第１１孔，使药物浓度从 ５１２ ｌ－＊ｇ／ｍＬ至０．５／＊ｇ／ｍＬ，第１２孑Ｌ不含抗生素，为 收稿日期：２００９ ０５ ２１ 细菌阳性对照孔。混匀后盖好，于３７℃孵育１８～２４ 基金项目：“十一五”国家科技支撑计划项目（２００６ＢＡＤ３１Ｂ０８ ｈ。（３）以肉眼观察，药物最低浓度孔无细菌生长者 ０７） 作者简介：徐刚（１９８３），男，硕士生，研究方向为体内外药动一药 （细菌生长完全抑制），即为受试菌的ＭＩＣ。药敏结 效学，Ｅ—ｍａｉｌ：５７３８８８７３８＠ｌ６３．ＣＯ１１１ 果参照美国临床实验室标准（ＣＬＳＩ／ＮＣＣＬＳ，２００５） 通讯作者：李艳华，Ｅ—ｍａｉ］：ｌｉｙａｎｈｕａｌ９７０＠ｌ ６３．ＣＯＩｎ 中链球菌的突变点（ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ）进行判断，最低抑 为２．７７ ｈ，达峰时间为３．０９ｈ，达峰浓度为１．６７ ｇ・ 参考文献： ｍＬ一，药一时曲线下面积为１３．８７／＊ｇ・ｈ・ｍＬ ，表 ［１］吴广辉，方炳虎，刘小艳，等．新兽药盐酸沃尼妙林研究进展及 明盐酸沃尼妙林在动物体内吸收迅速，达峰快，血中 使用［Ｊ］．兽医导刊，２００７（１１）：２９—３０． 半衰期短，此外受试组和参比组各项参数平均值比 ［２］ Ｋａｒｌｓｓｏｎ Ｍ，Ｇｕｎｎａｒｓｓｏｎ Ａ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ａ．Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ 较差异不显著。对药一时曲线下面积（ＡＵＣ）进行 ｐｌｅｕｒｏｎｍｕｔｉｌｉｎｓ ｉｎ ｂｒａｃｈｙｓｐｉａ（ｓｅｒｐｕｌｉｎａ）ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ［Ｊ］． Ａｎｉｍ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｖ，２００１，２（１）：５９－６５． 生物等效性分析（双单侧ｔ检验），受试品ＡＵＣ ９０ ［３］ Ｂｅｒｎｅｒ Ｈ，Ｖｙｐｌｅｌ Ｈ．Ｐｌｅｕｒｏｍｕｔｉｌｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅ 置信区间在参比品ＡＵＣ ８６．８ ～１０５．５ 的范围 ［Ｐ］．ＥＰ：０１ ５３２７７，１９８５． 内，表明二者具有生物等效性。 Ｅ４］ 郭腾．动物专用抗生素类新药沃尼妙林研究进展［Ｊ］．兽药与饲 料添加剂，２００３，８（５）：８－１１．
